HPLC Parmak İzi ve Çoklu Değerlendirme Yöntemine Dayalı Ge Hua Kalite Kontrolü Üzerine Araştırma
Pueraria Flos, baklagiller familyasından bir bitki olan Pueraria lobata (Willd.) Ohwi veya Pueraria thomsonii Benth'nin kurutulmuş çiçek tomurcuğudur. Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata veya Epinephelus patchouli olarak da bilinir. "Ünlü Doktorların Kayıtları", "Dian Nan Ben Cao" ve "Ben Cao Gang Mu "da kaydedilmiştir ve ayıltıcı, rutubet ve ısıyı giderici, sıkıntı ve mide bulantısını hafifletici etkileri vardır. Modern araştırmalar Pueraria lobata'nın detoksifikasyon, kan şekerini düşürme, kan lipidini düşürme, antioksidan, miyokardiyal koruma ve östrojen benzeri özelliklere sahip olduğunu göstermiştir. Detoksifikasyon, karaciğer koruma, kan şekeri ve kan lipid düşürme, anti osteoporoz ve bağışıklık düzenleme gibi sağlık ürünlerinin geliştirilmesi için yaygın olarak hammadde olarak kullanılmaktadır. Kimyasal bileşim çalışmaları, Pueraria lobata'nın esas olarak flavonoidler, terpenler, steroidler ve kumarinler içerdiğini göstermiştir; bunlar arasında Puerarin (Pu), Daidzin (Da), Daidzein (Dae) bulunmaktadır, Genistin (Ge), Genistein (Gee), Kakkalide (Ka), Glycitin (Gl), Tectoridin (Td), Tectorigenin (Tg) ve Tectorigenin-7-O-xylosylglucoside Pueraria lobata'nın ana bileşenleridir. Tx) ana kimyasal bileşendir. Ge Hua esas olarak Güneydoğu Asya'da, en geniş dağılıma ise Çin'de sahiptir. Shaanxi, Sichuan, Guangxi ve Yunnan, Ge Hua'nın ana üretim alanlarıdır. Bakanlık tarafından yayınlanan standartlar ve çeşitli eyaletlerdeki geleneksel Çin tıbbı standartları, yabani kudzu ve pembe kudzunun çiçek tomurcuklarının Çin'deki kudzu çiçeklerinin iki tıbbi otantik kaynağı olduğunu açıkça belirtmiştir. Bunları ayırt etmek için birincisine kudzu çiçeği, ikincisine ise pembe kudzu çiçeği denmektedir. Araştırma grubumuz, ikisi arasında kimyasal bileşim açısından önemli farklılıklar olduğunu tespit etmiştir. Şu anda, Ge Hua için yalnızca departman ve yerel standartlar bulunmaktadır ve çeşit tanımlamasında karışıklık vardır. Kalite kontrol göstergeleri sadece çok basit olan özellikleri, tanımlamayı ve denetimi içermektedir. Kalite kontrol standartlarının iyileştirilmesine ilişkin herhangi bir rapor bulunmamaktadır.
Parmak izi spektrumu, geleneksel Çin tıbbının kalite değerlendirmesinde yaygın olarak kullanılan kapsamlı, makroskopik ve ölçülebilir bir kromatografik tanımlama yöntemidir. Geleneksel Çin tıbbındaki kimyasal bileşim özelliklerindeki farklılıkları kapsamlı bir şekilde yansıtabilir ve böylece özgünlük ve kalite arasında ayrım yapma hedefine ulaşabilir. Bu nedenle, bu çalışmada farklı kökenlerden gelen Pueraria lobata'nın parmak izi spektrumlarını oluşturmak için HPLC kullanılmıştır; Aynı zamanda, Pueraria lobata'daki Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg ve Tx içeriğinin belirlenmesi, farklı üretim alanlarından Pueraria lobata tıbbi malzemelerinin kalite farklılıklarının sistematik olarak değerlendirilmesi, Pueraria lobata kalitesinin kapsamlı ve sistematik kontrolü için ampirik temel sağlanması ve Pueraria lobata'nın yüksek kaliteli germplazm kaynaklarının seçimi ve ıslahı için referans sağlanması için bu temelde bir test çoklu değerlendirme analiz yöntemi (QAMS) oluşturulmuştur.

 

Deneyde 200-400nm'de 10 flavonoidin tam dalga boyu taramasını gerçekleştirmek için bir diyot dizisi dedektörü kullanılmıştır. Sonuçlar Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg ve Tx'in UV spektrumlarının 256-274nm dalga boyunda maksimum absorpsiyon ile benzer olduğunu göstermiştir. 265nm dalga boyu koşulu altında, test edilen 10 bileşenin iyi bir taban çizgisi ayrımına ve kantitatif analiz gereksinimlerini karşılayabilecek kararlı bir taban çizgisine sahip olduğu bulunmuştur. Deneyde ekstraksiyon çözücüleri olarak 75% etanol; 95% etanol; 75% metanol ve 25'er mL metanol kullanılmıştır. Ekstraksiyon çözücüsü olarak metanol seçildiğinde, kromatografik piklerin sayısı uygun ve ayrılması kolay olmuştur. Deneyde ayrıca ultrason ve termal reflü işleme yöntemleri de incelenmiş ve sonuçta basit ve etkili bir yöntem olan 30 dakikalık ultrason seçilmiştir. Deneyde ayrıca metanol su, asetonitril su, asetonitril-0.2% fosforik asit sulu çözeltisi ve asetonitril-0.2% formik asit sulu çözeltisi gibi mobil faz sistemleri de incelenmiştir. Asetonitril 0.2 fosfat sulu çözeltisi gradyan elüsyon sisteminin nihai seçimi, iyi ayırma etkisi ve kuyruklanmada önemli iyileşme ile sonuçlanmıştır.
Pueraria lobata'nın kapsamlı kalite kontrolünü kolaylaştırmak için, deneyde QAMS içeriğinin belirlenmesi için gösterge bileşenleri olarak, ana kimyasal bileşenler olarak Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg ve Tx dahil olmak üzere, net aktiviteye ve yüksek içeriğe sahip çeşitli temsili bileşenler seçilmiştir. Her bir bileşenin içeriğinin ölçülmesi, her bir bileşenin kromatografik ayrımı ve referans standartların fiyatı ve bulunabilirliği sonuçlarından, Ka'nın yüksek bir içeriğe, iyi bir ayırma etkisine, spektrumda kolay tanımlamaya sahip olduğu ve diğer bileşen kromatografik piklerinin göreceli alıkonma süresinin hesaplanmasına ve kromatografik piklerin tanımlanmasına elverişli olan spektrumun orta konumunda olduğu görülebilir. Ka kararlı özelliklere sahiptir, ucuzdur ve elde edilmesi kolaydır ve kan lipitlerini ve kan şekerini düşürme, mikrosirkülasyonu iyileştirme ve etanol dehidrojenazı aktive etme aktivitesine sahiptir. Bu nedenle Ka, bu çalışmada QAMS içeriğinin belirlenmesi için referans materyal olarak seçilmiştir.
Bu deneyde oluşturulan parmak izi spektrumu, Pueraria lobata'nın kimyasal bileşim bilgilerini etkili bir şekilde karakterize edebilmektedir. Parmak izi spektrumuna dayalı olarak oluşturulan QAMS yöntemi, Pueraria lobata ve Pueraria lobata'daki Pu, Da, Gl, Tx, Ge, Td, Dae, Ka, Gee ve Tg ana aktif bileşenlerinin içeriğini etkili bir şekilde belirleyebilir ve bu da Pueraria lobata tıbbi malzemelerinin genel kalite bilgilerini kapsamlı bir şekilde yansıtabilir. İçerik belirleme sonuçlarına ve kümeleme ısı haritasına göre, Pueraria lobata ve Pueraria lobata'nın iki kategoriye ayrılabileceği sezgisel olarak görülebilir. Farklı üretim alanlarından gelen 20 parti Pueraria lobata ve 10 parti Pueraria lobata'daki ana aktif bileşenlerin türleri ve içeriklerinde önemli farklılıklar vardır. Farklılık gösteren bileşenler Ka, Da, Gl, Tx, Td ve Ge'dir. Bunun nedeni kudzu çiçeklerinin ve pembe kudzu çiçeklerinin farklı kaynaklarıyla ilgilidir.
Şu anda, Pueraria lobata ve Pueraria lobata'nın kurutulmuş çiçek tomurcukları şifalı bitki kaynakları olarak yer almaktadır. Pueraria lobata ve Pueraria lobata arasındaki ana etken maddelerdeki önemli farklılıklar göz önüne alındığında, klinik etkinlikleri de farklı olmalıdır. Bu nedenle, ürün geliştirme ve klinik uygulamalarda ayırt edilmeli ve farklı şekilde kullanılmalıdırlar. Aynı zamanda, Ge Hua sağlık ürünlerinin geliştirilmesi için büyük bir potansiyele sahiptir ve standartlaştırılmış bir Ge Hua kalite değerlendirme sisteminin kurulması acildir. Araştırma enstitümüz tarafından oluşturulan parmak izi spektrumu, tek test çoklu değerlendirme yöntemiyle birleştirildiğinde, referans malzemelerin kullanımını azaltırken Pueraria lobata tıbbi malzemelerinin çok bileşenli ve çok indeksli kalite kontrolünü sağlayabilir; Aynı zamanda, Pueraria lobata ve Pueraria lobata arasında ayrım yapabilir ve farklı kökenlerden gelen Pueraria lobata'nın kalitesini etkili bir şekilde değerlendirebilir; Deneysel sonuçlar, Pueraria lobata'nın kalite standartlarının değiştirilmesi ve iyileştirilmesi için referans sağlayabilir ve Pueraria lobata'nın yüksek kaliteli germplazm kaynaklarının seçimi ve ıslahı için referans sağlayabilir. Geleneksel Çin tıbbının genel kalite değerlendirme modunda iyi uygulama olanaklarına sahiptir.