Forskning i kvalitetskontrol af Ge Hua baseret på HPLC-fingeraftryk og multievalueringsmetode
Pueraria Flos er en tørret blomsterknop af Pueraria lobata (Willd.) Ohwi eller Pueraria thomsonii Benth, en plante i bælgplantefamilien. Den er også kendt som Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata eller Epinephelus patchouli. Den er beskrevet i "Record of Famous Doctors", "Dian Nan Ben Cao" og "Ben Cao Gang Mu" og virker afstressende, fjerner fugt og varme og lindrer irritation og kvalme. Moderne forskning har vist, at Pueraria lobata har virkninger som afgiftning, blodsukkersænkning, blodlipidsænkning, antioxidant, myokardiebeskyttelse og østrogenlignende egenskaber. Det bruges i vid udstrækning som råmateriale til udvikling af sundhedsprodukter som f.eks. afgiftning, leverbeskyttelse, blodsukker- og blodlipidsænkning, antiosteoporose og immunregulering. Undersøgelser af den kemiske sammensætning har vist, at Pueraria lobata hovedsageligt indeholder flavonoider, terpener, steroider og coumariner, herunder Puerarin (Pu), Daidzin (Da), Daidzein (Dae), Genistin (Ge), Genistein (Gee), Kakkalide (Ka), Glycitin (Gl), Tectoridin (Td), Tectorigenin (Tg) og Tectorigenin-7-O-xylosylglucosid er hovedkomponenterne i Pueraria lobata. Tx) er den vigtigste kemiske komponent. Ge Hua er hovedsageligt udbredt i Sydøstasien, med den største udbredelse i Kina. Shaanxi, Sichuan, Guangxi og Yunnan er de vigtigste produktionsområder for Ge Hua. Standarderne udstedt af ministeriet og standarderne for traditionel kinesisk medicin i forskellige provinser har klart fastsat, at blomsterknopperne fra vild kudzu og pink kudzu er de to medicinske autentiske kilder til kudzu-blomster i Kina. For at skelne mellem dem kaldes førstnævnte kudzu-blomst, og sidstnævnte kaldes lyserød kudzu-blomst. Vores forskningsgruppe fandt ud af, at der er betydelige forskelle i den kemiske sammensætning mellem de to. På nuværende tidspunkt er der kun departementale og lokale standarder for Ge Hua, og der er forvirring i sortsidentifikationen. Kvalitetskontrolindikatorerne omfatter kun træk, identifikation og inspektion, hvilket er for simpelt. Der har ikke været nogen rapporter om forbedring af kvalitetskontrolstandarderne.
Fingeraftryksspektret er en omfattende, makroskopisk og kvantificerbar kromatografisk identifikationsmetode, der i vid udstrækning anvendes til kvalitetsevaluering af traditionel kinesisk medicin. Det kan i høj grad afspejle forskellene i den kemiske sammensætning i traditionel kinesisk medicin og derved opnå målet om at skelne mellem ægthed og kvalitet. Derfor brugte denne undersøgelse HPLC til at etablere fingeraftryksspektre af Pueraria lobata fra forskellige oprindelser; Samtidig blev der på dette grundlag etableret en analysemetode med én test og flere evalueringer (QAMS) til bestemmelse af indholdet af Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg og Tx i Pueraria lobata, systematisk evaluering af kvalitetsforskellene på medicinske materialer fra Pueraria lobata fra forskellige produktionsområder, tilvejebringelse af empirisk grundlag for omfattende og systematisk kontrol af Pueraria lobata-kvalitet og tilvejebringelse af reference til udvælgelse og opdræt af kimplasmeressourcer af høj kvalitet af Pueraria lobata.

 

I forsøget blev der brugt en diode array-detektor til at udføre fuld bølgelængdescanning af 10 flavonoider ved 200-400 nm. Resultaterne viste, at UV-spektrene for Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg og Tx var ens med maksimal absorption ved 256-274 nm bølgelængde. Under bølgelængdebetingelserne på 265 nm viste det sig, at de 10 testede komponenter havde en god baseline-separation og en stabil baseline, som kan opfylde kravene til kvantitativ analyse. Eksperimentet undersøgte 75% ethanol; 95% ethanol; 75% methanol og 25 ml hver af methanol blev brugt som ekstraktionsopløsningsmidler. Når methanol blev valgt som ekstraktionsmiddel, var antallet af kromatografiske toppe passende og let at adskille. Eksperimentet undersøgte også behandlingsmetoder med ultralyd og termisk tilbagesvaling og valgte i sidste ende ultralyd i 30 minutter, hvilket er en enkel og effektiv metode. Eksperimentet undersøgte også mobile fasesystemer som methanol-vand, acetonitril-vand, acetonitril-0,2% fosforsyre-vandig opløsning og acetonitril-0,2% myresyre-vandig opløsning. Det endelige valg af gradientelueringssystem med acetonitril 0,2 fosfatvandig opløsning resulterede i god separationseffekt og betydelig forbedring af tailing.
For at lette den omfattende kvalitetskontrol af Pueraria lobata blev forskellige repræsentative komponenter med klar aktivitet og højt indhold valgt som indikatorkomponenter til bestemmelse af QAMS-indhold i eksperimentet, hovedsageligt inklusive Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg og Tx som de vigtigste kemiske komponenter. Fra resultaterne af måling af indholdet af hver komponent, den kromatografiske adskillelse af hver komponent og prisen og tilgængeligheden af referencestandarder kan det ses, at Ka har et højt indhold, god adskillelseseffekt, nem identifikation i spektret og er i den midterste position af spektret, hvilket er befordrende for beregningen af den relative retentionstid for andre komponentkromatografiske toppe og identifikationen af kromatografiske toppe. Ka har stabile egenskaber, er billig og let at få og har aktiviteten til at sænke blodlipider og blodsukker, forbedre mikrocirkulationen og aktivere ethanoldehydrogenase. Derfor blev Ka valgt som referencemateriale til bestemmelse af QAMS-indhold i denne undersøgelse.
Fingeraftryksspektret, der blev etableret i dette eksperiment, kan effektivt karakterisere oplysningerne om den kemiske sammensætning af Pueraria lobata. QAMS-metoden, der er etableret baseret på fingeraftryksspektret, kan effektivt bestemme indholdet af de vigtigste aktive ingredienser Pu, Da, Gl, Tx, Ge, Td, Dae, Ka, Gee og Tg i Pueraria lobata og Pueraria lobata, hvilket omfattende kan afspejle den samlede kvalitetsinformation for Pueraria lobata-lægemidler. Ifølge resultaterne af indholdsbestemmelsen og klyngevarmekortet kan det intuitivt ses, at Pueraria lobata og Pueraria lobata kan opdeles i to kategorier. Der er betydelige forskelle i typerne og indholdet af de vigtigste aktive ingredienser i 20 partier af Pueraria lobata og 10 partier af Pueraria lobata fra forskellige produktionsområder. De forskellige komponenter er Ka, Da, Gl, Tx, Td og Ge. Årsagen er relateret til de forskellige kilder til kudzu-blomster og lyserøde kudzu-blomster.
I øjeblikket indgår tørrede blomsterknopper af Pueraria lobata og Pueraria lobata som kilder til lægeurter. I betragtning af de betydelige forskelle i de vigtigste aktive ingredienser mellem Pueraria lobata og Pueraria lobata, bør deres kliniske effekt også være forskellig. Derfor bør de skelnes fra hinanden og bruges forskelligt i produktudvikling og kliniske anvendelser. Samtidig har Ge Hua et stort potentiale for udvikling af sundhedsprodukter, og det haster med at etablere et standardiseret Ge Hua-kvalitetsevalueringssystem. Det fingeraftryksspektrum, som vores forskningsinstitut har etableret, kombineret med metoden med én test og flere evalueringer kan opnå kvalitetskontrol af Pueraria lobata-lægemidler med flere komponenter og flere indekser, samtidig med at brugen af referencematerialer reduceres; Samtidig kan det skelne mellem Pueraria lobata og Pueraria lobata og effektivt evaluere kvaliteten af Pueraria lobata fra forskellige oprindelser; De eksperimentelle resultater kan give reference til ændring og forbedring af kvalitetsstandarderne for Pueraria lobata og kan give reference til udvælgelse og opdræt af højkvalitets kimplasmeressourcer af Pueraria lobata. Det har gode anvendelsesmuligheder i den overordnede kvalitetsevalueringstilstand for traditionel kinesisk medicin.