Investigación sobre el control de calidad de Ge Hua basado en la huella dactilar HPLC y el método de evaluación múltiple
Pueraria Flos es un capullo floral seco de Pueraria lobata (Willd.) Ohwi o Pueraria thomsonii Benth., una planta de la familia de las leguminosas. También se conoce como Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata o Epinephelus patchouli. Está registrada en el "Registro de Médicos Famosos", "Dian Nan Ben Cao" y "Ben Cao Gang Mu", y tiene los efectos de poner sobrio, despejar la humedad y el calor, aliviar las molestias y las náuseas. La investigación moderna ha demostrado que la Pueraria lobata tiene efectos como la desintoxicación, la reducción del azúcar en sangre, la reducción de lípidos en sangre, antioxidante, protección miocárdica y propiedades similares al estrógeno. Se utiliza ampliamente como materia prima para el desarrollo de productos sanitarios como la desintoxicación, la protección del hígado, la reducción del azúcar y los lípidos en sangre, la lucha contra la osteoporosis y la regulación inmunológica. Los estudios de composición química han demostrado que la Pueraria lobata contiene principalmente flavonoides, terpenos, esteroides y cumarinas, entre los que destacan Puerarin (Pu), Daidzin (Da), Daidzein (Dae), Genistin (Ge), Genistein (Gee), Kakkalide (Ka), Glycitin (Gl), Tectoridin (Td), Tectorigenin (Tg), y Tectorigenin-7-O-xylosylglucoside son los principales componentes de la Pueraria lobata. Tx) es el principal componente químico. Ge Hua se distribuye principalmente en el sudeste asiático, con la distribución más amplia en China. Shaanxi, Sichuan, Guangxi y Yunnan son las principales zonas de producción de Ge Hua. Las normas emitidas por el Ministerio y las normas para la medicina tradicional china en varias provincias han estipulado claramente que los botones florales del kudzu silvestre y el kudzu rosa son las dos fuentes medicinales auténticas de flores de kudzu en China. Para distinguirlas, la primera se denomina flor de kudzu, y la segunda, flor de kudzu rosa. Nuestro grupo de investigación descubrió que existen diferencias significativas en la composición química entre ambas. En la actualidad, sólo existen normas departamentales y locales para el Ge Hua, y hay confusión en la identificación de variedades. Los indicadores de control de calidad sólo incluyen rasgos, identificación e inspección, que son demasiado simples. No ha habido informes sobre la mejora de las normas de control de calidad.
El espectro dactilar es un método de identificación cromatográfico completo, macroscópico y cuantificable ampliamente utilizado en la evaluación de la calidad de la medicina tradicional china. Puede reflejar de forma exhaustiva las diferencias en las características de la composición química de la medicina tradicional china, logrando así el objetivo de distinguir entre autenticidad y calidad. Por lo tanto, este estudio utilizó HPLC para establecer espectros de huellas dactilares de Pueraria lobata de diferentes orígenes; Al mismo tiempo, se estableció un método de análisis de evaluación múltiple de una prueba (QAMS) sobre esta base para la determinación del contenido de Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg, y Tx en Pueraria lobata, evaluando sistemáticamente las diferencias de calidad de los materiales medicinales de Pueraria lobata de diferentes áreas de producción, proporcionando una base empírica para el control exhaustivo y sistemático de la calidad de Pueraria lobata, y proporcionando una referencia para la selección y el cultivo de recursos de germoplasma de alta calidad de Pueraria lobata.

 

En el experimento se utilizó un detector de matriz de diodos para realizar un barrido completo de la longitud de onda de 10 flavonoides a 200-400nm. Los resultados mostraron que los espectros UV de Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg y Tx eran similares, con una absorción máxima a una longitud de onda de 256-274nm. Bajo la condición de longitud de onda de 265 nm, se observó que los 10 componentes analizados tenían una buena separación de la línea de base y una línea de base estable, lo que puede satisfacer los requisitos del análisis cuantitativo. El experimento investigado 75% etanol; 95% etanol; 75% metanol y 25mL cada uno de metanol se utilizaron como disolventes de extracción. Cuando se eligió el metanol como disolvente de extracción, el número de picos cromatográficos fue adecuado y fácil de separar. En el experimento también se examinaron los métodos de tratamiento con ultrasonidos y reflujo térmico, y finalmente se eligió el ultrasonido durante 30 minutos, que es un método sencillo y eficaz. El experimento también examinó sistemas de fase móvil como metanol agua, acetonitrilo agua, acetonitrilo-0,2% solución acuosa de ácido fosfórico y acetonitrilo-0,2% solución acuosa de ácido fórmico. La selección final del sistema de elución en gradiente de solución acuosa de acetonitrilo 0,2 fosfato dio como resultado un buen efecto de separación y una mejora significativa de la cola.
Para facilitar el control de calidad integral de Pueraria lobata, varios componentes representativos con clara actividad y alto contenido fueron seleccionados como los componentes indicadores para la determinación del contenido de QAMS en el experimento, incluyendo principalmente Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg, y Tx como los principales componentes químicos. A partir de los resultados de la medición del contenido de cada componente, la separación cromatográfica de cada componente, y el precio y la disponibilidad de los estándares de referencia, se puede observar que Ka tiene un alto contenido, buen efecto de separación, fácil identificación en el espectro, y se encuentra en la posición media del espectro, lo que es propicio para el cálculo del tiempo de retención relativo de los picos cromatográficos de otros componentes y la identificación de los picos cromatográficos. El Ka tiene propiedades estables, es barato y fácil de obtener, y tiene la actividad de reducir los lípidos y el azúcar en sangre, mejorar la microcirculación y activar la etanol deshidrogenasa. Por lo tanto, en este estudio se eligió Ka como material de referencia para la determinación del contenido de QAMS.
El espectro de huellas dactilares establecido en este experimento puede caracterizar eficazmente la información de la composición química de Pueraria lobata. El método QAMS establecido basado en el espectro de huellas dactilares puede determinar efectivamente el contenido de los principales ingredientes activos Pu, Da, Gl, Tx, Ge, Td, Dae, Ka, Gee y Tg en Pueraria lobata y Pueraria lobata, lo que puede reflejar ampliamente la información general de calidad de los materiales medicinales de Pueraria lobata. De acuerdo con los resultados de la determinación del contenido y el mapa de calor de agrupación, se puede ver intuitivamente que Pueraria lobata y Pueraria lobata se pueden dividir en dos categorías. Existen diferencias significativas en los tipos y contenidos de los principales ingredientes activos en 20 lotes de Pueraria lobata y 10 lotes de Pueraria lobata de diferentes áreas de producción. Los componentes diferenciales son Ka, Da, Gl, Tx, Td y Ge. La razón está relacionada con las diferentes fuentes de flores de kudzu y flores de kudzu rosa.
Actualmente, los capullos florales secos de Pueraria lobata y Pueraria lobata se incluyen como fuentes de hierbas medicinales. Dadas las importantes diferencias en los principales principios activos entre Pueraria lobata y Pueraria lobata, su eficacia clínica también debería diferir. Por lo tanto, deben distinguirse y utilizarse de forma diferente en el desarrollo de productos y en las aplicaciones clínicas. Al mismo tiempo, Ge Hua tiene un gran potencial para el desarrollo de productos sanitarios, y es urgente establecer un sistema estandarizado de evaluación de la calidad de Ge Hua. El espectro de huellas dactilares establecido por nuestro instituto de investigación, combinado con el método de evaluación múltiple de una prueba, puede lograr un control de calidad multicomponente y multiíndice de los materiales medicinales de Pueraria lobata, reduciendo al mismo tiempo el uso de materiales de referencia; Al mismo tiempo, puede distinguir entre Pueraria lobata y Pueraria lobata, y evaluar eficazmente la calidad de Pueraria lobata de diferentes orígenes; Los resultados experimentales pueden proporcionar referencia para la modificación y mejora de las normas de calidad de Pueraria lobata, y pueden proporcionar referencia para la selección y cría de recursos de germoplasma de alta calidad de Pueraria lobata. Tiene buenas perspectivas de aplicación en el modo de evaluación global de la calidad de la medicina tradicional china.