Beyaz taze deriden polisakkaritlerin saflaştırılması, yapısal karakterizasyonu ve anti alerjik çalışması
Beyaz taze deri, Rutaceae familyasından bir bitki olan Dictamnus dasycarpus Turcz'un kurutulmuş kök derisidir. Polisakkaritler, flavonoidler, alkaloidler, steroidler ve diğer bileşenleri içerir ve ısı ve nemi temizleme, nemli ısı yaralarını tedavi etme, rüzgarı giderme ve detoksifiye etme etkilerine sahiptir. Tinea pedis, ürtiker, cilt kaşıntısı ve egzama gibi cilt hastalıklarını tedavi etmek için kullanılabilir ve güçlü anti alerjik ve kaşıntı önleyici etkilere sahiptir. Çin bitkisel ilaçlarından elde edilen polisakkaritlerin çeşitli türleri ve karmaşık yapıları vardır ve bunların büyük bir kısmı bağışıklık düzenlemesini teşvik etme, antioksidan, anti-inflamatuar, antiviral, anti-tümör vb. gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahiptir.
Kozmetiklerin neden olduğu cilt alerjileri son yıllarda tüketiciler için önemli bir güvenlik endişesi olmuştur. Cilt alerjilerinin ana nedeni, alerjen duyarlılığı, mast hücresi aktivasyonu ve degranülasyonu ve bağışıklık hücresi yanıtı gibi bir dizi karmaşık süreçten geçen ve sonuçta alerjik reaksiyonların ortaya çıkmasına neden olan IgE aracılı tip I aşırı duyarlılık reaksiyonlarıdır. Mast hücreleri alerjik reaksiyonlarda efektör hücrelerdir ve alerjik deri hastalıklarında ve enflamatuar süreçlerde önemli bir rol oynarlar. Cilt alerjileri, cildin bariyer fonksiyonu, nörolojik faktörler ve enflamatuar reaksiyonlarla yakından ilişkilidir.
RBL-2H3 (bazofilik lösemi hücrelerinde, RBL-2H3), hücre yüzeyinde IgE yüksek afinite reseptörleri bakımından zengin olan ve mast hücrelerinin çeşitli biyolojik özelliklerine sahip olan sıçan bazofilik tümör hücre hattının bir alt tipidir. Pasajlanabilen ve kültürlenebilen mast hücreleri için in vitro bir yedek model olarak kabul edilmektedir. β - Aminoheksosiltransferaz (β - HEX), mast hücrelerinin ayırt edici bir granülüdür ve mast hücresi degranülasyonu çalışmasında önemli bir aracıdır. Mast hücreleri, sentetik poliamin uyarıcı C48/80 (Bileşik 48/80) tarafından uyarıldığında degranülasyona uğrar. Bu süre zarfında, β - HEX salınım seviyesi mast hücresi degranülasyon derecesi ile tutarlıdır ve histamin salınımı ile pozitif korelasyon gösterir. Bu nedenle, genellikle mast hücresi degranülasyonunun bir göstergesi olarak tespit edilir. Hücre zarı, cilt bariyeri işlevinin önemli bir parçasıdır ve geliştirilmiş kırmızı kan hücresi (RBC) hemoliz testi, kırmızı kan hücrelerinden sızan hemoglobin miktarı ile hücre zarındaki antimikrobiyal aktif maddelerin koruyucu işlevini belirleyebilir. Buna ek olarak, insan vücudundaki serbest radikaller hücre zarlarına ve proteinlere saldırarak hücre yaşlanmasına ve ölümüne yol açabilir. Serbest radikallerin aktivitesinin engellenmesi, serbest radikallerin neden olduğu hücre yaşlanmasını etkili bir şekilde hafifletebilir ve cilt bariyeri işlevini koruyabilir.
Zhao ve ark. beyaz taze derinin ham ekstraktının mast hücrelerinin C48/80 ile indüklenen degranülasyonunu inhibe ettiğini, histamin ve β - HEX salınımını azalttığını ve anti alerjik etkilere sahip olduğunu bulmuştur; Zhang ve ark. saf bir beyaz taze deri polisakkaritini izole etmiş ve sülfasyon modifikasyonundan sonra anti psoriasis etkisini doğrulamıştır; Shi ve ark. fare kulağı şişme deneyleri ve fare kılcal geçirgenlik deneyleri yoluyla anti-enflamatuar aktivitesini doğrulamıştır; Cong ve ark. beyaz taze derinin su özütünün farelerde DNCB kaynaklı gecikmiş tip aşırı duyarlılığı (DTH) inhibe edebildiğini ve fareye özgü hücresel bağışıklığı inhibe etme işlevine sahip olduğunu doğrulamıştır. Şimdiye kadar, beyaz taze derinin ham ekstresinin anti alerjik etkisi üzerine bazı araştırmalar yapılmış olsa da, beyaz taze derinin su ekstresindeki ana bileşen olan beyaz taze deri polisakkaritlerinin anti alerjik etkisini doğrulamak için herhangi bir çalışma yapılmamıştır. Bu nedenle, bu deneyde Bai Xianpi'den polisakkaritler çıkarılmış ve izole edilmiş ve bileşenleri üzerinde fizikokimyasal analiz yapılmıştır; RBL-2H3 mast hücre degranülasyonunun inhibisyonu deneyi ve diğer tespit ve analizler, anti alerjik etkiyi incelemek ve beyaz taze deri polisakkaritlerinin anti alerjik maddeler olarak incelenmesi için teorik bir temel sağlamak amacıyla yapılmıştır.

Bu çalışmada beyaz taze deri ekstrakte edilip izole edilerek beyaz taze deri polisakkariti CDPS elde edilmiş ve daha sonra saflaştırılarak beyaz taze deri polisakkariti CDPS-1 elde edilmiştir. CDPS-1'in karakterizasyonu GFC, IC ve FT-IR yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir. CDPS-1 esas olarak alfa glikozidik bağlardan oluşur ve moleküler ağırlığı 2577Da'dır. Esas olarak 0.41:1.38:3:15:15.4:79.61 molar oranına sahip fukoz, glukoz, ksiloz, ramnoz ve galaktozdan oluşur. CDPS'nin RBL-2H3 hücrelerinden β - HEX'in degranülasyon salınımı üzerindeki inhibisyon oranı, RBC hemoliz inhibisyon oranı ve DPPH klirens oranı belirlenmiştir. Sonuçlar, 0.5-1.0mg/mL konsantrasyon aralığında CDPS'nin β - HEX salınımı ve RBC hücre membranı koruması üzerinde sırasıyla 28.54% ve 62.1% pik değerleri ve DPPH için 25%'nin üzerinde bir klirens oranı ile iyi bir inhibitör etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Bu deneyde elde edilen beyaz taze deri polisakkaritleri iyi anti alerjik etkilere sahiptir ve hücre membranları üzerindeki koruyucu ve antioksidan yeteneklerinin anti alerjik mekanizmada belirli bir rol oynadığı tahmin edilmektedir.