Исследование контроля качества Гэ Хуа на основе ВЭЖХ-фингерпринта и метода мультиоценки
Pueraria Flos - это высушенные цветочные бутоны Pueraria lobata (Willd.) Ohwi или Pueraria thomsonii Benth., растения из семейства бобовых. Он также известен как Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata или Epinephelus patchouli. Записано в "Записях знаменитых врачей", "Дянь Нань Бен Цао" и "Бен Цао Ган Му", обладает эффектами отрезвления, очищения от сырости и жара, снятия раздражения и тошноты. Современные исследования показали, что Pueraria lobata обладает такими эффектами, как детоксикация, снижение уровня сахара в крови, снижение уровня липидов в крови, антиоксидантное действие, защита миокарда и эстрогеноподобные свойства. Она широко используется в качестве сырья для создания продуктов для здоровья, таких как детоксикация, защита печени, снижение уровня сахара и липидов в крови, борьба с остеопорозом и регулирование иммунитета. Исследования химического состава показали, что Pueraria lobata в основном содержит флавоноиды, терпены, стероиды и кумарины, среди которых пуэрарин (Pu), дайдзин (Da), дайдзеин (Dae), Генистин (Ge), Генистеин (Gee), Каккалид (Ka), Глицитин (Gl), Текторидин (Td), Текторигенин (Tg) и Текторигенин-7-O-ксилозилглюкозид являются основными компонентами Pueraria lobata. Tx) является основным химическим компонентом. Гэ Хуа распространена в основном в Юго-Восточной Азии, а наиболее широко - в Китае. Шэньси, Сычуань, Гуанси и Юньнань являются основными районами производства Ge Hua. В стандартах Министерства и стандартах традиционной китайской медицины различных провинций четко указано, что цветочные почки дикого кудзу и розового кудзу являются двумя лекарственными аутентичными источниками цветов кудзу в Китае. Чтобы различать их, первый называется цветком кудзу, а второй - розовым цветком кудзу. Наша исследовательская группа обнаружила, что между ними существуют значительные различия в химическом составе. В настоящее время существуют только ведомственные и местные стандарты на Гэ Хуа, и существует путаница в идентификации сортов. Показатели контроля качества включают только признаки, идентификацию и инспекцию, что слишком просто. Сообщений об улучшении стандартов контроля качества не поступало.
Спектр отпечатков пальцев - это комплексный, макроскопический и количественно определяемый хроматографический метод идентификации, широко используемый для оценки качества традиционной китайской медицины. Он может всесторонне отражать различия в характеристиках химического состава традиционной китайской медицины, тем самым достигая цели различения подлинности и качества. Поэтому в данном исследовании использовалась ВЭЖХ для получения спектров отпечатков пальцев Pueraria lobata различного происхождения; В то же время, на этой основе был создан метод анализа множественной оценки одного теста (QAMS) для определения содержания Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg и Tx в Pueraria lobata, систематической оценки качественных различий лекарственных материалов Pueraria lobata из различных областей производства, обеспечения эмпирической основы для всестороннего и систематического контроля качества Pueraria lobata, а также обеспечения ссылки для выбора и разведения высококачественных ресурсов зародышевой плазмы Pueraria lobata.

 

В эксперименте использовался детектор на диодной матрице для полного сканирования длины волны 10 флавоноидов при 200-400 нм. Результаты показали, что УФ-спектры Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg и Tx были схожими, с максимумом поглощения при длине волны 256-274 нм. При длине волны 265 нм было обнаружено, что 10 протестированных компонентов имеют хорошее разделение базовой линии и стабильную базовую линию, что может удовлетворить требованиям количественного анализа. В качестве растворителей для экстракции использовались этанол 75%; этанол 95%; метанол 75% и по 25 мл метанола. Когда в качестве растворителя для экстракции был выбран метанол, количество хроматографических пиков было соответствующим и легко разделялось. В эксперименте также рассматривались методы обработки ультразвуком и тепловым рефлюксом, и в итоге был выбран ультразвук в течение 30 минут, который является простым и эффективным методом. В эксперименте также рассматривались такие системы подвижных фаз, как вода с метанолом, вода с ацетонитрилом, водный раствор фосфорной кислоты с ацетонитрилом-0,2% и водный раствор муравьиной кислоты с ацетонитрилом-0,2%. Окончательный выбор системы градиентного элюирования ацетонитрил-0,2 фосфатного водного раствора привел к хорошему эффекту разделения и значительному улучшению хвостовой части.
Чтобы облегчить комплексный контроль качества Pueraria lobata, в качестве индикаторных компонентов для определения содержания QAMS в эксперименте были выбраны различные репрезентативные компоненты с явной активностью и высоким содержанием, в основном включающие Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg и Tx в качестве основных химических компонентов. Из результатов измерения содержания каждого компонента, хроматографического разделения каждого компонента, а также цены и доступности эталонных стандартов видно, что Ka имеет высокое содержание, хороший эффект разделения, легко идентифицируется в спектре и находится в среднем положении спектра, что способствует расчету относительного времени удерживания хроматографических пиков других компонентов и идентификации хроматографических пиков. Ка обладает стабильными свойствами, недорог и прост в получении, обладает активностью по снижению уровня липидов и сахара в крови, улучшению микроциркуляции и активации этанолдегидрогеназы. Поэтому в качестве эталонного материала для определения содержания QAMS в данном исследовании был выбран Ка.
Спектр отпечатков пальцев, полученный в этом эксперименте, может эффективно характеризовать информацию о химическом составе Pueraria lobata. Метод QAMS, основанный на спектре отпечатков пальцев, может эффективно определить содержание основных активных ингредиентов Pu, Da, Gl, Tx, Ge, Td, Dae, Ka, Gee и Tg в Pueraria lobata и Pueraria lobata, что может всесторонне отразить общую информацию о качестве лекарственного сырья Pueraria lobata. Согласно результатам определения содержания и тепловой карте кластеризации, можно интуитивно понять, что Pueraria lobata и Pueraria lobata можно разделить на две категории. Существуют значительные различия в типах и содержании основных активных компонентов в 20 партиях Pueraria lobata и 10 партиях Pueraria lobata из разных районов производства. Различаются такие компоненты, как Ka, Da, Gl, Tx, Td и Ge. Причина связана с различными источниками цветков кудзу и розового кудзу.
В настоящее время в качестве источников лекарственных трав рассматриваются высушенные цветочные почки Pueraria lobata и Pueraria lobata. Учитывая существенные различия в основных действующих веществах Pueraria lobata и Pueraria lobata, их клиническая эффективность также должна различаться. Поэтому их следует различать и использовать по-разному при разработке продуктов и в клинической практике. В то же время Гэ Хуа обладает огромным потенциалом для разработки продуктов для здоровья, поэтому необходимо создать стандартизированную систему оценки качества Гэ Хуа. Спектр отпечатков пальцев, созданный нашим исследовательским институтом, в сочетании с методом многократной оценки с помощью одного теста может обеспечить многокомпонентный и многоиндексный контроль качества лекарственного сырья Pueraria lobata, сократив при этом использование эталонных материалов; В то же время, он может различать Pueraria lobata и Pueraria lobata, и эффективно оценивать качество Pueraria lobata различного происхождения; экспериментальные результаты могут служить основой для модификации и улучшения стандартов качества Pueraria lobata, и могут служить основой для отбора и разведения высококачественных ресурсов зародышевой плазмы Pueraria lobata. Она имеет хорошие перспективы применения в режиме общей оценки качества традиционной китайской медицины.