A Ge Hua minőségellenőrzésének kutatása a HPLC-ujjlenyomat és a többszörös értékelési módszer alapján
A Pueraria Flos a hüvelyesek családjába tartozó Pueraria lobata (Willd.) Ohwi vagy Pueraria thomsonii Benth. szárított virágbimbója. Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata, Pueraria lobata vagy Epinephelus pacsuli néven is ismert. A "Híres orvosok feljegyzései", a "Dian Nan Ben Cao" és a "Ben Cao Gang Mu" című művekben szerepel, és jótékony hatása kijózanító, a nedvességet és a hőséget megszüntető, a bosszúságot és a hányingert enyhítő. A modern kutatások kimutatták, hogy a Pueraria lobata olyan hatásokkal rendelkezik, mint a méregtelenítés, a vércukorszint csökkentése, a vérzsírszint csökkentése, antioxidáns, szívizomvédő és ösztrogénszerű tulajdonságok. Széles körben használják nyersanyagként olyan egészségügyi termékek kifejlesztéséhez, mint a méregtelenítés, májvédelem, vércukor- és vérzsírcsökkentés, csontritkulás elleni és immunszabályozás. Kémiai összetétel-vizsgálatok kimutatták, hogy a Pueraria lobata főként flavonoidokat, terpéneket, szteroidokat és kumarinokat tartalmaz, amelyek közül a Puerarin (Pu), Daidzin (Da), Daidzein (Dae), Genistin (Ge), Genistein (Gee), Kakkalid (Ka), Glycitin (Gl), Tectoridin (Td), Tectorigenin (Tg) és Tectorigenin-7-O-xilozilglükozid a Pueraria lobata fő összetevői. Tx) a fő kémiai összetevő. A Ge Hua főként Délkelet-Ázsiában elterjedt, a legszélesebb körben Kínában. Shaanxi, Sichuan, Guangxi és Yunnan a Ge Hua fő termőterületei. A minisztérium által kiadott szabványok és a különböző tartományok hagyományos kínai orvoslásra vonatkozó szabványai egyértelműen előírják, hogy a vad kudzu virágbimbója és a rózsaszín kudzu a kudzu virágának két hiteles gyógyászati forrása Kínában. Megkülönböztetésük érdekében az előbbit kudzu-virágnak, az utóbbit pedig rózsaszín kudzu-virágnak nevezik. Kutatócsoportunk megállapította, hogy a kettő között jelentős különbségek vannak a kémiai összetételben. Jelenleg csak a Ge Hua-ra vonatkozóan vannak tanszéki és helyi szabványok, és a fajtaazonosításban zűrzavar uralkodik. A minőségellenőrzési mutatók csak a tulajdonságokat, az azonosítást és az ellenőrzést tartalmazzák, amelyek túl egyszerűek. A minőségellenőrzési szabványok javításáról nem érkezett jelentés.
Az ujjlenyomat-spektrum egy átfogó, makroszkópikus és számszerűsíthető kromatográfiás azonosítási módszer, amelyet széles körben alkalmaznak a hagyományos kínai gyógyászat minőségének értékelésében. Átfogóan képes tükrözni a hagyományos kínai gyógyászat kémiai összetételének jellemzőiben mutatkozó különbségeket, ezáltal elérve a hitelesség és a minőség megkülönböztetésének célját. Ezért ez a tanulmány HPLC-t használt a különböző eredetű Pueraria lobata ujjlenyomat-spektrumainak meghatározására; Ugyanakkor ezen az alapon egy egy tesztből álló, többszörös értékelési elemzési módszert (QAMS) hoztunk létre a Pueraria lobata Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg és Tx tartalmának meghatározására, szisztematikusan értékelve a különböző termőterületekről származó Pueraria lobata gyógyászati anyagok minőségi különbségeit, empirikus alapot biztosítva a Pueraria lobata minőségének átfogó és szisztematikus ellenőrzéséhez, és referenciát nyújtva a Pueraria lobata kiváló minőségű csíraplazmaforrásainak kiválasztásához és nemesítéséhez.

 

A kísérletben diódasoros detektort használtak 10 flavonoid teljes hullámhosszú letapogatásához 200-400 nm-en. Az eredmények azt mutatták, hogy a Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg és Tx UV spektrumai hasonlóak voltak, a maximális abszorpció 256-274 nm hullámhosszon volt. A 265 nm-es hullámhosszúság mellett azt találták, hogy a 10 vizsgált komponens jó alapvonali elválasztással és stabil alapvonallal rendelkezik, ami megfelel a mennyiségi elemzés követelményeinek. A vizsgált kísérletben 75% etanolt; 95% etanolt; 75% metanolt és egyenként 25ml metanolt használtak extrakciós oldószerként. Amikor a metanolt választották extrakciós oldószerként, a kromatográfiás csúcsok száma megfelelő volt és könnyen elkülöníthető. A kísérletben vizsgálták az ultrahangos és a termikus reflux kezelési módszereket is, és végül a 30 perces ultrahangot választották, amely egyszerű és hatékony módszer. A kísérletben olyan mozgófázis-rendszereket is vizsgáltak, mint a metanol-víz, acetonitril-víz, acetonitril-0,2% foszforsav vizes oldat és acetonitril-0,2% hangyasav vizes oldat. A végül kiválasztott acetonitril-0,2 foszfátvizes oldat gradiens elúciós rendszer jó elválasztási hatást és jelentős javulást eredményezett a tailingben.
A Pueraria lobata átfogó minőségellenőrzésének megkönnyítése érdekében a kísérletben a QAMS-tartalom meghatározásához különböző reprezentatív, egyértelmű aktivitással és magas tartalommal rendelkező komponenseket választottak ki indikátorkomponensnek, amelyek közé elsősorban a Pu, Da, Dae, Ge, Gee, Ka, Gl, Td, Tg és Tx mint fő kémiai komponensek tartoznak. Az egyes komponensek tartalmának mérési eredményei, az egyes komponensek kromatográfiás elválasztása, valamint a referenciastandardok ára és elérhetősége alapján látható, hogy a Ka magas tartalommal, jó elválasztó hatással rendelkezik, könnyen azonosítható a spektrumban, és a spektrum középső pozíciójában van, ami elősegíti a többi komponens kromatográfiás csúcsok relatív retenciós idejének kiszámítását és a kromatográfiás csúcsok azonosítását. A Ka stabil tulajdonságokkal rendelkezik, olcsó és könnyen beszerezhető, és aktivitása csökkenti a vérzsírokat és a vércukorszintet, javítja a mikrokeringést és aktiválja az etanol-dehidrogenázt. Ezért ebben a tanulmányban a Ka-t választottuk referenciaanyagnak a QAMS-tartalom meghatározásához.
Az ebben a kísérletben megállapított ujjlenyomat-spektrum hatékonyan jellemzi a Pueraria lobata kémiai összetételét. Az ujjlenyomat-spektrum alapján létrehozott QAMS módszer hatékonyan képes meghatározni a Pu, Da, Gl, Tx, Ge, Td, Dae, Ka, Gee és Tg fő hatóanyagok tartalmát a Pueraria lobata és a Pueraria lobata-ban, ami átfogóan tükrözi a Pueraria lobata gyógyászati anyagok általános minőségi információit. A tartalom meghatározásának eredményei és a klaszterezési hőtérkép alapján intuitív módon látható, hogy a Pueraria lobata és a Pueraria lobata két kategóriába sorolható. Jelentős különbségek vannak a fő hatóanyagok típusai és tartalma között a Pueraria lobata 20 tételében és a Pueraria lobata 10 tételében, amelyek különböző termelési területekről származnak. A különböző összetevők a Ka, Da, Gl, Tx, Td és Ge. Ennek oka a kudzu virág és a rózsaszín kudzu virág különböző forrásaihoz kapcsolódik.
Jelenleg a Pueraria lobata és a Pueraria lobata szárított virágbimbói szerepelnek a gyógynövények forrásaként. Tekintettel a Pueraria lobata és a Pueraria lobata fő hatóanyagai közötti jelentős különbségekre, klinikai hatékonyságuknak is különbözniük kell. Ezért a termékfejlesztés és a klinikai alkalmazások során meg kell különböztetni és másképp kell használni őket. Ugyanakkor a Ge Hua nagy potenciállal rendelkezik az egészségügyi termékek fejlesztése szempontjából, és sürgősen létre kell hozni egy szabványosított Ge Hua minőségértékelési rendszert. A kutatóintézetünk által létrehozott ujjlenyomat-spektrum az egy teszt többszörös értékelési módszerrel kombinálva képes a Pueraria lobata gyógyászati anyagok többkomponensű és több indexű minőségellenőrzését megvalósítani, miközben csökkenti a referenciaanyagok használatát; Ugyanakkor képes különbséget tenni a Pueraria lobata és a Pueraria lobata között, és hatékonyan értékelni a különböző eredetű Pueraria lobata minőségét; a kísérleti eredmények referenciát nyújthatnak a Pueraria lobata minőségi szabványainak módosításához és javításához, és referenciát nyújthatnak a Pueraria lobata kiváló minőségű csíraplazmaforrásainak kiválasztásához és nemesítéséhez. A hagyományos kínai orvoslás általános minőségértékelési módjában jó alkalmazási kilátásokkal rendelkezik.