Gül standart kaynatmasındaki çoklu bileşenlerin UPLC parmak izi ve kantitatif analizi
Gül kırmızısı, Changchun kırmızısı vb. olarak da bilinen gül çiçekleri, Rosaceae familyasından Rosa chinensis Jacq. türünün kurutulmuş çiçekleridir. Çin'in çeşitli bölgelerinde ekilirler ve yıl boyunca hasat edilebilirler. Çiçekler hafif açıkken toplanır ve gölgede ya da düşük sıcaklıklarda kurutulur. Gül çiçeklerinin tıbbi değeri ilk olarak Li Shizhen'in "Compendium of Materia Medica" adlı eserinde kaydedilmiştir. Tadı tatlıdır, doğası sıcaktır ve karaciğer meridyenine aittir; kan dolaşımını teşvik etme, menstrüasyonu düzenleme ve depresyonu hafifletmek için karaciğeri yatıştırma etkilerine sahiptir. Esas olarak qi durgunluğu ve kan stazı, adet bozuklukları, göğüs ve kaburga şişkinliği ve ağrısı gibi çeşitli hastalıkların tedavisinde kullanılır. Gül çiçekleri flavonoidler, fenolik asitler, aromatik yağlar, tanenler ve pigmentler dahil olmak üzere çeşitli kimyasal bileşenler içerir; bunlar arasında flavonoidler ve fenolik asitler gül çiçeklerinin ana tıbbi bileşenleri olarak kabul edilir. Flavonoidler, kuersetin, kuersetin, kaempferol-3-O-rhamnosid, kaempferol, süksinik asit, gallik asit, etil gallat, hiperosid, hesperidin, izoquercitrin vb. dahil olmak üzere ana bileşenlerdir. Antiviral, antioksidan, bağışıklık güçlendirici ve antikanser etkileri gibi biyolojik aktivitelere sahiptirler.
Geleneksel Çin tıbbının bileşimi karmaşıktır ve farmakolojik etkileri, vücut üzerinde düzenleyici etkiler uygulayan çoklu hedefler, yollar ve genel sistemler üzerindeki çoklu aktif bileşenlerin sinerjik etkilerine dayanmaktadır. Geleneksel Çin tıbbının parmak izi, geleneksel Çin tıbbının kimyasal bileşenlerinin sistematik olarak incelenmesine dayanmaktadır. Geleneksel Çin tıbbı bileşenlerinin bilgilerini madde grupları perspektifinden kapsamlı bir şekilde gösterir ve geleneksel Çin tıbbı kimyasal bileşenlerinin genel durumunu yansıtır. Kapsamlı, ölçülebilir ve etkili bir teknik araçtır. Bu çalışma, kimyasal örüntü tanıma teknolojisi ile birleştirilmiş UPLC yöntemini kullanarak 20 parti gül çiçeği standart kaynatmasının parmak izi spektrumlarını oluşturmuş, gül çiçeği standart kaynatmasını etkileyen ana karakteristik bileşenleri analiz etmiş ve araştırmış ve gül çiçeği standart kaynatmasıyla ilgili preparatların ve kalite standardı araştırmalarının geliştirilmesi için referans sağlamak amacıyla çoklu gösterge bileşenlerinin nicel analizini gerçekleştirmiştir.

 

Standart kaynatmanın temsil kabiliyetini sağlamak için, bu çalışmada gül çiçeği hammaddelerinin ana üretim alanları hakkında bir araştırma yapılmıştır. Hebei Eyaletindeki Baoding Şehri, Henan Eyaletindeki Zhoukou Şehri, Shandong Eyaletindeki Heze Şehri, Shandong Eyaletindeki Linyi Şehri ve Yunnan Eyaletindeki Dali İli gibi büyük ve otantik üretim alanlarından yerinde numuneler de dahil olmak üzere toplam 20 parti numune toplanmıştır. "Geleneksel Çin Tıbbı Formül Granüllerinin Kalite Kontrolü ve Standart Geliştirilmesi için Teknik Gereklilikler" kılavuz ilkelerine göre ve "Tıbbi Kurumlarda Geleneksel Çin Tıbbı Kaynatma Odası için Yönetim Şartnamesi" referans alınarak, standart kaynatma ön işlem yöntemleri (kaynatma süreleri, su ilavesi, kaynatma süresi ve diğer göstergeler ve parametreler) en uygun hazırlama sürecini belirlemek için araştırılır; Düşük sıcaklıkta konsantrasyon ve dondurarak kurutma kullanılarak, standart bir gül kaynatma dondurularak kurutulmuş toz yapılır.
Parmak izi yönteminin oluşturulması sürecinde, ekstraksiyon çözücülerinin (metanol, 70% metanol, 50% metanol, etanol, 70% etanol, seyreltik etanol), ekstraksiyon yöntemlerinin (ultrason, reflü) ve ekstraksiyon sürelerinin (10, 30, 45, 60 dakika) parmak izi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Ekstraksiyonun yeterliliği, kararlılığı ve kullanım kolaylığı göz önünde bulundurularak sonuçta 30 dakika süreyle 50% metanol ultrasonik işlem seçilmiştir. Standart gül çorbası örnekleri üzerinde tam dalga boyu taraması (200-400nm) gerçekleştirmek için bir diyot dizisi dedektörü kullanılmış ve farklı dalga boylarındaki kromatogramların pik sayıları, yanıt değerleri ve çözünürlükleri karşılaştırılmıştır. Sonuçlar, 254nm'nin tespit dalga boyu olarak kullanılmasının daha fazla sayıda kromatografik pik ve daha büyük yanıt değerleri, kararlı bir taban çizgisi ve daha az girişim ile sonuçlandığını göstermiştir. Aynı zamanda, mobil faz su fazı, kolon sıcaklığı ve akış hızının kromatografik koşulları araştırılmış ve sonuç olarak 0,4 mL/dak akış hızı ve 35 ℃ kolon sıcaklığı ile mobil faz su fazı olarak 0,2% fosforik asit çözeltisi kullanılmasına karar verilmiştir.
Farklı kökenlerden gelen gül çiçeklerinin standart kaynağını analiz etmek ve karşılaştırmak için kimyasal örüntü tanıma teknolojisi ile birleştirilmiş parmak izi spektrumu kullanılmıştır. Sonuçlar, denetimsiz HCA ve PCA analizinin farklı kökenlerden gelen örneklerin dört kategoride kümelenebileceğini ortaya koyduğunu göstermiştir. OPLS-DA analizi, başta flavonoidler ve fenolik asit bileşenleri olmak üzere, farklı kökenlerden gelen gül standart kaynatmalarının ayırt edilmesinde önemli bir rol oynayan toplam 11 farklı biyobelirteç tanımlamıştır. Bunlar, gül standart dekoksiyonları için kalite kontrol göstergeleri olarak hizmet edebilir ve gül formülü granüllerinin hammadde kaynakları için daha kapsamlı bir referans sağlayabilir.
Bu çalışmada, 20 parti gül standart kaynatma ürününün kalitesi üzerine bir ön çalışma yapmak için kümeleme, temel bileşen analizi, ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi ve çoklu indeks bileşen içeriği belirleme ile birlikte parmak izi spektrumları kullanılmıştır. Bu yöntem, farklı tıbbi malzeme gruplarının kalitesini etkileyen önemli kromatografik pikleri hızlı bir şekilde tarayabilir. Bunlar arasında gallik asit, tannik asit, hiperosid, izoquercitrin, astragalosid, quercitrin ve quercetin yüksek çözünürlüklü ve referans madde spektral karşılaştırması yoluyla tanımlanmıştır. Sonuçlar, yüksek fenolik asit ve flavonoid içeriğine sahip örneklerin Henan Eyaletinden toplandığını ve HCA ve PCA analizinde S11-S13 kategorilerine ait olduğunu göstermiştir. En düşük içeriğe sahip örnekler ise Yunnan Eyaletinden toplanmış olup ilk kategori olan S1-S6'ya aittir. Bu, sonraki gül standart kaynatma için hammadde koleksiyonunun kökenini seçmek için bir temel sağlayabilir. Şu anda, araştırmalar gül çiçeklerinin esas olarak antioksidan, antiviral, antifungal, antikanser, anti-tümör ve anti-aging gibi biyolojik aktivitelere sahip flavonoidler, flavonoid glikozitler ve fenolik asit bileşikleri içerdiğini göstermektedir. Daha sonraki aşamada, gül çiçeği standart dekoksiyonlarının ve ilgili preparatların kalite kontrolü için referans sağlamak üzere ilaç etkinliğine dayalı derinlemesine araştırmalar yapılacaktır.