Huella digital UPLC y análisis cuantitativo de múltiples componentes en la decocción estándar de rosas
Las flores de rosa, también conocidas como rosa roja, rojo Changchun, etc., son las flores secas de Rosa chinensis Jacq. de la familia de las Rosáceas. Se plantan en varias regiones de China y pueden recolectarse durante todo el año. Se recogen cuando las flores están ligeramente abiertas y se secan a la sombra o a bajas temperaturas. El valor medicinal de las flores de rosa se registró por primera vez en el "Compendio de Materia Médica" de Li Shizhen. Su sabor es dulce, su naturaleza es cálida y pertenece al meridiano del hígado; tiene los efectos de promover la circulación sanguínea, regular la menstruación y calmar el hígado para aliviar la depresión. Se utiliza principalmente para el tratamiento de diversas enfermedades, como el estancamiento del qi y la estasis sanguínea, los trastornos menstruales y la distensión y el dolor de pecho y costillas. Las flores de rosa contienen diversos componentes químicos, como flavonoides, ácidos fenólicos, aceites aromáticos, taninos y pigmentos, entre los cuales los flavonoides y los ácidos fenólicos se consideran los principales ingredientes medicinales de las flores de rosa. Los flavonoides son los principales componentes, incluyendo quercetina, quercetina, kaempferol-3-O-ramnósido, kaempferol, ácido succínico, ácido gálico, galato de etilo, hiperósido, hesperidina, isoquercitrina, etc. Tienen actividades biológicas como efectos antivirales, antioxidantes, potenciadores del sistema inmunitario y anticancerígenos.
La composición de la medicina tradicional china es compleja, y sus efectos farmacológicos se basan en los efectos sinérgicos de múltiples principios activos sobre múltiples dianas, vías y sistemas globales, ejerciendo efectos reguladores sobre el organismo. La huella dactilar de la medicina tradicional china se basa en el estudio sistemático de sus componentes químicos. Muestra de forma exhaustiva la información de los componentes de la medicina tradicional china desde la perspectiva de los grupos de sustancias, reflejando la situación general de los componentes químicos de la medicina tradicional china. Se trata de un medio técnico completo, cuantificable y eficaz. Este estudio estableció espectros de huellas dactilares de 20 lotes de decocción estándar de flor de rosa utilizando el método UPLC combinado con la tecnología de reconocimiento de patrones químicos, analizó y exploró los principales componentes característicos que afectan a la decocción estándar de flor de rosa, y llevó a cabo el análisis cuantitativo de múltiples componentes indicadores, con el fin de proporcionar una referencia para el desarrollo de preparaciones relacionadas con la decocción estándar de flor de rosa y la investigación de estándares de calidad.

 

Para garantizar la representatividad de la decocción estándar, este estudio realizó una encuesta sobre la información de las principales zonas de producción de materias primas de flor de rosa. Se recogieron un total de 20 lotes de muestras, incluidas muestras in situ de las principales y auténticas zonas de producción, como la ciudad de Baoding en la provincia de Hebei, la ciudad de Zhoukou en la provincia de Henan, la ciudad de Heze en la provincia de Shandong, la ciudad de Linyi en la provincia de Shandong y la prefectura de Dali en la provincia de Yunnan. De acuerdo con los principios rectores de los "Requisitos técnicos para el control de calidad y el desarrollo estándar de los gránulos de fórmulas de medicina tradicional china" y con referencia a la "Especificación de gestión para la sala de decocción de medicina tradicional china en instituciones médicas", se investigan los métodos de pretratamiento de la decocción estándar (tiempos de decocción, adición de agua, tiempo de decocción y otros indicadores y parámetros) para determinar el proceso de preparación óptimo; mediante la concentración a baja temperatura y la liofilización, se elabora un polvo liofilizado de decocción de rosas estándar.
En el proceso de establecimiento del método de huella dactilar, se investigaron los efectos de los disolventes de extracción (metanol, metanol 70%, metanol 50%, etanol, etanol 70%, etanol diluido), los métodos de extracción (ultrasonidos, reflujo) y los tiempos de extracción (10, 30, 45, 60 minutos) sobre la huella dactilar. Teniendo en cuenta la idoneidad de la extracción, la estabilidad y la facilidad de manejo, se eligió finalmente el tratamiento ultrasónico con metanol 50% durante 30 minutos. Se utilizó un detector de matriz de diodos para realizar un barrido de longitud de onda completa (200-400 nm) en muestras de sopa de rosa estándar, y se compararon los números de pico, los valores de respuesta y las resoluciones de los cromatogramas a diferentes longitudes de onda. Los resultados mostraron que utilizando 254 nm como longitud de onda de detección se obtenía un mayor número de picos cromatográficos y mayores valores de respuesta, una línea de base estable y menos interferencias. Al mismo tiempo, se investigaron las condiciones cromatográficas de la fase acuosa de la fase móvil, la temperatura de la columna y el caudal, y finalmente se determinó utilizar una solución de ácido fosfórico 0,2% como fase acuosa de la fase móvil, con un caudal de 0,4 mL/min y una temperatura de la columna de 35 ℃.
El espectro de huellas dactilares combinado con la tecnología de reconocimiento de patrones químicos se utilizó para analizar y comparar la decocción estándar de flores de rosa de diferentes orígenes. Los resultados mostraron que los análisis no supervisados HCA y PCA revelaron que las muestras de diferentes orígenes podían agruparse en cuatro categorías. El análisis OPLS-DA identificó un total de 11 biomarcadores diferenciales, principalmente flavonoides y componentes de ácidos fenólicos, que desempeñaron un papel importante en la distinción de las decocciones estándar de rosa de diferentes orígenes. Pueden servir como indicadores de control de calidad de las decocciones estándar de rosa y proporcionar una referencia más completa de las fuentes de materia prima de los gránulos de fórmula de rosa.
En este estudio se utilizaron espectros de huellas dactilares combinados con agrupación, análisis de componentes principales, análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales ortogonales y determinación del contenido de componentes multiíndice para realizar un estudio preliminar sobre la calidad de 20 lotes de decocción estándar de rosa. Este método puede detectar rápidamente los picos cromatográficos clave que afectan a la calidad de diferentes lotes de materiales medicinales. Entre ellos, se identificaron el ácido gálico, el ácido tánico, el hiperósido, la isoquercitrina, el astragalósido, la quercitrina y la quercetina mediante la comparación espectral de alta resolución y de sustancias de referencia. Los resultados mostraron que las muestras con alto contenido en ácidos fenólicos y flavonoides se recogieron en la provincia de Henan, y pertenecían a las categorías S11-S13 en los análisis HCA y PCA. Las muestras con menor contenido procedían de la provincia de Yunnan y pertenecían a la primera categoría S1-S6. Esto puede proporcionar una base para seleccionar el origen de la recolección de la materia prima para la posterior decocción estándar de rosa. En la actualidad, las investigaciones muestran que las flores de rosa contienen principalmente flavonoides, glucósidos flavonoides y compuestos de ácidos fenólicos, que tienen actividades biológicas como antioxidante, antiviral, antifúngica, anticancerígena, antitumoral y antienvejecimiento. En una fase posterior, se llevarán a cabo investigaciones en profundidad basadas en la eficacia farmacológica para proporcionar referencias para el control de calidad de las decocciones estándar de flor de rosa y los preparados relacionados.