UPLC-fingeraftryk og kvantitativ analyse af flere komponenter i standardafkog af roser
Rosenblomster, også kendt som rosenrød, Changchun-rød osv., er de tørrede blomster af Rosa chinensis Jacq. i Rosaceae-familien. De er plantet i forskellige regioner i Kina og kan høstes hele året. De plukkes, når blomsterne er lidt åbne, og tørres i skyggen eller ved lave temperaturer. Den medicinske værdi af rosenblomster blev først registreret i Li Shizhens "Compendium of Materia Medica". Dens smag er sød, dens natur er varm, og den hører til levermeridianen; den har den virkning, at den fremmer blodcirkulationen, regulerer menstruationen og beroliger leveren for at lindre depression. Den bruges hovedsageligt til behandling af forskellige sygdomme som qi-stagnation og blodstasis, menstruationsforstyrrelser, bryst- og ribbensudspænding og smerter. Rosenblomster indeholder forskellige kemiske komponenter, herunder flavonoider, fenoliske syrer, aromatiske olier, tanniner og pigmenter, hvoraf flavonoider og fenoliske syrer anses for at være de vigtigste medicinske ingredienser i rosenblomster. Flavonoider er de vigtigste komponenter, herunder quercetin, quercetin, kaempferol-3-O-rhamnosid, kaempferol, ravsyre, gallussyre, ethylgallat, hyperosid, hesperidin, isoquercitrin osv. De har biologiske aktiviteter som f.eks. antivirale, antioxidante, immunforstærkende og kræfthæmmende effekter.
Sammensætningen af traditionel kinesisk medicin er kompleks, og dens farmakologiske virkninger er baseret på de synergistiske virkninger af flere aktive ingredienser på flere mål, veje og overordnede systemer, der udøver regulerende virkninger på kroppen. Fingeraftrykket af traditionel kinesisk medicin er baseret på den systematiske undersøgelse af de kemiske komponenter i traditionel kinesisk medicin. Det viser omfattende oplysninger om komponenter i traditionel kinesisk medicin ud fra stofgrupper og afspejler den overordnede situation for kemiske komponenter i traditionel kinesisk medicin. Det er et omfattende, kvantificerbart og effektivt teknisk middel. Denne undersøgelse etablerede fingeraftryksspektre af 20 partier standardafkog af rosenblomster ved hjælp af UPLC-metoden kombineret med kemisk mønstergenkendelsesteknologi, analyserede og udforskede de vigtigste karakteristiske komponenter, der påvirker standardafkog af rosenblomster, og udførte kvantitativ analyse af flere indikatorkomponenter for at give reference til udviklingen af rosenblomststandardafkogrelaterede præparater og kvalitetsstandardforskning.

 

For at sikre, at standardafkoget er repræsentativt, blev der i denne undersøgelse foretaget en undersøgelse af oplysningerne om de vigtigste produktionsområder for rosenblomstråvarer. Der blev indsamlet i alt 20 partier prøver, herunder prøver på stedet fra større og autentiske produktionsområder som Baoding City i Hebei-provinsen, Zhoukou City i Henan-provinsen, Heze City i Shandong-provinsen, Linyi City i Shandong-provinsen og Dali Prefecture i Yunnan-provinsen. I henhold til de vejledende principper i "Tekniske krav til kvalitetskontrol og standardudvikling af formelgranulat til traditionel kinesisk medicin" og med henvisning til "Management Specification for Traditional Chinese Medicine Decoction Room in Medical Institutions" undersøges forbehandlingsmetoderne for standardafkog (afkogstider, vandtilsætning, afkogstid og andre indikatorer og parametre) for at bestemme den optimale tilberedningsproces; Ved hjælp af lavtemperaturkoncentration og frysetørring fremstilles et frysetørret standardrosenafkogspulver.
I processen med at etablere fingeraftryksmetoden blev virkningerne af ekstraktionsopløsningsmidler (methanol, 70% methanol, 50% methanol, ethanol, 70% ethanol, fortyndet ethanol), ekstraktionsmetoder (ultralyd, tilbagesvaling) og ekstraktionstider (10, 30, 45, 60 minutter) på fingeraftrykket undersøgt. I betragtning af den tilstrækkelige ekstraktion, stabilitet og brugervenlighed blev 50% methanol ultralydsbehandling i sidste ende valgt i 30 minutter. En diodearray-detektor blev brugt til at udføre fuld bølgelængdescanning (200-400 nm) på standard rosensuppeprøver, og antallet af toppe, responsværdier og opløsninger af kromatogrammer ved forskellige bølgelængder blev sammenlignet. Resultaterne viste, at brug af 254 nm som detektionsbølgelængde resulterede i et højere antal kromatografiske toppe og større responsværdier, en stabil basislinje og mindre interferens. Samtidig blev de kromatografiske betingelser for mobilfasens vandfase, søjletemperatur og strømningshastighed undersøgt, og det blev endelig bestemt at bruge en 0,2% fosforsyreopløsning som mobilfasens vandfase med en strømningshastighed på 0,4 mL/min og en søjletemperatur på 35 ℃.
Fingeraftryksspektret kombineret med kemisk mønstergenkendelsesteknologi blev brugt til at analysere og sammenligne standardafkog af rosenblomster fra forskellige oprindelser. Resultaterne viste, at uovervåget HCA- og PCA-analyse afslørede, at prøver fra forskellige oprindelser kunne grupperes i fire kategorier. OPLS-DA-analysen identificerede i alt 11 differentierede biomarkører, primært flavonoider og fenoliske syrekomponenter, som spillede en vigtig rolle i at skelne mellem standardafkog af roser fra forskellige oprindelser. De kan tjene som kvalitetskontrolindikatorer for standardafkog af roser og give en mere omfattende reference for råvarekilderne til rosenformelgranulat.
Denne undersøgelse brugte fingeraftryksspektre kombineret med klyngedannelse, hovedkomponentanalyse, ortogonal partiel mindste kvadraters diskriminantanalyse og bestemmelse af multiindeks-komponentindhold til at gennemføre en foreløbig undersøgelse af kvaliteten af 20 partier standardafkog af roser. Denne metode kan hurtigt screene vigtige kromatografiske toppe, der påvirker kvaliteten af forskellige partier af medicinske materialer. Blandt dem blev gallussyre, garvesyre, hyperosid, isoquercitrin, astragalosid, quercitrin og quercetin identificeret gennem spektral sammenligning med høj opløsning og referencestoffer. Resultaterne viste, at prøverne med højt indhold af fenoliske syrer og flavonoider blev indsamlet fra Henan-provinsen og tilhørte kategorierne S11-S13 i HCA- og PCA-analysen. Prøverne med det laveste indhold blev indsamlet i Yunnan-provinsen og tilhørte den første kategori S1-S6. Dette kan danne grundlag for udvælgelsen af oprindelsen af det indsamlede råmateriale til det efterfølgende standardafkog af roser. På nuværende tidspunkt viser forskning, at rosenblomster hovedsageligt indeholder flavonoider, flavonoide glykosider og fenoliske syreforbindelser, som har biologiske aktiviteter som antioxidant, antiviral, antifungal, anticancer, antitumor og anti-aging. På et senere tidspunkt vil der blive udført dybdegående forskning baseret på lægemiddelvirkning for at give reference til kvalitetskontrollen af standardafkog af rosenblomster og relaterede præparater.