Идентификация жука-землеройки sinensis и его подготовка по характеристическим ионам
Впервые червь земляной жук был записан в "Классике медицинской медицины" Шэньнона и был причислен к среднему классу. Жук молотый синенсис Уокера или Steleophaga plancyi (Boleny) - это высушенное тело самки Eupolyphaga sinensis Walker или Steleophaga plancyi. В состав молотого жука входят в основном аминокислоты, белки, летучие масляные соединения, а также другие компоненты, такие как алкалоиды, жирные кислоты, фибринолитические активные вещества и микроэлементы. Молотый жук обладает эффектами рассеивания застоя крови, устранения твердых узлов, распирания и боли, опускания грудины и открытия каналов и т. д. Он используется при ушибах и травмах, повреждениях сухожилий и переломах, застое крови и аменорее, послеродовом застое крови и болях в животе, признаках и отеках. Современные фармакологические исследования показывают, что жужелица обладает антикоагулянтной, противоопухолевой, липидорегулирующей, обезболивающей, противовоспалительной и бактерицидной активностью, и ее даже называют "первым препаратом, регулирующим кровоток". Он широко используется в клинической практике (по статистике базы данных "Яожинет", собран 151 рецепт традиционных китайских патентованных лекарств и простых препаратов, содержащих жужелицу), а дозировка также велика. В настоящее время на рынке продается два вида жуков-землероек: дикие и искусственно выращенные. Однако, поскольку количество диких жуков-землероек с каждым годом уменьшается, искусственно выращенные продукты составляют большую часть в клиническом применении, а поведение искусственных фальсификатов и примесей происходит время от времени, что может привести к ошибочному суждению только при определении их характеристик. В целом, тест-пункты, включенные в издание Китайской фармакопеи 2020 года по червю молотому, относительно просты, и не могут всесторонне и точно отразить подлинность и качество червя молотого жука.

В молотом жуке в основном содержатся аминокислоты, белки, летучие масляные соединения и т.д. На данном этапе исследования его качества также сосредоточены на этих компонентах. В последние годы некоторые ученые также использовали методы молекулярной фармакогнозии для изучения подлинности жужелиц. Например, Чен и др. с помощью хроматографии и молекулярной биологии установили метод идентификации жуков eupolyphaga и их подделки - жуков-землероек Пномпеня. После сравнения штрих-кодов ДНК с базой данных можно получить последовательность ближайшего вида и его сравнение, что позволяет четко определить источник разновидностей; Лу и др. использовали полиакриламидный гель-электрофорез для идентификации белков трех видов жуков-землероек, причем из одного и того же и разных мест. Метод обладает высокой разрешающей способностью и хорошей воспроизводимостью. Однако технология молекулярной фармакогнозии имеет высокие лабораторные требования и трудно продвигается, имея определенные ограничения. В Фармакопее Китайской Народной Республики (издание 2020 года) (далее - "Китайская фармакопея") в разделе идентификации лекарственного сырья молотого жука синенсис есть только микроскопическая идентификация и тонкослойная идентификация, и этот метод применим только для идентификации сырья. Для экстрагированного молотого жука синенсис и препаратов, содержащих молотый жук синенсис, этот метод обладает плохой передаваемостью и не может быть эффективно отличим.
Как биомаркер с видовыми различиями, характерные пептиды становятся все более и более зрелыми в исследованиях медицины животных. Некоторые ученые провели исследование черепашьего А, рога антилопы, клея из шкуры оленя, жвачки из рога оленя, сороконожки, рога оленя и т.д. с помощью технологии характерных пептидов. Такие характеристики, как хорошая специфичность и простота работы, облегчают ее применение в ежедневном контроле. Технология характерных пептидов, основанная на масс-спектрометрическом детектировании, может одновременно задавать информацию об ионах характерных пептидов нескольких видов в качестве индикаторов обнаружения, что, как ожидается, позволит достичь идентификации подлинности, а также точно определить фальсифицированные компоненты и относительно количественно определить фальсифицированные компоненты. У этого метода широкие и яркие перспективы применения. Определение ионных пар было включено в Китайскую фармакопею (2020) для идентификации клея из шкуры оленя, пантового клея и клея из черепахового панциря. Появление характерных пептидов в качестве индикаторов качества в официальном правовом кодексе Китая также положило конец ситуации, когда лекарства для животных не имеют специальных компонентов контроля качества в правовых стандартах. В качестве растворителя для экстракта в основном используется вода. После того как препараты животного происхождения, такие как молотый жук, отцеживаются и кипятятся, коллаген подвергается неспецифической деградации с образованием водорастворимых пептидов. Некоторые пептиды могут всасываться в кровь через биопленку и оказывать различные биологические эффекты. Тем не менее, в стране и за рубежом нет сообщений об идентификации молотого жука sinensis и его подготовке с помощью характеристических ионов. В данном исследовании, используя вышеупомянутую технологию идентификации по характерным ионам, она была применена для определения подлинности молотого жука, что послужило основой для исследования качества молотого жука и его препаратов.

Было доказано, что молотый жук синенсис обладает эффективностью в лечении различных заболеваний, таких как рак, подавление тромбоза, повышение иммунитета и лечение аваскулярного некроза головки бедренной кости. Недавно стало известно, что жук-могильщик, пиявка и многоножка показали очевидную клиническую эффективность при эндометрите. Однако правильно идентифицировать жуков-землероек и рецепты, содержащие жуков-землероек, довольно сложно. В настоящее время при проверке качества препаратов для животных используются в основном такие методы, как морфология, микроскопия и тонкослойное исследование. Кроме того, большинство препаратов для животных содержат схожий состав аминокислот и нуклеозидов, что также приводит к неоднозначности в идентификации и анализе качества разновидностей препаратов для животных. Поэтому для контроля и оценки качества лекарственных средств для животных крайне важно разработать и внедрить ряд эксклюзивных аналитических методов идентификации и оценки лекарственных средств для животных. В последние годы постепенно популяризируется и применяется модель контроля качества традиционной китайской медицины для животных, основанная на качественном/количественном анализе характерных пептидов. Китайская фармакопея 2020 года содержит эксклюзивные методы идентификации пептидов клея из шкуры оленя, камеди из оленьих рогов и камеди из панциря черепахи, но в ней нет метода идентификации характерных ионов в молотом жужелице.
Характерные ионы, установленные в данном исследовании, были определены с помощью технологии переваривания белков с использованием раствора бикарбоната аммония 1% в качестве растворителя для экстракции и трипсина для ферментативного гидролиза образца; были исследованы метод экстракции, дозировка фермента и время экстракции образцов, и были определены оптимальные условия экстракции: нагревание под рефлюксом (метод экстракции), 50 мкл (дозировка фермента) и 30 минут (время экстракции).

Поскольку метод контроля качества молотого жука-червеца, зафиксированный в Фармакопее Китайской Народной Республики, относительно прост, на рынке молотого жука-червеца нередки случаи производства и продажи поддельных продуктов и выдачи некачественных продуктов за качественные. В настоящее время цена на молотого жука-червяка на рынке продолжает расти. Чтобы получить экономическую выгоду, нарушители закона добавляют квасцы, соль и другие ингредиенты в лекарство из молотого жука, чтобы увеличить прибыль, и даже используют поддельные продукты для замены подлинных. Кроме того, пномпеньский молотый жук также был включен в стандарт традиционной китайской медицины в провинции Гуандун и долгое время использовался в качестве местного домашнего средства. Однако исследования показали, что состав пномпеньского молотого жука отличается от состава Eupolyphaga и Eupolyphaga; в то же время стандартный отвар различных препаратов животного происхождения потерял форму кусочков отвара и его трудно идентифицировать. Поэтому в данном исследовании была разработана технология идентификации характерных ионов на основе масс-спектрометрии. Установлено, что m/z 415,72 (двойной заряд) → 406,72, 415,72 (двойной заряд) → 667,34 могут быть использованы в качестве характеристического иона для идентификации молотого жука Sinensis. В результате применения и обнаружения 24 партий лекарственного сырья из различных источников, 21 партии экстрактов червеца молотого, 6 партий препаратов червеца молотого, 6 различных лекарств для животных и 3 видов фальсификатов червеца молотого, метод обнаружения может быть применен к 2 различным примитивным червецам молотым, что подтверждает специфичность характеристического иона, даже если он имеет четкое различие между полупродуктами и препаратами, содержащими червеца молотого, которые потеряли свойства исходного лекарственного сырья.
В то же время этот метод прост в использовании, хорошо воспроизводим и не имеет сложного процесса предварительной обработки, что значительно снижает порог внедрения этого метода. Хотя большое количество исследований показало, что метод идентификации традиционной китайской медицины на основе животных с помощью характерных пептидов является разумным и осуществимым, соответствующие методы оценки качества все еще нуждаются в дальнейшем обогащении и совершенствовании, что также является важным направлением будущих исследований по контролю качества традиционной китайской медицины. В заключение следует отметить, что метод, разработанный в данном исследовании, позволит эффективно устранить недостатки в стандартах проверки молотого жука и его отвара, решить проблему, связанную с тем, что подлинность молотого жука можно определить только на основе традиционного опыта в течение длительного времени, повысить уровень контроля качества, а также предоставить ссылку на безопасность и эффективность клинических препаратов, связанных с молотым жуком.