Identifikation af løbebille sinensis og dens præparat ved hjælp af karakteristiske ioner
Jordbilleormen blev første gang registreret i Shennongs Classic of Materia Medica og blev opført som middelklasse. Løbebille sinensis Walker eller Steleophaga plancyi (Boleny) er den tørrede hunkrop af Eupolyphaga sinensis Walker eller Steleophaga plancyi. Løbebillen indeholder hovedsageligt aminosyrer, proteiner, flygtige olieforbindelser og andre ingredienser som alkaloider, fedtsyrer, fibrinolytiske aktive ingredienser og sporstoffer. Den jordede bille har virkningerne af at sprede blodstasis, eliminere fast knude, detumescence og smerte, sænke brystet og åbne kanalerne osv. Det bruges til blå mærker og skader, seneskader og brud, blodstase og amenoré, postpartum blodstase og mavesmerter, tegn og hævelse. Moderne farmakologisk forskning viser, at jordbæger har antikoagulerende, antitumor-, blodlipidregulerende, smertestillende, antiinflammatorisk og bakteriedræbende aktiviteter og kaldes endda "det første lægemiddel til at regulere blodgennemstrømningen". Det bruges i vid udstrækning i klinisk praksis (ifølge statistikkerne i databasen Yaozhinet blev der indsamlet 151 traditionelle kinesiske patentlægemidler og enkle præparater, der indeholder jordbillebille), og doseringen er også stor. På nuværende tidspunkt er der to slags løbebiller, der sælges på markedet: vilde og kunstigt opdrættede. Men fordi antallet af vilde løbebiller falder år for år, udgør kunstigt opdrættede produkter en stor andel i klinisk anvendelse, og adfærden af kunstig forfalskning og urenhed forekommer fra tid til anden, hvilket kun kan føre til fejlvurdering ved at identificere deres egenskaber. I det hele taget er de testelementer, der er inkluderet under den jordede billeorm i 2020-udgaven af den kinesiske farmakopé, relativt enkle, hvilket ikke omfattende og præcist kan afspejle ægtheden og kvaliteten af den jordede billeorm.

Jordbillen indeholder hovedsageligt aminosyrer, proteiner, flygtige olieforbindelser osv. På nuværende tidspunkt er den kvalitetsrelaterede forskning også fokuseret på disse komponenter. I de senere år har nogle forskere også brugt molekylære farmakognosi-metoder til at undersøge ægtheden af løbebiller. For eksempel har Chen et al. også etableret identifikationsmetoden for eupolyphaga-biller og deres falske løbebille Phnom Penh gennem kromatografi og molekylærbiologi. Efter sammenligning af DNA-stregkoder med databasen kan sekvensen af den nærmeste art og dens sammenligning gives, hvilket klart kan bestemme kilden til sorter; Lu et al. brugte polyakrylamidgelelektroforese til at identificere proteinerne fra tre slags løbebiller og dem fra samme og forskellige steder. Metoden har høj opløsning og god reproducerbarhed. Men molekylær farmakognoseteknologi har høje laboratoriekrav og er vanskelig at fremme med visse begrænsninger. I Folkerepublikken Kinas farmakopé (2020-udgaven) (i det følgende benævnt "den kinesiske farmakopé") er der kun mikroskopisk identifikation og tyndlagsidentifikation under punktet om identifikation af medicinske materialer fra jordbille sinensis, og denne metode gælder kun for identifikation af råmaterialer. For den ekstraherede jordbæger sinensis og de formulerede præparater, der indeholder jordbæger sinensis, har metoden dårlig overførbarhed og kan ikke skelnes effektivt.
Som en biomarkør med artsforskelle bliver karakteristiske peptider mere og mere modne inden for dyremedicinsk forskning. Nogle forskere har gennemført forskning i skildpadde A, antilopehorn, æselhudlim, hjortehorngummi, tusindben, hjortehorn osv. gennem karakteristisk peptidteknologi. Dens egenskaber med god specificitet og enkel betjening gør det lettere at fremme i den daglige inspektion. Den karakteristiske peptidteknologi baseret på massespektrometri-detektion kan samtidig indstille flere arters karakteristiske peptidionoplysninger som detektionsindikatorer, hvilket forventes at opnå ægthedsidentifikation, samtidig med at man yderligere nøjagtigt bestemmer forfalskede komponenter og relativt kvantificerer forfalskede komponenter. Det har brede og lyse anvendelsesmuligheder. Ionpar-bestemmelse er blevet inkluderet i identifikationselementerne for lim af æselskind, lim af gevir og lim af skildpaddeskjold i den kinesiske farmakopé (2020). Udseendet af karakteristiske peptider som kvalitetsindikatorer i Kinas officielle lovkodeks har også sat en stopper for den situation, hvor lægemidler til dyr ikke har specifikke kvalitetskontrolkomponenter i juridiske standarder. Ekstraktet bruger for det meste vand som opløsningsmiddel. Når de animalske lægemidler som f.eks. jordbæger er afkogt og kogt, vil kollagenet undergå uspecifik nedbrydning og danne vandopløselige peptider. Nogle peptider kan optages i blodet gennem biofilmen og have en række forskellige biologiske effekter. Der er dog ingen rapport om identifikation af jordbæger sinensis og dens fremstilling ved hjælp af karakteristiske ioner i ind- og udland. I denne undersøgelse blev ovennævnte karakteristiske ionidentifikationsteknologi anvendt som reference til at identificere ægtheden af løbebiller, hvilket gav en reference til kvalitetsforskningen af løbebiller og deres præparater.

Det er blevet bevist, at løbebillen sinensis er effektiv til behandling af forskellige sygdomme, såsom kræft, hæmning af trombose, styrkelse af immuniteten og behandling af avaskulær nekrose i lårbenshovedet. For nylig blev det rapporteret, at løbebille, igle og tusindben viste tydelig klinisk effekt ved endometritis. Det er dog vanskeligt at identificere løbebiller og recepter, der indeholder løbebiller, korrekt. På nuværende tidspunkt fokuserer kvalitetstesten af lægemidler til dyr hovedsageligt på metoder som morfologi, mikroskopi og tyndlagstest. Desuden indeholder de fleste animalske lægemidler lignende sammensætninger af aminosyrer og nukleosider, hvilket også fører til tvetydighed i identifikationen og kvalitetsanalysen af animalske lægemiddelvarianter. Derfor er det afgørende at udvikle og etablere en række eksklusive analysemetoder til identifikation og evaluering af animalske lægemidler til kvalitetskontrol og vurdering af animalske lægemidler. I de senere år er kvalitetskontrolmodellen for traditionel kinesisk medicin til dyr baseret på kvalitativ/kvantitativ analyse af karakteristiske peptider gradvist blevet populariseret og anvendt. Den kinesiske farmakopé 2020 indeholder de eksklusive peptididentifikationsmetoder for æselhudlim, hjortehornsgummi og skildpaddegummi, men der er ingen identifikationsmetode for karakteristiske ioner i jordbillebille.
De karakteristiske ioner, der blev etableret i denne undersøgelse, blev påvist ved proteinfordøjelsesteknologi ved hjælp af 1% ammoniumbicarbonatopløsning som ekstraktionsmiddel og trypsin til enzymatisk hydrolyse af prøven; Og ekstraktionsmetoden, enzymdoseringen og ekstraktionstiden for prøverne blev undersøgt, og de optimale ekstraktionsbetingelser blev bestemt til at være opvarmning af tilbagesvaling (ekstraktionsmetode), 50 μ L (enzymdosering) og 30 minutter (ekstraktionstid).

Fordi metoden til kvalitetskontrol af jordbæger, der er registreret i Folkerepublikken Kinas farmakopé, er relativt enkel, er det ikke ualmindeligt at producere og sælge falske produkter og give de ringere produkter ud for at være de bedre på markedet for jordbæger. På nuværende tidspunkt fortsætter prisen på løbebiller med at stige på markedet. For at opnå økonomiske fordele har lovovertrædere tilsat alun, salt og andre ingredienser til ormemedicin for at øge fortjenesten og endda brugt falske produkter til at erstatte de ægte. Derudover er Phnom Penh-jordbille også blevet inkluderet i standarden for traditionel kinesisk medicin i Guangdong-provinsen og er blevet brugt som et lokalt husholdningsprodukt i lang tid. Forskning viser imidlertid, at sammensætningen af Phnom Penh jordbille er forskellig fra Eupolyphaga og Eupolyphaga; Samtidig har standardafkoget af forskellige animalske lægemidler mistet formen af afkogningsstykker og er vanskeligt at identificere. Derfor har denne undersøgelse etableret en karakteristisk ionidentifikationsteknologi baseret på massespektrometri. Det viser sig, at m/z 415,72 (dobbelt ladning) → 406,72, 415,72 (dobbelt ladning) → 667,34 kan bruges som den karakteristiske ion til identifikation af jordbille sinensis. Gennem anvendelse og påvisning af 24 partier af medicinske materialer med løbebiller fra forskellige kilder, 21 partier af ekstrakter af løbebiller, 6 partier af præparater med løbebiller, 6 forskellige lægemidler til dyr og 3 slags forfalskninger af løbebiller, kan påvisningsmetoden anvendes på 2 forskellige primitive løbebiller, hvilket bekræfter den karakteristiske ions specificitet, selv om den har en klar skelnen mellem mellemprodukter og præparater, der indeholder løbebiller, der har mistet egenskaberne ved de oprindelige medicinske materialer.
Samtidig er denne metode enkel at bruge, meget reproducerbar og har ingen kompleks forbehandlingsproces, hvilket i høj grad reducerer implementeringstærsklen for denne metode. Selvom et stort antal undersøgelser har vist, at metoden til at identificere dyrebaseret traditionel kinesisk medicin ved hjælp af karakteristiske peptider er rimelig og gennemførlig, skal de relevante kvalitetsevalueringsmetoder stadig beriges og forbedres yderligere, hvilket også er en vigtig retning for fremtidig forskning i kvalitetskontrol af traditionel kinesisk medicin. Afslutningsvis vil den metode, der er etableret i denne undersøgelse, effektivt supplere manglerne i inspektionsstandarderne for jordbæger og dets afkogningsstykker, løse problemet med, at jordbæger kun kan identificere ægthed gennem traditionel erfaring i lang tid, forbedre dets kvalitetskontrolniveau og give en reference for sikkerheden og effektiviteten af kliniske lægemidler relateret til jordbæger.