Identificación del escarabajo de tierra sinensis y su preparación mediante iones característicos
El gusano escarabajo de tierra se registró por primera vez en el Clásico de la Materia Médica de Shennong, y fue catalogado como de grado medio. El escarabajo de tierra sinensis Walker o Steleophaga plancyi (Boleny) es el cuerpo femenino desecado de Eupolyphaga sinensis Walker o Steleophaga plancyi. El escarabajo de tierra contiene principalmente aminoácidos, proteínas, compuestos oleosos volátiles y otros ingredientes como alcaloides, ácidos grasos, principios activos fibrinolíticos y oligoelementos. El escarabajo de tierra tiene los efectos de dispersar la estasis sanguínea, eliminar el nudo firme, la detumescencia y el dolor, bajar el pecho y abrir los canales, etc. Se utiliza para contusiones y heridas, lesiones tendinosas y fracturas, estasis sanguínea y amenorrea, estasis sanguínea postparto y dolor abdominal, signos e hinchazón. La investigación farmacológica moderna demuestra que el escarabajo de tierra tiene actividad anticoagulante, antitumoral, reguladora de los lípidos sanguíneos, analgésica, antiinflamatoria y bactericida, e incluso se le denomina "el primer fármaco regulador del flujo sanguíneo". Se utiliza ampliamente en la práctica clínica (según las estadísticas de la base de datos de Yaozhinet, se recogieron 151 recetas de medicinas tradicionales chinas patentadas y preparaciones simples que contienen escarabajo de tierra), y su dosificación también es grande. En la actualidad se venden en el mercado dos tipos de escarabajos de tierra: silvestres y criados artificialmente. Sin embargo, dado que el número de escarabajos picudos silvestres disminuye año tras año, los productos criados artificialmente representan una gran proporción en la aplicación clínica, y el comportamiento de adulteración e impureza artificial se produce de vez en cuando, lo que puede llevar a un juicio erróneo sólo mediante la identificación de sus características. En general, los ítems de prueba incluidos bajo el gusano escarabajo molido en la edición 2020 de la Farmacopea China son relativamente simples, lo que no puede reflejar de forma exhaustiva y precisa la autenticidad y calidad del gusano escarabajo molido.

El escarabajo de tierra contiene principalmente aminoácidos, proteínas, compuestos volátiles de aceite, etc. En la actualidad, la investigación relacionada con su calidad también se centra en estos componentes. En los últimos años, algunos estudiosos también han utilizado métodos de farmacognosia molecular para estudiar la autenticidad de los escarabajos de tierra. Por ejemplo, Chen et al. también han establecido el método de identificación de los escarabajos eupolyphaga y su falso escarabajo de tierra Phnom Penh mediante cromatografía y biología molecular. Después de comparar los códigos de barras de ADN con la base de datos, se puede dar la secuencia de la especie más cercana y su comparación, lo que puede determinar claramente el origen de las variedades; Lu et al. utilizaron la electroforesis en gel de poliacrilamida para identificar las proteínas de tres tipos de escarabajos de tierra y las de los mismos y diferentes lugares. El método tiene alta resolución y buena reproducibilidad. Sin embargo, la tecnología de farmacognosia molecular tiene elevados requisitos de laboratorio y es difícil de promover, con ciertas limitaciones. En la Farmacopea de la República Popular China (Edición 2020) (en lo sucesivo, la "Farmacopea China"), sólo existen la identificación microscópica y la identificación de capa fina en el punto de identificación de materiales medicinales de escarabajo de tierra sinensis, y este método sólo es aplicable a la identificación de materias primas. Para el escarabajo sinensis molido extraído y las preparaciones formuladas que contienen escarabajo sinensis molido, el método tiene poca transmisibilidad y no puede distinguirse eficazmente.
Como biomarcador con diferencia de especie, los péptidos característicos están madurando cada vez más en la investigación de la medicina animal. Algunos estudiosos han realizado la investigación de A de tortuga, cuerno de antílope, cola de piel de asno, goma de cuerno de ciervo, ciempiés, cuerno de ciervo, etc. mediante la tecnología de péptidos característicos. Sus características de buena especificidad y operación sencilla facilitan su promoción en la inspección diaria. La tecnología de péptidos característicos basada en la detección por espectrometría de masas puede establecer simultáneamente información de iones de péptidos característicos de múltiples especies como indicadores de detección, con lo que se espera lograr la identificación de la autenticidad y, al mismo tiempo, determinar con mayor precisión los componentes adulterados y cuantificar relativamente los componentes adulterados. Sus perspectivas de aplicación son amplias y brillantes. La determinación del par de iones se ha incluido en los elementos de identificación de la cola de piel de asno, la cola de asta y la cola de carey en la Farmacopea China (2020). La aparición de péptidos característicos como indicadores de calidad en el código legal oficial de China también ha puesto fin a la situación en la que los medicamentos para animales no tienen componentes específicos de control de calidad en las normas legales. El extracto utiliza principalmente agua como disolvente. Después de que los medicamentos para animales, como el escarabajo molido, se decocten y hiervan, el colágeno sufrirá una degradación no específica para formar péptidos solubles en agua. Algunos péptidos pueden ser absorbidos en la sangre a través de la biopelícula para desempeñar una variedad de efectos biológicos. Sin embargo, no existe ningún informe sobre la identificación del escarabajo de tierra sinensis y su preparación mediante iones característicos en el país y en el extranjero. En este estudio, utilizando como referencia la tecnología de identificación por iones característicos mencionada, se aplicó para identificar la autenticidad de los escarabajos de tierra, proporcionando una referencia para la investigación de la calidad de los escarabajos de tierra y sus preparados.

Se ha demostrado la eficacia del escarabajo de tierra sinensis en el tratamiento de diversas enfermedades, como el cáncer, la inhibición de la trombosis, la mejora de la inmunidad y el tratamiento de la necrosis avascular de la cabeza femoral. Recientemente, se informó de que el escarabajo de tierra, la sanguijuela y el ciempiés mostraban una eficacia clínica evidente en la endometritis. Sin embargo, es difícil identificar correctamente los escarabajos de tierra y las recetas que los contienen. En la actualidad, las pruebas de calidad de los medicamentos para animales se centran principalmente en métodos como la morfología, la microscopía y las pruebas en capa fina. Además, la mayoría de los medicamentos para animales contienen composiciones similares de aminoácidos y nucleósidos, lo que también provoca ambigüedad en la identificación y el análisis de calidad de las variedades de medicamentos para animales. Por lo tanto, es crucial desarrollar y establecer una serie de métodos analíticos exclusivos para la identificación y evaluación de fármacos de origen animal para el control de calidad y la evaluación de fármacos de origen animal. En los últimos años, se ha popularizado y aplicado gradualmente el modelo de control de calidad de la medicina tradicional china de origen animal basado en el análisis cualitativo/cuantitativo de péptidos característicos. La Farmacopea China 2020 contiene los métodos de identificación de péptidos exclusivos de la cola de piel de asno, la goma de cuerno de ciervo y la goma de caparazón de tortuga, pero no existe ningún método de identificación de iones característicos en el escarabajo de tierra.
Los iones característicos establecidos en este estudio se detectaron mediante tecnología de digestión de proteínas utilizando solución de bicarbonato de amonio 1% como disolvente de extracción y tripsina para la hidrólisis enzimática de la muestra; Y se investigaron el método de extracción, la dosis de enzima y el tiempo de extracción de las muestras, y se determinó que las condiciones óptimas de extracción eran reflujo de calentamiento (método de extracción), 50 μ L (dosis de enzima) y 30 minutos (tiempo de extracción).

Dado que el método de control de calidad del gusano escarabajo de tierra registrado en la Farmacopea de la República Popular China es relativamente sencillo, no es infrecuente que en el mercado del gusano escarabajo de tierra se produzcan y vendan productos falsos y se hagan pasar los de calidad inferior por los de calidad superior. En la actualidad, el precio del gusano escarabajo de tierra sigue subiendo en el mercado. Para obtener beneficios económicos, los infractores de la ley han añadido alumbre, sal y otros ingredientes a la medicina del gusano escarabajo molido para aumentar los beneficios, e incluso han utilizado productos falsos para sustituir a los auténticos. Además, el escarabajo molido de Phnom Penh también se ha incluido en la norma de medicina tradicional china de la provincia de Guangdong, y se ha utilizado como producto doméstico local durante mucho tiempo. Sin embargo, la investigación muestra que la composición del escarabajo molido de Phnom Penh es diferente de la de Eupolyphaga y Eupolyphaga; Al mismo tiempo, la decocción estándar de diferentes medicamentos para animales ha perdido la forma de piezas de decocción y es difícil de identificar. Por lo tanto, este estudio ha establecido una tecnología de identificación de iones característicos basada en la espectrometría de masas. Se encuentra que m / z 415,72 (doble carga) → 406,72, 415,72 (doble carga) → 667,34 se puede utilizar como el ion característico para la identificación de escarabajo de tierra sinensis. Mediante la aplicación y detección de 24 lotes de materiales medicinales de gusano escarabajo molido de diferentes fuentes, 21 lotes de extractos de gusano escarabajo molido, 6 lotes de preparados de gusano escarabajo molido, 6 medicamentos animales diferentes y 3 tipos de adulterantes de gusano escarabajo molido, el método de detección puede aplicarse a 2 gusanos escarabajo molidos primitivos diferentes, lo que confirma la especificidad del ion característico, incluso si tiene una clara distinción entre los intermedios y los preparados que contienen gusano escarabajo molido que han perdido las propiedades de los materiales medicinales originales.
Al mismo tiempo, este método es fácil de usar, altamente reproducible y no tiene ningún proceso complejo de preprocesamiento, lo que reduce en gran medida el umbral de aplicación de este método. Aunque un gran número de estudios han demostrado que el método de identificación de la medicina tradicional china de origen animal mediante el uso de péptidos característicos es razonable y factible, los métodos de evaluación de la calidad pertinentes aún deben enriquecerse y mejorarse más, lo que también constituye una dirección importante para la investigación futura sobre el control de calidad de la medicina tradicional china. En conclusión, el método establecido en este estudio suplirá eficazmente las deficiencias de las normas de inspección del escarabajo de tierra y sus piezas de decocción, resolverá el problema de que el escarabajo de tierra sólo puede identificar la autenticidad a través de la experiencia tradicional durante mucho tiempo, mejorará su nivel de control de calidad y proporcionará una referencia para la seguridad y eficacia de los medicamentos clínicos relacionados con el escarabajo de tierra.