Identifizierung des Laufkäfers sinensis und seine Aufbereitung durch charakteristische Ionen
Der Laufkäferwurm wurde zum ersten Mal in Shennongs Classic of Materia Medica erwähnt und als mittlerer Grad aufgeführt. Laufkäfer sinensis Walker oder Steleophaga plancyi (Boleny) ist der getrocknete weibliche Körper von Eupolyphaga sinensis Walker oder Steleophaga plancyi. Der Laufkäfer enthält hauptsächlich Aminosäuren, Proteine, flüchtige Ölverbindungen und andere Inhaltsstoffe wie Alkaloide, Fettsäuren, fibrinolytische Wirkstoffe und Spurenelemente. Der Laufkäfer hat die Wirkung, den Blutstau aufzulösen, feste Knoten, Abschwellungen und Schmerzen zu beseitigen, die Brust zu senken und die Kanäle zu öffnen usw. Er wird bei Prellungen und Verletzungen, Sehnenverletzungen und Brüchen, Blutstau und Amenorrhoe, Blutstau nach der Geburt und Unterleibsschmerzen, Zeichen und Schwellungen eingesetzt. Die moderne pharmakologische Forschung zeigt, dass der Laufkäfer gerinnungshemmende, antitumorale, blutfettregulierende, schmerzstillende, entzündungshemmende und bakterientötende Wirkungen hat und sogar als "das erste Medikament zur Regulierung des Blutflusses" bezeichnet wird. Er ist in der klinischen Praxis weit verbreitet (nach den Statistiken der Datenbank von Yaozhinet wurden 151 traditionelle chinesische Patentarzneimittel und einfache Präparate mit Käfermehl gesammelt), und auch die Dosierung ist hoch. Gegenwärtig werden zwei Arten von Laufkäfern auf dem Markt angeboten: wilde und künstlich gezüchtete. Da die Zahl der wilden Laufkäfer jedoch von Jahr zu Jahr abnimmt, machen künstlich gezüchtete Produkte einen großen Teil der klinischen Anwendung aus, und es kommt von Zeit zu Zeit zu künstlichen Verfälschungen und Verunreinigungen, die nur durch die Identifizierung ihrer Merkmale zu einer Fehleinschätzung führen können. Im Großen und Ganzen sind die in der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs für den Käfermehlwurm vorgesehenen Prüfpunkte relativ einfach, was die Echtheit und Qualität des Käfermehlwurms nicht umfassend und genau widerspiegeln kann.

Der Laufkäfer enthält hauptsächlich Aminosäuren, Proteine, flüchtige Ölverbindungen usw. In diesem Stadium konzentriert sich die qualitätsbezogene Forschung auch auf diese Bestandteile. In den letzten Jahren haben einige Wissenschaftler auch molekulare pharmakognosische Methoden angewandt, um die Authentizität von Laufkäfern zu untersuchen. So haben beispielsweise Chen et al. die Identifizierungsmethode von Eupolyphaga-Käfern und deren gefälschten Laufkäfern Phnom Penh durch Chromatographie und Molekularbiologie etabliert. Nach dem Vergleich der DNA-Barcodes mit der Datenbank kann die Sequenz der nächstgelegenen Art und ihr Vergleich angegeben werden, wodurch die Herkunft der Sorten eindeutig bestimmt werden kann; Lu et al. verwendeten die Polyacrylamid-Gelelektrophorese zur Identifizierung der Proteine von drei Arten von Laufkäfern sowie von solchen, die aus demselben und aus verschiedenen Orten stammen. Die Methode weist eine hohe Auflösung und gute Reproduzierbarkeit auf. Die Technologie der molekularen Pharmakognosie stellt jedoch hohe Anforderungen an das Labor und ist schwer zu fördern, da sie gewisse Einschränkungen mit sich bringt. Im Arzneibuch der Volksrepublik China (Ausgabe 2020) (im Folgenden als "Chinesisches Arzneibuch" bezeichnet) gibt es unter dem Punkt der Identifizierung von Arzneistoffen aus Laufkäfer sinensis nur die mikroskopische Identifizierung und die Dünnschichtidentifizierung, und diese Methode ist nur für die Identifizierung von Rohstoffen anwendbar. Für extrahierte Käfersinensis und formulierte Zubereitungen, die Käfersinensis enthalten, ist die Methode schlecht übertragbar und kann nicht wirksam unterschieden werden.
Als Biomarker mit Artenunterschied werden charakteristische Peptide in der tiermedizinischen Forschung immer ausgereifter. Einige Wissenschaftler haben die Erforschung von Schildkröte A, Antilopenhorn, Eselshautkleber, Hirschhorngummi, Tausendfüßler, Hirschhorn usw. mit Hilfe der charakteristischen Peptidtechnologie durchgeführt. Die Merkmale der guten Spezifität und der einfachen Bedienung erleichtern den Einsatz bei der täglichen Kontrolle. Die charakteristische Peptidtechnologie, die auf der Massenspektrometrie-Detektion basiert, kann gleichzeitig mehrere charakteristische Peptidionen als Detektionsindikatoren verwenden, was die Identifizierung der Echtheit und die genaue Bestimmung von verfälschten Bestandteilen sowie die relative Quantifizierung von verfälschten Bestandteilen ermöglichen dürfte. Die Anwendungsmöglichkeiten sind vielfältig und vielversprechend. Die Bestimmung von Ionenpaaren wurde in die Identifizierung von Eselshautleim, Geweihleim und Schildpattleim im chinesischen Arzneibuch (2020) aufgenommen. Die Aufnahme von charakteristischen Peptiden als Qualitätsindikatoren in das offizielle chinesische Gesetzbuch hat auch der Situation ein Ende gesetzt, dass Tierarzneimittel keine spezifischen Qualitätskontrollkomponenten in den gesetzlichen Normen haben. Für den Extrakt wird meist Wasser als Lösungsmittel verwendet. Nachdem die Tierarzneimittel, wie z. B. Käfermehl, ausgekocht wurden, wird das Kollagen unspezifisch abgebaut und bildet wasserlösliche Peptide. Einige Peptide können über den Biofilm in das Blut aufgenommen werden und dort eine Vielzahl biologischer Wirkungen entfalten. Es gibt jedoch keinen Bericht über die Identifizierung von Laufkäfer sinensis und seine Zubereitung durch charakteristische Ionen im In- und Ausland. In dieser Studie wurde die oben beschriebene Technologie zur Identifizierung von charakteristischen Ionen als Referenz verwendet, um die Echtheit von Laufkäfern zu bestimmen und eine Referenz für die Qualitätsforschung von Laufkäfern und ihren Zubereitungen zu liefern.

Laufkäfer sinensis hat sich bei der Behandlung verschiedener Krankheiten als wirksam erwiesen, z. B. bei Krebs, bei der Hemmung von Thrombosen, bei der Stärkung des Immunsystems und bei der Behandlung von avaskulären Nekrosen des Oberschenkelkopfes. Kürzlich wurde berichtet, dass Laufkäfer, Blutegel und Tausendfüßler eine offensichtliche klinische Wirksamkeit bei Endometritis zeigten. Es ist jedoch schwierig, Laufkäfer und Rezepte, die Laufkäfer enthalten, korrekt zu identifizieren. Gegenwärtig konzentriert sich die Qualitätsprüfung von Tierarzneimitteln hauptsächlich auf Methoden wie Morphologie, Mikroskopie und Dünnschichttests. Außerdem enthalten die meisten Tierarzneimittel ähnliche Zusammensetzungen von Aminosäuren und Nukleosiden, was ebenfalls zu Unklarheiten bei der Identifizierung und Qualitätsanalyse von Tierarzneimittelsorten führt. Daher ist es von entscheidender Bedeutung, eine Reihe von exklusiven Analysemethoden zur Identifizierung und Bewertung von Tierarzneimitteln für die Qualitätskontrolle und -bewertung von Tierarzneimitteln zu entwickeln und zu etablieren. In den letzten Jahren hat sich das Modell der Qualitätskontrolle traditioneller chinesischer Tierarzneimittel, das auf der qualitativen/quantitativen Analyse charakteristischer Peptide beruht, allmählich durchgesetzt und findet Anwendung. Das Chinesische Arzneibuch 2020 enthält die exklusiven Peptid-Identifizierungsmethoden von Eselshautleim, Hirschhorngummi und Schildpattgummi, aber es gibt keine Identifizierungsmethode für charakteristische Ionen in Laufkäfern.
Die in dieser Studie ermittelten charakteristischen Ionen wurden mit Hilfe der Proteinverdauungstechnologie unter Verwendung von 1%-Ammoniumbicarbonatlösung als Extraktionslösungsmittel und Trypsin für die enzymatische Hydrolyse der Probe nachgewiesen. Außerdem wurden die Extraktionsmethode, die Enzymdosierung und die Extraktionszeit der Proben untersucht, und die optimalen Extraktionsbedingungen wurden als Erhitzung unter Rückfluss (Extraktionsmethode), 50 μ L (Enzymdosierung) und 30 Minuten (Extraktionszeit) bestimmt.

Da die in der Pharmakopöe der Volksrepublik China festgelegte Methode zur Qualitätskontrolle des Käferwurms relativ einfach ist, ist es nicht ungewöhnlich, dass auf dem Käferwurmmarkt gefälschte Produkte hergestellt und verkauft werden und die minderwertigen Produkte als die besseren ausgegeben werden. Gegenwärtig steigt der Preis des Käferwurms auf dem Markt weiter an. Aus wirtschaftlichen Gründen haben die Gesetzesbrecher der Käfermehl-Medizin Alaun, Salz und andere Zutaten zugesetzt, um den Gewinn zu steigern, und sogar gefälschte Produkte verwendet, um die echten zu ersetzen. Darüber hinaus wurde der Phnom-Penh-Mahlkäfer auch in den Standard der traditionellen chinesischen Medizin in der Provinz Guangdong aufgenommen und wird seit langem als lokales Haushaltsprodukt verwendet. Untersuchungen haben jedoch gezeigt, dass sich die Zusammensetzung des Phnom Penh Laufkäfers von der von Eupolyphaga und Eupolyphaga unterscheidet; gleichzeitig hat die Standardabkochung verschiedener Tierarzneimittel die Form der Abkochungsstücke verloren und ist schwer zu identifizieren. Daher wurde in dieser Studie eine Technologie zur Identifizierung charakteristischer Ionen auf der Grundlage der Massenspektrometrie entwickelt. Es wurde festgestellt, dass m/z 415.72 (Doppelladung) → 406.72, 415.72 (Doppelladung) → 667.34 als charakteristisches Ion für die Identifizierung von Laufkäfer sinensis verwendet werden kann. Durch die Anwendung und den Nachweis von 24 Chargen von Käfermehlwurm-Arzneimitteln aus verschiedenen Quellen, 21 Chargen von Käfermehlwurmextrakten, 6 Chargen von Käfermehlwurm-Zubereitungen, 6 verschiedenen Tierarzneimitteln und 3 Arten von Käfermehlwurm-Verfälschungen kann die Nachweismethode auf 2 verschiedene primitive Käfermehlwurm-Arzneimittel angewendet werden, was die Spezifität des charakteristischen Ions bestätigt, auch wenn es eine klare Unterscheidung zwischen den Zwischenprodukten und Zubereitungen mit Käfermehlwurm enthält, die die Eigenschaften der ursprünglichen Arzneimittel verloren haben.
Gleichzeitig ist diese Methode einfach zu handhaben, in hohem Maße reproduzierbar und erfordert keine komplexe Vorverarbeitung, was die Implementierungsschwelle für diese Methode erheblich senkt. Obwohl eine große Anzahl von Studien gezeigt hat, dass die Methode zur Identifizierung traditioneller chinesischer Medizin auf Tierbasis mit Hilfe charakteristischer Peptide vernünftig und durchführbar ist, müssen die entsprechenden Qualitätsbewertungsmethoden noch weiter angereichert und verbessert werden, was auch eine wichtige Richtung für die zukünftige Forschung zur Qualitätskontrolle traditioneller chinesischer Medizin ist. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die in dieser Studie entwickelte Methode die Defizite in den Kontrollstandards für Laufkäfer und seine Abkochungen wirksam ergänzen wird, das Problem lösen wird, dass die Echtheit von Laufkäfer lange Zeit nur durch traditionelle Erfahrung identifiziert werden konnte, das Niveau der Qualitätskontrolle verbessern wird und eine Referenz für die Sicherheit und Wirksamkeit von klinischen Arzneimitteln im Zusammenhang mit Laufkäfer darstellen wird.