Identification de peptides caractéristiques de différentes sangsues primitives
L'édition 2020 de la pharmacopée de la République populaire de Chine (ci-après dénommée "la pharmacopée") stipule que la sangsue de la médecine traditionnelle chinoise est un animal séché de la famille des sangsues, la sangsue Whitman pigra Whitman, la sangsue Hirudo nipponica Whitman, ou la sangsue de la feuille de saule Whitman acranulata Whitman. Son goût est salé, amer et doux. Il y a une petite toxine qui appartient au méridien du foie. Elle a pour fonction de briser le sang et de favoriser la circulation, de supprimer la stase sanguine et d'éliminer la stagnation. Il est couramment utilisé en cas de stase sanguine et d'obstruction du méridien, pour traiter les masses, l'hémiplégie consécutive à un accident vasculaire cérébral, les chutes et les blessures. Ces dernières années, le nombre de patients souffrant de maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires a considérablement augmenté, ce qui a entraîné une hausse de la demande de produits médicinaux à base de sangsues. Cependant, il existe sur le marché de nombreux produits médicinaux complexes et de qualité variable à base de sangsues. En plus des sangsues, il existe un produit de contrefaçon appelé Poecilobdra manillensis Lesson sur le marché. Actuellement, les sangsues et les sangsues sont toutes deux des produits séchés présentant des différences significatives en termes d'apparence et de caractéristiques, ce qui les rend faciles à distinguer. Par conséquent, cette étude se concentre uniquement sur l'étude des différentes origines des sangsues. L'analyse de la littérature a permis de constater que les recherches actuelles sur les sangsues se concentrent sur les mécanismes anticoagulants et la détermination des acides aminés, alors qu'il existe relativement peu d'études approfondies sur la qualité des différentes sangsues primitives et de leurs mélanges. Les études d'identification entre les différentes sangsues primitives sont principalement basées sur l'identification des caractéristiques conformément à l'édition 2020 de la pharmacopée chinoise. Certaines études ont révélé, grâce à l'identification moléculaire de l'ADN et aux techniques d'analyse des protéines, que la technologie d'identification moléculaire de l'ADN de la sangsue peut être établie par PCR et que les protéines des différentes sangsues primitives peuvent être distinguées à l'aide de SDS-PAGE et de 2-DE. En outre, certaines études permettent également de les distinguer sur la base de méthodes de spectre caractéristique HPLC ou de méthodes de séquençage à haut débit, mais ces méthodes présentent des problèmes tels que le temps de détection long et la faible popularité des instruments de détection. Cette étude a utilisé la méthode LC-MS pour détecter les peptides I et II de la sangsue. La méthode établie présente une forte spécificité, une sensibilité élevée et un temps d'analyse court. Elle peut être utilisée pour distinguer les sangsues d'origines différentes, améliorer leur niveau de contrôle de qualité et fournir des références pour la sécurité et l'efficacité de l'utilisation clinique de médicaments apparentés.

L'identification des matières médicinales animales a toujours été une question clé et difficile dans la recherche sur la médecine traditionnelle chinoise. Toutefois, les méthodes d'identification actuelles reposent principalement sur des méthodes d'identification traditionnelles, qui sont très subjectives et nécessitent des connaissances et une expérience professionnelles approfondies de la part de l'auteur de l'identification. Il n'existe pas de méthodes d'identification scientifiques, efficaces et précises basées sur des méthodes de détection modernes. La sangsue est un précieux remède traditionnel chinois à forte valeur médicinale et de recherche. La valeur médicinale des sangsues a également été reconnue dans le monde entier, et les sangsues ont été utilisées pour traiter des maladies en Europe, en Égypte et en Inde. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise indique que les sangsues contiennent trois éléments de base, mais actuellement la pharmacopée chinoise ne les contrôle que par des tests tels que l'humidité, la teneur totale en cendres, l'acidité et l'alcalinité, et l'activité antithrombine. Il n'existe actuellement aucune trace de caractérisation différentielle entre les différents éléments de base, ce qui manque de fondement scientifique et ne permet pas d'identifier la décoction ou la formulation des matières médicinales après ébullition.
Cette étude a testé 22 lots de sangsues d'origines différentes, dont 15 lots de sangsues, 2 lots de sangsues à feuilles de saule et 5 lots de sangsues. Les résultats ont montré que les 15 lots de sangsues pouvaient détecter les pics chromatographiques des peptides I et II de la sangsue, que 2 lots de sangsues à feuilles de saule ne pouvaient détecter que le peptide II de la sangsue et que 5 lots de sangsues ne pouvaient détecter que le peptide I de la sangsue. L'analyse PLS-DA montre que les sangsues de différentes origines peuvent être clairement divisées en trois catégories et que les résultats de l'analyse sont cohérents avec les résultats de l'identification des origines. Selon d'autres documents, l'activité du polypeptide hirudo est principalement une activité anticoagulante, et implique également une inhibition de la protéase, une activité anti-inflammatoire, une hydrolase, une inhibition de la migration des macrophages dans l'athérosclérose et d'autres activités pharmacologiques. Cela indique qu'en plus des acides aminés et des nucléosides, le polypeptide hirudo est également l'un des principaux composants de son effet pharmacologique. Toutefois, les documents susmentionnés se concentrent sur l'étude pharmacologique du polypeptide et aucune méthode de détection du polypeptide n'a été établie. Cet article utilise la méthode LC-MS pour déterminer le polypeptide hirudo en référence aux méthodes d'extraction et d'inspection d'autres variétés de polypeptide, fournissant ainsi un moyen scientifique et technique de contrôle de la qualité, qui peut refléter la qualité de son effet pharmacologique en mesurant la zone de pic du polypeptide hirudo ; En outre, dans le cadre de la détermination du contenu des sangsues dans la pharmacopée chinoise, il est stipulé que "l'activité antithrombine des sangsues ne doit pas être inférieure à 16.0U par 1g ; les sangsues et les sangsues à feuilles de saule ne doivent pas être inférieures à 3,0U". Cela montre que les sangsues présentent des différences significatives en termes d'activité antithrombine par rapport aux sangsues et aux feuilles de saule, c'est-à-dire que les sangsues d'origines différentes présentent des différences de qualité significatives. Par conséquent, l'utilisation de cette méthode pour distinguer rapidement et précisément les matières médicinales à base de sangsues de différentes origines et leurs décoctions d'eau, préparations de formules, etc. qui ont perdu leurs caractéristiques de base est d'une grande importance pour l'amélioration de la qualité des sangsues et des produits connexes.
La méthode établie par cet institut de recherche présente les caractéristiques suivantes : rapidité, efficacité et reproductibilité, ce qui permet d'améliorer le niveau de contrôle de la qualité et de fournir des références pour la sécurité et l'efficacité de l'utilisation clinique des médicaments à base de sangsues. Elle résout efficacement le problème des sangsues dont les méthodes d'identification traditionnelles ne permettent pas de distinguer les différentes origines depuis longtemps.