Farklı ilkel sülüklerden karakteristik peptitlerin tanımlanması
Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'nin (bundan böyle "Farmakope" olarak anılacaktır) 2020 baskısı, geleneksel Çin tıbbı sülüğünün, sülük ailesi hayvanı olan sülük Whitman pigra Whitman, sülük Hirudo nipponica Whitman veya söğüt yaprağı sülüğü Whitman acranulata Whitman'ın kurutulmuş bir bütünü olduğunu belirtmektedir. Tadı tuzlu, acı ve hafiftir; karaciğer meridyenine ait küçük bir toksin vardır. Kanı kırma ve dolaşımı teşvik etme, kan stazını giderme ve durgunluğu ortadan kaldırma işlevine sahiptir. Genellikle kan stazı ve meridyen tıkanıklığı, kitlelerin tedavisi, inme hemiplejisi ve düşme ve yaralanmalar için kullanılır. Son yıllarda, kardiyovasküler ve serebrovasküler hastalıkları olan hastaların sayısı önemli ölçüde artmış, bu da sülük tıbbi malzemelerine olan talebin artmasına neden olmuştur. Bununla birlikte, piyasada çok sayıda karmaşık ve farklı kalitede sülük tıbbi malzemesi bulunmaktadır. Sülüklerin yanı sıra piyasada Poecilobdra manillensis Lesson adında sahte bir ürün de bulunmaktadır. Şu anda, sülükler ve sülüklerin her ikisi de görünüş ve özellik bakımından önemli farklılıklara sahip kurutulmuş ürünlerdir ve ayırt edilmelerini kolaylaştırır. Bu nedenle, bu çalışma sadece sülüklerin farklı kökenlerini incelemeye odaklanmaktadır. Literatür taraması sonucunda, sülükler üzerine yapılan mevcut araştırmaların antikoagülan mekanizmalar ve amino asit tayini üzerine odaklandığı, farklı ilkel sülüklerin ve bunların karışımlarının kalitesi üzerine nispeten az kapsamlı çalışma olduğu görülmüştür. Farklı ilkel sülükler arasındaki tanımlama çalışmaları çoğunlukla Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı kapsamında özellik tanımlamasına dayanmaktadır. Bazı çalışmalar, DNA moleküler tanımlama ve protein analiz teknikleri aracılığıyla, sülük DNA moleküler tanımlama teknolojisinin PCR yoluyla kurulabileceğini ve farklı ilkel sülüklerin proteinlerinin SDS-PAGE ve 2-DE kullanılarak ayırt edilebileceğini bulmuştur. Ayrıca, HPLC karakteristik spektrum yöntemlerine veya yüksek verimli dizileme yöntemlerine dayanarak da ayırt edebilen çalışmalar vardır, ancak bu tür yöntemlerin uzun tespit süresi ve tespit cihazlarının popülerliğinin düşük olması gibi sorunları vardır. Bu çalışmada sülük peptidi I ve sülük peptidi II'yi tespit etmek için LC-MS yöntemi kullanılmıştır. Oluşturulan yöntem güçlü özgüllüğe, yüksek duyarlılığa, kısa analiz süresine sahiptir ve farklı kökenlere sahip sülükleri ayırt etmek, kalite kontrol seviyelerini iyileştirmek ve ilgili ilaçların klinik kullanımının güvenliği ve etkinliği için referans sağlamak için kullanılabilir.

Hayvansal tıbbi malzemelerin tanımlanması, geleneksel Çin tıbbı araştırmalarında her zaman önemli ve zor bir konu olmuştur. Bununla birlikte, mevcut tanımlama yöntemleri esas olarak güçlü öznelliğe sahip olan ve ayırt ediciden güçlü mesleki bilgi ve deneyim gerektiren geleneksel tanımlama yöntemlerine dayanmaktadır. Modern tespit yöntemlerine dayalı bilimsel, etkili ve doğru tanımlama yöntemlerinin eksikliği söz konusudur. Sülük, güçlü tıbbi ve araştırma değeri olan değerli bir geleneksel Çin ilacıdır. Sülüklerin tıbbi değeri dünya çapında da kabul görmüştür ve sülükler Avrupa, Mısır ve Hindistan'da hastalıkları tedavi etmek için kullanılmıştır. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, sülüklerin üç temel element içerdiğini kaydetmektedir, ancak şu anda Çin Farmakopesi bunları yalnızca nem, toplam kül içeriği, asitlik ve alkalilik ve antitrombin aktivitesi gibi testlerle kontrol etmektedir. Halihazırda, bilimsel temelden yoksun olan ve kaynatıldıktan sonra tıbbi malzemelerin kaynatma veya formülasyonunu tanımlayamayan farklı temel unsurlar arasında farklı karakterizasyon kaydı yoktur.
Bu çalışmada 15 parti sülük, 2 parti söğüt yaprağı sülüğü ve 5 parti sülük olmak üzere farklı kökenlere sahip 22 parti sülük test edilmiştir. Sonuçlar, 15 parti sülüğün tamamının sülük peptidi I ve sülük peptidi II kromatografik piklerini tespit edebildiğini, 2 parti söğüt yaprağı sülüğünün sadece sülük peptidi II'yi tespit edebildiğini ve 5 parti sülüğün sadece sülük peptidi I'i tespit edebildiğini göstermiştir. İnceleme sonuçlarından, farklı kökenlere sahip sülüklerin sülük peptidi I ve sülük peptidi II ölçülerek ayırt edilebileceği görülebilir. PLS-DA analizi sayesinde, farklı kökenlere sahip sülüklerin net bir şekilde üç kategoriye ayrılabildiği ve analiz sonuçlarının kökenlerin tanımlama sonuçlarıyla tutarlı olduğu görülebilir. Diğer belgelere göre, hirudo polipeptidinin aktivitesi esas olarak antikoagülan aktivitedir ve ayrıca proteaz inhibisyonu, anti-enflamatuar, hidrolaz, aterosklerozda makrofaj göçünün inhibisyonu ve diğer farmakolojik aktiviteleri içerir. Bu, amino asitler ve nükleozitlere ek olarak, hirudo polipeptidin de farmakolojik etkisinin ana bileşenlerinden biri olduğunu göstermektedir. Bununla birlikte, yukarıdaki belgeler polipeptidin farmakolojik çalışmasına odaklanmıştır ve polipeptid için herhangi bir tespit yöntemi oluşturulmamıştır. Bu makale, diğer polipeptit çeşitlerinin ekstraksiyon ve inceleme yöntemlerine atıfta bulunarak hirudo polipeptidi belirlemek için LC-MS yöntemini kullanmakta ve hirudo polipeptidin pik alanını ölçerek farmakolojik etkisinin kalitesini yansıtabilen kalite kontrol için bilimsel ve teknik bir araç sağlamaktadır; Ayrıca, Çin Farmakopesi'nde sülüklerin içerik belirleme maddesi altında, "sülüklerin anti trombin aktivitesi 16'dan az olmamalıdır.1g başına 0U; sülükler ve söğüt yaprağı sülükleri 3.0U'dan az olmamalıdır". Bu, sülüklerin anti trombin aktivitesinde sülük ve söğüt yaprağı sülüklerine kıyasla önemli farklılıklar olduğunu, yani farklı kökenlere sahip sülüklerin önemli kalite farklılıklarına sahip olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, farklı kökenlere sahip sülük tıbbi malzemelerini ve bunların temel özelliklerini kaybetmiş su kaynatmalarını, formül preparatlarını vb. hızlı ve doğru bir şekilde ayırt etmek için bu yöntemi kullanmak, sülüklerin ve ilgili ürünlerin kalitesini artırmak için büyük önem taşımaktadır.
Bu araştırma enstitüsü tarafından oluşturulan yöntem, kalite kontrol seviyesini artırabilecek ve sülükle ilgili ilaçların klinik kullanımının güvenliği ve etkinliği için referans sağlayabilecek hız, etkinlik ve tekrarlanabilirlik özelliklerine sahiptir. Uzun süredir sadece geleneksel tanımlama yöntemleriyle farklı kökenleri ayırt edilebilen sülük sorununu etkili bir şekilde çözmektedir.