Identifizierung charakteristischer Peptide aus verschiedenen primitiven Blutegeln
In der Ausgabe 2020 des Arzneibuchs der Volksrepublik China (im Folgenden als "Arzneibuch" bezeichnet) heißt es, dass der Blutegel der traditionellen chinesischen Medizin ein getrocknetes Ganzes aus der Familie der Blutegel ist, der Blutegel Whitman pigra Whitman, der Blutegel Hirudo nipponica Whitman oder der Weidenblatt-Blutegel Whitman acranulata Whitman. Sein Geschmack ist salzig, bitter und mild; es gibt ein kleines Gift, das zum Lebermeridian gehört. Er hat die Funktion, das Blut zu brechen und die Zirkulation zu fördern, Blutstau zu beseitigen und Stagnation zu beseitigen. Es wird häufig bei Blutstau und Meridianverstopfung, zur Behandlung von Massen, Schlaganfall, Halbseitenlähmung, Stürzen und Verletzungen eingesetzt. In den letzten Jahren ist die Zahl der Patienten mit kardiovaskulären und zerebrovaskulären Erkrankungen erheblich gestiegen, was zu einer wachsenden Nachfrage nach Blutegel-Heilmitteln geführt hat. Auf dem Markt gibt es jedoch viele komplexe und qualitativ unterschiedliche Blutegelarzneimittel. Neben Blutegeln ist auch ein gefälschtes Produkt namens Poecilobdra manillensis Lesson auf dem Markt. Derzeit sind Egel und Blutegel beides getrocknete Waren, die sich in ihrem Aussehen und ihren Eigenschaften deutlich unterscheiden, so dass sie leicht zu unterscheiden sind. Daher konzentriert sich diese Studie nur auf die Untersuchung der verschiedenen Ursprünge von Blutegeln. Die Literaturrecherche hat ergeben, dass sich die derzeitige Forschung über Blutegel auf gerinnungshemmende Mechanismen und die Bestimmung von Aminosäuren konzentriert, während es relativ wenig umfassende Studien über die Qualität verschiedener primitiver Blutegel und ihrer Mischungen gibt. Studien zur Identifizierung verschiedener primitiver Blutegel basieren meist auf der Identifizierung von Merkmalen gemäß der Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs. Einige Studien haben durch molekulare DNA-Identifizierung und Proteinanalysetechniken herausgefunden, dass die molekulare DNA-Identifizierung von Blutegeln durch PCR etabliert werden kann und Proteine verschiedener primitiver Blutegel durch SDS-PAGE und 2-DE unterschieden werden können. Darüber hinaus gibt es Studien, die sie auch auf der Grundlage von HPLC-Methoden mit charakteristischem Spektrum oder Hochdurchsatz-Sequenzierungsmethoden unterscheiden können, aber solche Methoden haben Probleme wie lange Nachweiszeiten und geringe Popularität von Nachweisgeräten. In dieser Studie wurde die LC-MS-Methode zum Nachweis von Blutegelpeptid I und Blutegelpeptid II verwendet. Die etablierte Methode zeichnet sich durch hohe Spezifität, hohe Empfindlichkeit und kurze Analysezeit aus und kann zur Unterscheidung von Blutegeln unterschiedlicher Herkunft, zur Verbesserung der Qualitätskontrolle und als Referenz für die Sicherheit und Wirksamkeit der klinischen Anwendung verwandter Arzneimittel verwendet werden.

Die Identifizierung von Tierarzneimitteln war schon immer ein wichtiges und schwieriges Thema in der Forschung zur traditionellen chinesischen Medizin. Die derzeitigen Identifizierungsmethoden stützen sich jedoch hauptsächlich auf traditionelle Identifizierungsmethoden, die sehr subjektiv sind und ein hohes Maß an Fachwissen und Erfahrung des Unterscheiders erfordern. Es mangelt an wissenschaftlichen, wirksamen und genauen Identifizierungsmethoden, die auf modernen Nachweismethoden basieren. Blutegel sind ein wertvolles traditionelles chinesisches Arzneimittel mit großem medizinischen und Forschungswert. Der medizinische Wert von Blutegeln ist auch weltweit anerkannt, und Blutegel wurden zur Behandlung von Krankheiten in Europa, Ägypten und Indien eingesetzt. In der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs wird festgehalten, dass Blutegel drei Grundelemente enthalten, aber derzeit werden sie im Chinesischen Arzneibuch nur durch Tests wie Feuchtigkeit, Gesamtaschegehalt, Säuregehalt und Alkalinität sowie Antithrombinaktivität kontrolliert. Es gibt derzeit keine Aufzeichnungen über eine differenzierte Charakterisierung zwischen den verschiedenen Grundelementen, die keine wissenschaftliche Grundlage haben und nicht in der Lage sind, die Abkochung oder die Formulierung der medizinischen Materialien nach dem Kochen zu identifizieren.
In dieser Studie wurden 22 Chargen von Blutegeln unterschiedlicher Herkunft getestet, darunter 15 Chargen von Blutegeln, 2 Chargen von Weidenblattegeln und 5 Chargen von Blutegeln. Die Ergebnisse zeigten, dass alle 15 Chargen von Blutegeln die chromatographischen Peaks von Blutegelpeptid I und Blutegelpeptid II nachweisen konnten, 2 Chargen von Weidenblattegeln nur Blutegelpeptid II und 5 Chargen von Blutegeln nur Blutegelpeptid I. Aus den Untersuchungsergebnissen geht hervor, dass Blutegel unterschiedlicher Herkunft durch Messung von Blutegelpeptid I und Blutegelpeptid II unterschieden werden können. Die PLS-DA-Analyse zeigt, dass Blutegel unterschiedlicher Herkunft eindeutig in drei Kategorien eingeteilt werden können, und die Analyseergebnisse stimmen mit den Ergebnissen der Herkunftsbestimmung überein. Anderen Dokumenten zufolge ist die Aktivität des Hirudo-Polypeptids hauptsächlich gerinnungshemmend und beinhaltet auch Proteasehemmung, Entzündungshemmung, Hydrolase, Hemmung der Makrophagenmigration bei Atherosklerose und andere pharmakologische Aktivitäten. Dies deutet darauf hin, dass das Hirudo-Polypeptid neben den Aminosäuren und Nukleosiden eine der Hauptkomponenten seiner pharmakologischen Wirkung ist. Die oben genannten Dokumente konzentrieren sich jedoch auf die pharmakologische Untersuchung des Polypeptids, und es wurde keine Nachweismethode für das Polypeptid entwickelt. Dieses Papier verwendet LC-MS-Methode, um Hirudo Polypeptid mit Bezug auf die Extraktion und Inspektion Methoden der anderen Sorten von Polypeptid zu bestimmen, die Bereitstellung einer wissenschaftlichen und technischen Mittel für die Qualitätskontrolle, die die Qualität der pharmakologischen Wirkung durch die Messung der Peak-Fläche von Hirudo Polypeptid widerspiegeln kann; Darüber hinaus unter dem Inhalt Bestimmung Element von Blutegeln in der chinesischen Pharmakopöe, ist es festgelegt, dass "die Anti-Thrombin-Aktivität von Blutegeln sollte nicht weniger als 16.0U pro 1g; Blutegel und Weidenblattegel sollten nicht weniger als 3.0U haben". Dies zeigt, dass Blutegel im Vergleich zu Blutegeln und Weidenblattegeln signifikante Unterschiede in der Anti-Thrombin-Aktivität aufweisen, d.h. Blutegel unterschiedlicher Herkunft haben signifikante Qualitätsunterschiede. Daher ist die Anwendung dieser Methode zur schnellen und genauen Unterscheidung von Blutegelarzneimitteln unterschiedlicher Herkunft und deren Wasserabkochungen, Rezepturzubereitungen usw., die ihre grundlegenden Eigenschaften verloren haben, von großer Bedeutung für die Verbesserung der Qualität von Blutegeln und verwandten Produkten.
Die von diesem Forschungsinstitut entwickelte Methode zeichnet sich durch Schnelligkeit, Effektivität und Reproduzierbarkeit aus. Sie kann das Niveau der Qualitätskontrolle verbessern und als Referenz für die Sicherheit und Wirksamkeit der klinischen Anwendung von Blutegel-Medikamenten dienen. Sie löst effektiv das Problem der Blutegel, die lange Zeit nur durch herkömmliche Identifizierungsmethoden unterschieden werden konnten.