Identificación de péptidos característicos de diferentes sanguijuelas primitivas
La edición de 2020 de la Farmacopea de la República Popular China (en lo sucesivo, la "Farmacopea") estipula que la sanguijuela de la medicina tradicional china es un animal entero desecado de la familia de las sanguijuelas, la sanguijuela Whitman pigra Whitman, la sanguijuela Hirudo nipponica Whitman o la sanguijuela de hoja de sauce Whitman acranulata Whitman. Su sabor es salado, amargo y suave; tiene una pequeña toxina, que pertenece al meridiano del hígado. Tiene la función de romper la sangre y promover la circulación, eliminar la estasis sanguínea y eliminar el estancamiento. Se utiliza comúnmente para la estasis sanguínea y la obstrucción de meridianos, el tratamiento de masas, la hemiplejia por apoplejía y las caídas y lesiones. En los últimos años, el número de pacientes con enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares ha aumentado significativamente, lo que ha provocado un incremento de la demanda de materiales medicinales a base de sanguijuelas. Sin embargo, existen en el mercado muchos medicamentos de sanguijuela complejos y de calidad variable. Además de las sanguijuelas, existe en el mercado un producto falsificado llamado Poecilobdra manillensis Lesson. En la actualidad, tanto las sanguijuelas como las sanguijuelas son productos desecados con diferencias significativas en su aspecto y características, lo que hace que sean fáciles de distinguir. Por lo tanto, este estudio sólo se centra en estudiar los diferentes orígenes de las sanguijuelas. A través de la revisión de la literatura, se ha descubierto que la investigación actual sobre las sanguijuelas se centra en los mecanismos anticoagulantes y la determinación de aminoácidos, mientras que hay relativamente pocos estudios exhaustivos sobre la calidad de las diferentes sanguijuelas primitivas y sus mezclas. Los estudios de identificación entre diferentes sanguijuelas primitivas se basan principalmente en la identificación de rasgos según la edición 2020 de la Farmacopea China. Algunos estudios han encontrado a través de técnicas de identificación molecular de ADN y análisis de proteínas que la tecnología de identificación molecular de ADN de sanguijuela puede establecerse a través de PCR, y las proteínas de diferentes sanguijuelas primitivas pueden distinguirse usando SDS-PAGE y 2-DE. Además, hay estudios que también pueden distinguirlas basándose en métodos de espectro característico HPLC o métodos de secuenciación de alto rendimiento, pero dichos métodos tienen problemas como el largo tiempo de detección y la escasa popularidad de los instrumentos de detección. En este estudio se utilizó el método LC-MS para detectar el péptido I de sanguijuela y el péptido II de sanguijuela. El método establecido tiene una fuerte especificidad, alta sensibilidad, corto tiempo de análisis, y puede ser utilizado para distinguir sanguijuelas con diferentes orígenes, mejorar su nivel de control de calidad, y proporcionar referencia para la seguridad y eficacia del uso clínico de medicamentos relacionados.

La identificación de materiales medicinales de origen animal siempre ha sido una cuestión clave y difícil en la investigación de la medicina tradicional china. Sin embargo, los métodos de identificación actuales se basan principalmente en métodos de identificación tradicionales, que tienen una fuerte subjetividad y requieren un gran conocimiento profesional y experiencia por parte del discriminador. Faltan métodos de identificación científicos, eficaces y precisos basados en métodos de detección modernos. La sanguijuela es una preciada medicina tradicional china con un fuerte valor medicinal y de investigación. El valor medicinal de las sanguijuelas también ha sido reconocido en todo el mundo, y se han utilizado sanguijuelas para tratar enfermedades en Europa, Egipto y la India. La edición de 2020 de la Farmacopea China registra que las sanguijuelas contienen tres elementos básicos, pero actualmente la Farmacopea China sólo los controla mediante pruebas como la humedad, el contenido total de cenizas, la acidez y la alcalinidad, y la actividad antitrombina. Actualmente no existe ningún registro de caracterización diferencial entre los distintos elementos básicos, lo que carece de base científica y no permite identificar la decocción o la formulación de los materiales medicinales tras la ebullición.
Este estudio probó 22 lotes de sanguijuelas de diferentes orígenes, incluyendo 15 lotes de sanguijuelas, 2 lotes de sanguijuelas de hoja de sauce y 5 lotes de sanguijuelas. Los resultados mostraron que los 15 lotes de sanguijuelas podían detectar los picos cromatográficos del péptido I y II de la sanguijuela, 2 lotes de sanguijuelas de hoja de sauce sólo podían detectar el péptido II de la sanguijuela, y 5 lotes de sanguijuelas sólo podían detectar el péptido I de la sanguijuela. Mediante el análisis PLS-DA, se puede ver que las sanguijuelas con diferentes orígenes se pueden dividir claramente en tres categorías, y los resultados del análisis son coherentes con los resultados de identificación de los orígenes. Según otros documentos, la actividad del polipéptido hirudo es principalmente actividad anticoagulante, y también implica inhibición de proteasas, antiinflamatoria, hidrolasa, inhibición de la migración de macrófagos en la aterosclerosis y otras actividades farmacológicas. Esto indica que, además de los aminoácidos y nucleósidos, el polipéptido hirudo es también uno de los principales componentes de su efecto farmacológico. Sin embargo, los documentos anteriores se centran en el estudio farmacológico del polipéptido, y no se ha establecido ningún método de detección para el polipéptido. Este documento utiliza el método LC-MS para determinar el polipéptido hirudo con referencia a los métodos de extracción e inspección de otras variedades de polipéptido, proporcionando un medio científico y técnico para el control de calidad, que puede reflejar la calidad de su efecto farmacológico mediante la medición del área del pico del polipéptido hirudo; Además, bajo el punto de determinación del contenido de las sanguijuelas en la Farmacopea China, se estipula que "la actividad antitrombina de las sanguijuelas no debe ser inferior a 16 .0U por 1g; las sanguijuelas y las sanguijuelas de hoja de sauce no deben ser inferiores a 3,0U". Esto demuestra que las sanguijuelas tienen diferencias significativas en la actividad antitrombina en comparación con las sanguijuelas y las sanguijuelas de hoja de sauce, es decir, que las sanguijuelas de distintos orígenes tienen diferencias de calidad significativas. Por lo tanto, el uso de este método para distinguir de forma rápida y precisa los materiales medicinales de sanguijuelas con diferentes orígenes y sus decocciones de agua, preparaciones de fórmulas, etc. que han perdido sus características básicas es de gran importancia para mejorar la calidad de las sanguijuelas y los productos relacionados.
El método establecido por este instituto de investigación tiene las características de rapidez, eficacia y reproducibilidad, lo que puede mejorar su nivel de control de calidad y proporcionar referencias para la seguridad y eficacia del uso clínico de medicamentos relacionados con las sanguijuelas. Resuelve eficazmente el problema de la sanguijuela que sólo puede distinguir diferentes orígenes a través de los métodos tradicionales de identificación durante mucho tiempo.