Parmak izi spektrumları ve kimyasal stokiyometriye dayalı olarak farklı bölgelerden nar yapraklarının kalitesinin değerlendirilmesi
Nar yaprakları, Rosaceae familyasından Psidium guajava Linn. bitkisinin kurutulmuş yapraklarıdır ve çoğunlukla Guangdong, Guangxi, Sichuan, Yunnan, Fujian ve Tayvan'da dağıtılır. Nemi kurutma ve dalağı güçlendirme, ısıyı temizleme ve detoksifiye etme, bağırsakları sıkılaştırma ve ishali durdurma, anti-enflamatuar ve hemostatik etkilere sahiptir. Modern araştırmalar nar yapraklarındaki ana aktif bileşenlerin flavonoidler (guaiacol, isoquercitrin, hyperoside, naringin, naringin, naringenin, quercetin) ve hipoglisemik, antioksidan ve antibakteriyel etkileri olan triterpenoidler olduğunu göstermiştir.
Şu anda, nar yaprakları Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısına dahil edilmemiştir, ancak Guangxi Çin Bitkisel İlaç Standartları (1990 baskısı), Guangdong Eyaleti Çin Bitkisel İlaç Standartları Cilt 1 (2004 baskısı), Hunan Eyaleti Çin Bitkisel İlaç Standartları'na (2009 baskısı) dahil edilmiştir, Hunan Eyaleti Çin Bitkisel İlaç İşleme Standartları (2010 baskısı), Guangxi Zhuang İlaç Kalite Standartları (Cilt 2, 2011 baskısı), Fujian Eyaleti Çin Bitkisel İlaç İşleme Standartları (2012 baskısı) ve Sichuan Eyaleti Çin Bitkisel İlaç İşleme Standartları (2015 baskısı) yerel standart tıbbi malzemelerdir. Yukarıdaki standartlar nar yapraklarındaki kuersetini ince tabaka kromatografisi yoluyla yalnızca niteliksel olarak tanımlamıştır. Nar yaprağı tıbbi malzemelerinin kalitesine ilişkin araştırma ve analiz yöntemleri esas olarak ana bileşenlerin içeriğine ve tıbbi malzemelerin kalitesini kapsamlı bir şekilde yansıtması zor olan çok bileşenli miktar tayinine odaklanmaktadır. Bu arada, önemli bir ekonomik meyve ağacı olan guava'nın kaynakları bol olmakla birlikte, kökeni çeşitlilik göstermekte ve bu da guava yapraklarının kalitesini kontrol etmeyi zorlaştırmaktadır. Genel olarak, nar yapraklarının kalite standartları ve değerlendirme araştırması henüz mükemmel değildir ve acilen ele alınması gerekmektedir.
Çin tıbbı parmak izi, Çin tıbbi malzemelerinin ve yarı mamul Çin tıbbı preparatlarının orijinalliğini, kalitesini ve stabilitesini değerlendirmek için kapsamlı ve ölçülebilir bir tanımlama yöntemidir. Günümüzde Çin tıbbi malzemelerinin kalitesini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırma grubu, nar yapraklarındaki flavonoid bileşenler için erken aşamada çoklu bir değerlendirme yöntemi oluşturarak nar yapraklarının kalite kontrolü için belirli bir temel sağlamıştır. Bu çalışmada araştırma nesnesi olarak nar yaprakları ele alınmış ve parmak izi analizi için farklı kökenlerden 31 parti nar yaprağı örneği toplanmıştır. Benzerlik değerlendirmesi, küme analizi, temel bileşen analizi ve ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi, nar yaprağı kalitesi ve menşei arasındaki korelasyonu incelemek için kullanılır ve nar yapraklarının kalite değerlendirmesi ve kalite standardı araştırması için bir referans sağlar.

Araştırma grubunun önceki araştırmalarına atıfta bulunarak, ekstraksiyon yöntemi, asetonitril-0.2% fosforik asit su akış sistemi, Zorbax SE-C18 kolon (250mm x 4.6mm, 5um), 35 ℃ Du sıcaklığı ve 10uL enjeksiyon hacmi ile 30 dakika boyunca 60% etanol ultrasonik ekstraksiyon olarak belirlenmiştir. Aynı zamanda, dalga boylarının (230, 254, 360nm) ve akış sistemindeki farklı gradyan elüsyon oranlarının nar yapraklarının HPLC parmak izi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Sonuç olarak, bu deneyde belirlenen kromatografik koşullar altında, nar yaprağı numune çözeltisi en fazla sayıda pike sahipti ve HPC taban çizgisi kararlı bir pik şekline ve iyi bir ayrıma sahipti.

Bu deneyde Guangdong, Guangxi, Fujian, Hainan ve Sichuan dahil olmak üzere bölgesel temsilcileri olan guava yaprağı tıbbi malzemeleri toplanmış ve guava yaprağı parmak izi spektrumlarının evrenselliği sağlanmıştır. Nar yapraklarının HPLC parmak izi spektrumlarını analiz etmek için benzerlik değerlendirmesi kullanılarak, 31 parti nar yaprağının HPC parmak izi spektrumlarının benzerliğinde belirli farklılıklar olduğu ve farklı bölgelerden gelen nar yapraklarının kalitesinin coğrafi faktörlerden etkilendiği bulunmuştur.

Kümeleme analizi ve temel bileşen analizi sonuçları tutarlıdır ve 31 parti nar yaprağı örneğinin Guangxi, Guangdong, Fujian ve Hainan bir kategori olarak ve Sichuan ve Yunnan bir kategori olarak birlikte kümelenerek esas olarak iki kategoriye ayrıldığı bulunmuştur. Çin'in coğrafi dağılım haritası ve idari bölümlerine göre, Sichuan ve Yunnan, güneybatı bölgesine ait Büyük Khingan Sıradağları, Taihang Dağları, Wushan Dağları ve Xuefeng Dağları arasındaki sınırın ikinci kademesinde (ortalama 1000-2000 m yükseklikte) yer almaktadır; Guangxi, Guangdong, Fujian ve Hainan, Büyük Khingan Sıradağları, Taihang Dağları, Wushan ve Xuefeng Dağları ile sınırlanan üçüncü kademede (ortalama yüksekliği 500 metreden az olan) yer alır ve kıyı bölgelerine aittir. Ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi kullanılarak, bu iki tür üretim alanı arasında nar yapraklarında farklılıklara neden olan yedi ana bileşen belirlenmiş ve beş bileşen tanımlanmıştır: tannik asit, hiperosid, izoquercitrin, naringin ve guava glikozidi. Guava yaprak örneklerinde tannik asit, hiperozit, izoquercetin renozit ve guava glikozitin kantitatif analizi yoluyla, kıyı bölgelerindeki (Guangdong Guangxi, Fujian Hainan) beş bileşenin içeriğinin güneybatı bölgelerindekinden (Sichuan, Yunnan) daha düşük olduğu ve önemli bir fark olduğu bulunmuştur (bkz. Şekil 7). Özetle, nar yapraklarının ikincil metabolitlerinde önemli bölgesel farklılıklar vardır ve bu da nar yapraklarının kalitesinin yetişme ortamlarıyla yakından ilişkili olduğunu ve yerel iklim koşulları ile çevresel faktörlerden etkilenebileceğini göstermektedir. Etkileyen spesifik faktörleri belirlemek için daha fazla inceleme ve araştırmaya ihtiyaç vardır.

Bu çalışma nar yapraklarına odaklanmakta ve nar yaprağı tıbbi malzemelerinin kimyasal parmak izini oluşturmak için yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanmaktadır. Nar yaprağı tıbbi malzemelerindeki çiçek asidi, altın şeftali kabuğu ve kinolon içeriği belirlenmiş ve farklı bölgelerden 31 parti nar yaprağı tıbbi malzemesi kimyasal bir hesaplama yöntemi kullanılarak analiz edilmiştir. Nar yaprağı tıbbi malzemelerinin kalitesinin bölgesel faktörlerden etkilendiği bulunmuştur. Oluşturulan yöntem basit ve doğrudur, nar yaprağı tıbbi malzemeleri için kalite kontrolü ve kalite standartlarının oluşturulması için bir yöntem ve veri referansı sağlar.