Rezene kökü kabuğundaki etkili bileşenlerin spektral etki ilişkisine dayalı olarak karaciğer fibrozuna karşı taranması ve mekanizmasının araştırılması
Karaciğer fibrozu, karaciğer sirozunun ve hatta karaciğer kanserinin ana nedenidir ve karaciğer kanserinin yaklaşık 90%'si karaciğer fibrozu veya sirozu temelinde gelişir. Bu nedenle, karaciğer fibrozunun tedavisi özellikle önemlidir. Karaciğer fibrozunun klinik insidansı her geçen yıl artmakta ve bu da insanların yaşam güvenliğini ciddi şekilde tehlikeye atmaktadır. Karaciğer fibrozunun başlıca nedenleri arasında kronik hepatit virüsü enfeksiyonu, alkol kullanımı ve alkolik olmayan yağlı karaciğer hastalığı yer almaktadır. Karaciğer fibrozunun özelliği, ekstraselüler matriksin sentezinin ve birikiminin artmasının yanı sıra ekstraselüler matriksin degradasyonunun azalması veya hiç olmamasından kaynaklanan aşırı ekstraselüler matriks birikimidir. Hepatik stellat hücrelerin aktivasyonu karaciğer fibrozunda anahtar bir bağlantı olarak kabul edilir ve karaciğerde hücre dışı matriks proteinlerinin aşırı birikiminin ana nedenidir.
Rezene kökü kabuğu, Umbelliferae bitkisi Foeniculum vulgare Mill'in kurutulmuş kök kabuğudur. Standart Uygur tıp kitabında yer alır ve ıslak soğuktan kaynaklanan çeşitli iltihaplar ve şişlikler, iki taraflı soğuk ağrısı, bel ağrısı, amenore, idrar tıkanıklığı ve eski bağırsak tıkanıklığı gibi ıslak soğuk veya müsinli hastalıkları tedavi etmek için kullanılır. Hugan Buzu Re Granülleri, geleneksel Çin tıbbında karaciğeri korumak için kullanılan klasik bir formüldür. Kereviz tohumu, kereviz kökü, krizantem tohumu, dodder tohumu, hindiba kökü, rezene kökü kabuğu ve rezeneden oluşur ve karaciğeri besleyici ve safra akışını teşvik edici etkilere sahiptir. Araştırma grubunun ön araştırması, Hugan BuZuRe granüllerinin sıçanlarda CCI4 kaynaklı karaciğer fibrozuna karşı koruma sağlayabileceğini ortaya koymuştur. Medina Saifudin ve arkadaşları, geleneksel Çin tıbbı rezene kökü kabuğunun karaciğer dokusu onarımını teşvik etme ve karaciğer hücre zarlarını koruma konusunda belirli bir dereceye sahip olduğunu bulmuştur. Bu nedenle, rezene kökü kabuğu karaciğer fibrozunu önleyici etkilere sahip olabilir.
İlaç spektrum etkisi ilişkisi çalışması, etkili kimyasal bileşenleri analiz etmek için kimyasal bileşimi ve farmakolojik araştırmayı birleştiren bir yöntemdir. Spektrum çalışmasına dayanarak, yararlı kimyasal bilgilerin elde edilmesini en üst düzeye çıkarır, spektrumları farmakolojik sonuçlarla ilişkilendirir, doğrusal veya doğrusal olmayan matematiksel işleme yoluyla bir "spektrum etkisi" matematiksel modeli oluşturur ve farmakolojik etkilerle ilgili bileşik gruplarını belirler. Bilinen ve bilinmeyen bileşenleri analiz ederek, geleneksel Çin tıbbının karmaşık karma sistemlerinde bulunan kimyasal bileşenlerin türleri ve içerikleri en üst düzeyde yansıtılabilir, böylece geleneksel Çin tıbbının kalitesinin genel bir tanımı ve değerlendirilmesi sağlanabilir. Bu nedenle, bu çalışmada, Çin şifalı bitkisi rezenenin kök kabuğunun kimyasal bileşenlerini araştırmak için ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi-kütle spektrometresi kullanılmıştır. Etanol ekstraksiyonu, petrol eteri ekstraksiyonu, etil asetat ekstraksiyonu, n-bütanol ekstraksiyonu ve su ekstraksiyonunun HSC-T6 hücre proliferasyonu üzerindeki etkileri, kısmi en küçük kareler ve gri ilişkisel analiz kullanılarak rezene kök kabuğunun kimyasal bileşenlerini taramak için UPLC-Orbitrap-MS/MS ile birleştirildi. Rezene kökü kabuğunun etkili bileşenlerinin anti karaciğer fibrozis etkisini ve mekanizmasını doğrulamak için in vitro deneyler yapılmış ve etnik tıbbın araştırılması ve geliştirilmesi için bilimsel temel sağlanmıştır.

Geleneksel Çin tıbbındaki çoklu hedeflerin ve bileşenlerin sinerjik etkileri araştırmalarda sıcak bir konu haline gelmiştir. Aktif bileşenlerin incelenmesi ilaç araştırmalarının temelidir ve aktif bileşenleri ve etki şekilleri karmaşıklık ile karakterize edilir. 2002 yılında Li Rong, geleneksel Çin tıbbı etkinliğinin incelenmesi için yeni bir araştırma yönüne işaret eden spektral etki ilişkisi teorisini önermiştir. Rezene kökü kabuğunun alkol ekstraktının ve farklı ekstraktlarının UPLC-Orbitrap-MS/MS spektrumlarındaki ortak piklerin ve bunların karaciğer fibrozu karşıtı etkilerinin ölçülmesine dayanan bu çalışmada, rezene kökü kabuğunun toplam iyon akış spektrumlarındaki ortak pikler ile bunların karaciğer fibrozu karşıtı etkileri arasındaki korelasyonu araştırmak için kısmi en küçük kareler ve gri korelasyon analizi kullanılmıştır. Bu, bileşenlerin farmakolojik etkiye katkısını büyük ölçüde yansıtabilir.
Bu çalışma rezene kökü kabuğunun alkol ekstraktı, petrol eteri, etil asetat, n-bütanol ve su kısımlarına odaklanmaktadır. Rezene kökü kabuğunun sıvı kromatografi-kütle spektrometresi (LC-MS) spektrumunu oluşturmak için yüksek performanslı sıvı kromatografi-kütle spektrometresi analizi yapılmıştır. Toplam 58 ortak pik pozitif ve negatif iyon modlarında kalibre edilmiş ve spektrumlar analiz edilmiştir. Her numunenin ortak pik alanlarının farklı olduğu görülebilir, bu da spektral verimlilik ilişkisi araştırması için kullanılabilir. Spektral etki ilişkisi analizi, 11 bileşenin anti karaciğer fibrozis etkisine önemli ölçüde katkıda bulunduğunu göstermiştir (VIP>1 ve regresyon katsayısı>0). Bunlar arasında, literatürde karaciğer fibrozu karşıtı etkileri olduğu bildirilen bileşikler arasında gallik asit, apigenin, kaempferol, kuersetin, skopoletin ve rhein bulunmaktadır ve rezene kökü kabuğunun çok bileşenli ve çok hedefli karaciğer fibrozu karşıtı etkilerinin özelliklerini yansıtmaktadır. Dihidrokamptotesin, dihidrokapsaisin ve skopolamin, rezene kökü kabuğunda ilk kez bulunan nispeten yüksek içerikli ve iyi anti karaciğer fibrozis aktivitesine sahip bileşiklerdir ve potansiyel kalite belirteçleri olabilirler. Bunlar arasında dehidrokamelbin, akciğer dokusunda TGF - β 1, Smad3 ve NF kB p65 ekspresyonunu azaltarak Echinococcus granulosus'un ikincil enfeksiyonunun neden olduğu fare akciğer dokusu fibrozunu iyileştirebilir. Dihidrokapsaisin ve skopolaminin karaciğer fibrozisini önleyici etkileri hakkında herhangi bir rapor bulunmamaktadır.
Bcl-2 anti apoptotik gene aittir ve hücre yaşamı ile ölümünün koordine edilmesinde kilit bir faktördür, Bax ise pro apoptotik gene aittir ve Bcl-2 ailesinin pro apoptotik bir proteinidir. Hücre apoptozunun önemli bir efektör faktörü olan kaspaz3, apoptotik proteazların kaskad reaksiyonu için gerekli bir yoldur. Aktivasyonu, apoptozun geri dönüşü olmayan bir aşamaya girdiğini gösterir. Apoptozda Bax/Bcl-2 oranı, mitokondriyal yolla hücre apoptozunu ölçmek için önemli bir göstergedir. Bax/Bcl-2 oranı arttığında apoptoz artar; tersi durumda ise apoptoz azalır. Hücreler apoptotik sinyalleri algıladıklarında, Bcl-2 ve Bax gibi apoptotik faktörlerin ekspresyonunu düzenleyerek Kaspaz-9'u (Caspase9) aktive edebilir, böylece Kaspaz3'ü aktive edebilir ve Kaspaz ailesinin bir kaskad reaksiyonunu tetikleyerek hücre apoptozunu indükleyebilirler. Bu çalışma, dehidrokamptotesin ve dihidrokapsaisinin mitokondriyal fonksiyonu azaltabildiğini ve aktive edilmiş hepatik stellat hücrelerinde mitokondriyal membran potansiyeli dengesini bozabildiğini, pro apoptotik faktörün (Bax) büyük ölçüde salınmasına yol açtığını ve sonuçta hücre apoptozuna neden olduğunu, hepatik stellat hücrelerinin çoğalmasını azalttığını, hücre dışı matris ve α - düz kas aktivatör proteininin ekspresyonunu inhibe ettiğini ve böylece karaciğer fibrozunu hafiflettiğini deneyler yoluyla doğrulamıştır. Sonraki deneylerde, seçilen monomerik bileşikleri doğrulamak ve rezene kökü kabuğu monomerik bileşiklerinin anti karaciğer fibrozis mekanizmasını mRNA ve protein seviyelerinde daha fazla araştırmak için in vivo deneylerin yapılması gerekmektedir.
Özetle, bu çalışmada rezene kökü kabuğunun çok bileşenli ve çok hedefli anti karaciğer fibrozu etkilerinin özelliklerini yansıtan, anti karaciğer fibrozunda rezene kökü kabuğunun olası bileşenlerini aydınlatmak için kısmi en küçük kareler ve gri korelasyon analizi ile birlikte UPLC Orbitrap MS/MS teknolojisi kullanılmıştır. Bu, geleneksel Çin tıbbı etkinliğinin maddi temelini açıklığa kavuşturmak ve geleneksel Çin tıbbının kalite standartlarını iyileştirmek, etki mekanizmasını ve klinik uygulamasını daha iyi anlamak için referans sağlamak açısından büyük önem taşımaktadır.