Оценка качества листьев граната из разных регионов по спектрам отпечатков пальцев и химической стехиометрии
Листья граната - это высушенные листья растения Psidium guajava Linn. из семейства Rosaceae, распространенного в основном в Гуандуне, Гуанси, Сычуани, Юньнани, Фуцзяни и Тайване. Они обладают эффектами осушения сырости и укрепления селезенки, очищения от жара и детоксикации, вяжущего действия на кишечник и остановки диареи, а также противовоспалительным и кровоостанавливающим эффектами. Современные исследования показали, что основными действующими веществами в листьях граната являются флавоноиды (гваякол, изокверцитрин, гиперозид, нарингин, нарингин, нарингенин, кверцетин) и тритерпеноиды, которые оказывают гипогликемическое, антиоксидантное и антибактериальное действие.
В настоящее время листья граната не включены в издание Китайской фармакопеи 2020 года, но они включены в Стандарты китайской травяной медицины провинции Гуанси (издание 1990 года), Стандарты китайской травяной медицины провинции Гуандун, том 1 (издание 2004 года), Стандарты китайской травяной медицины провинции Хунань (издание 2009 года), Стандарты обработки травяных лекарств провинции Хунань (издание 2010 года), Стандарты качества лекарств провинции Гуанси-Чжуан (том 2, издание 2011 года), Стандарты обработки травяных лекарств провинции Фуцзянь (издание 2012 года) и Стандарты обработки травяных лекарств провинции Сычуань (издание 2015 года), и являются местными стандартными лекарственными материалами. Вышеуказанные стандарты позволяют лишь качественно идентифицировать кверцетин в листьях граната методом тонкослойной хроматографии. Методы исследования и анализа качества лекарственного сырья из листьев граната в основном сосредоточены на содержании основных компонентов и многокомпонентном количественном определении, что затрудняет комплексное отражение качества лекарственного сырья. Между тем, гуава, как важное экономическое плодовое дерево, изобилует ресурсами, но их происхождение варьируется, что затрудняет контроль качества листьев гуавы. В целом, стандарты качества и исследования по оценке листьев граната еще не совершенны и требуют безотлагательного решения.
Отпечатки пальцев китайских лекарств - это комплексный и количественно определяемый метод идентификации для оценки подлинности, качества и стабильности китайских лекарственных материалов и полуфабрикатов китайской медицины. В настоящее время он широко используется для оценки качества китайских лекарственных материалов. Исследовательская группа создала метод многократной оценки флавоноидных компонентов в листьях граната на ранней стадии, что заложило определенную основу для контроля качества листьев граната. В данной работе в качестве объекта исследования взяты листья граната и собрана 31 партия образцов листьев граната различного происхождения для анализа отпечатков пальцев. Оценка сходства, кластерный анализ, анализ главных компонент и ортогональный частичный дискриминантный анализ по методу наименьших квадратов используются для изучения корреляции между качеством гранатовых листьев и их происхождением, обеспечивая основу для оценки качества и исследования стандартов качества гранатовых листьев.

Ссылаясь на предыдущие исследования исследовательской группы, метод экстракции был определен как 60% ультразвуковая экстракция этанолом в течение 30 минут, с проточной системой ацетонитрил-0,2% фосфорная кислота вода, колонка Zorbax SE-C18 (250 мм x 4,6 мм, 5um), температура Du 35 ℃ и объем инжекции 10 мкл. В то же время было исследовано влияние длин волн (230, 254, 360 нм) и различных соотношений градиентного элюирования в проточной системе на ВЭЖХ-отпечаток листьев граната. В результате при хроматографических условиях, определенных в данном эксперименте, раствор пробы листьев граната имел наибольшее количество пиков, а базовая линия HPC имела стабильную форму пика и хорошее разделение.

В данном эксперименте были собраны лекарственные материалы из листьев гуавы, представленные в разных регионах, включая Гуандун, Гуанси, Фуцзянь, Хайнань и Сычуань, что позволило обеспечить универсальность спектров отпечатков пальцев листьев гуавы. Используя оценку сходства для анализа ВЭЖХ-спектров отпечатков пальцев листьев граната, было обнаружено, что существуют определенные различия в сходстве ВЭЖХ-спектров отпечатков пальцев 31 партии листьев граната, а на качество листьев граната из разных регионов влияют географические факторы.

Результаты кластерного анализа и анализа главных компонент совпали, и было установлено, что 31 партия образцов листьев граната в основном разделена на две категории, причем Гуанси, Гуандун, Фуцзянь и Хайнань объединены в одну категорию, а Сычуань и Юньнань - в одну категорию. Согласно карте географического распределения и административного деления Китая, Сычуань и Юньнань расположены на втором ярусе (со средней высотой 1000-2000 м) границы между Большим Хинганским хребтом, горами Тайхан, Ушань и Сюэфэн, относящимися к юго-западному региону; Гуанси, Гуандун, Фуцзянь и Хайнань расположены на третьем ярусе (со средней высотой менее 500 м), ограниченном хребтами Большой Хинган, Тайхан, Ушань и Сюэфэн, и относятся к прибрежным районам. С помощью ортогонального частичного дискриминантного анализа по методу наименьших квадратов были определены семь основных компонентов, обуславливающих различия в листьях граната между этими двумя типами производственных зон, и пять компонентов: дубильная кислота, гиперозид, изокверцитрин, нарингин и гликозид гуавы. В результате количественного анализа дубильной кислоты, гиперозида, изокверцитрина ренозида и гликозида гуавы в образцах листьев гуавы было установлено, что содержание этих пяти компонентов в прибрежных районах (Гуандун-Гуанси, Фуцзянь-Хайнань) ниже, чем в юго-западных районах (Сычуань, Юньнань), причем разница была значительной (см. рис. 7). Таким образом, существуют значительные региональные различия в содержании вторичных метаболитов в листьях граната, что указывает на то, что качество листьев граната тесно связано с условиями их произрастания и может зависеть от местных климатических условий и факторов окружающей среды. Для определения конкретных влияющих факторов необходимы дальнейшие исследования.

Данное исследование посвящено листьям граната и использует высокоэффективную жидкостную хроматографию для создания химического отпечатка лекарственного сырья из листьев граната. Определено содержание цветочной кислоты, коры золотистого персика и хинолонов в лекарственном сырье из листьев граната. 31 партия лекарственного сырья из листьев граната из разных регионов была проанализирована с помощью метода химического расчета. Установлено, что на качество лекарственного сырья из листьев граната влияют региональные факторы. Разработанный метод является простым и точным, что позволяет использовать его для контроля качества и установления стандартов качества лекарственного сырья из листьев граната.