Különböző primitív piócákból származó jellegzetes peptidek azonosítása
A Kínai Népköztársaság gyógyszerkönyvének 2020-as kiadása (a továbbiakban: gyógyszerkönyv) előírja, hogy a hagyományos kínai gyógyászati pióca a piócák családjába tartozó állatok, a Whitman pigra Whitman, a Hirudo nipponica Whitman vagy a Whitman acranulata Whitman fűzfalevél pióca szárított egészét jelenti. Íze sós, keserű és enyhe; van egy kis méreganyag, amely a májmeridiánhoz tartozik. Funkciója a vér megtörése és a keringés elősegítése, a vér pangásának megszüntetése és a stagnálás megszüntetése. Általánosan használják a vér pangására és a meridián elzáródására, tömegek kezelésére, stroke hemiplegia, valamint esések és sérülések kezelésére. Az elmúlt években jelentősen megnőtt a szív- és érrendszeri és agyi érrendszeri betegségekben szenvedő betegek száma, ami a piócás gyógyászati anyagok iránti növekvő keresletet eredményezte. A piacon azonban számos összetett és eltérő minőségű piócás gyógyászati anyag van forgalomban. A piócák mellett a piacon van egy Poecilobdra manillensis Lesson nevű hamisított termék is. Jelenleg a piócák és a piócák mindkettő szárított áru, amelyek megjelenésükben és jellemzőikben jelentős különbségeket mutatnak, így könnyen megkülönböztethetők. Ezért ez a tanulmány csak a piócák különböző eredetének vizsgálatára összpontosít. A szakirodalmi áttekintés során kiderült, hogy a piócákkal kapcsolatos jelenlegi kutatások a véralvadásgátló mechanizmusokra és az aminosavak meghatározására összpontosítanak, míg a különböző primitív piócák és keverékeik minőségéről viszonylag kevés átfogó tanulmány készült. A különböző primitív piócák közötti azonosítási vizsgálatok többnyire a Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása szerinti tulajdonságazonosításon alapulnak. Egyes tanulmányok a DNS-molekuláris azonosítási és fehérjeelemzési technikák segítségével megállapították, hogy a piócák DNS-molekuláris azonosítási technológiája PCR segítségével megállapítható, és a különböző primitív piócák fehérjéi SDS-PAGE és 2-DE segítségével megkülönböztethetők. Ezenkívül vannak olyan vizsgálatok, amelyek HPLC jellegzetes spektrum módszereken vagy nagy áteresztőképességű szekvenálási módszereken alapuló megkülönböztetésre is képesek, de az ilyen módszereknek olyan problémáik vannak, mint a hosszú kimutatási idő és a kimutatási eszközök alacsony népszerűsége. Ez a tanulmány LC-MS módszert használt a pióca peptid I és a pióca peptid II kimutatására. A létrehozott módszer erős specificitással, nagy érzékenységgel és rövid elemzési idővel rendelkezik, és felhasználható a különböző eredetű piócák megkülönböztetésére, minőségellenőrzési szintjük javítására, valamint referenciaként szolgálhat a kapcsolódó gyógyszerek klinikai alkalmazásának biztonságosságához és hatékonyságához.

Az állati eredetű gyógyászati anyagok azonosítása mindig is kulcsfontosságú és nehéz kérdés volt a hagyományos kínai gyógyszerkutatásban. A jelenlegi azonosítási módszerek azonban főként a hagyományos azonosítási módszerekre támaszkodnak, amelyek erősen szubjektívek, és erős szakmai tudást és tapasztalatot igényelnek a megkülönböztetőtől. Hiányoznak a modern kimutatási módszereken alapuló tudományos, hatékony és pontos azonosítási módszerek. A pióca értékes hagyományos kínai gyógyszer, amely erős gyógyászati és kutatási értékkel bír. A piócák gyógyászati értékét világszerte is felismerték, és Európában, Egyiptomban és Indiában is használták a piócákat betegségek kezelésére. A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása rögzíti, hogy a piócák három alapelemet tartalmaznak, de jelenleg a Kínai Gyógyszerkönyv csak olyan vizsgálatokkal ellenőrzi őket, mint a nedvesség, az összes hamutartalom, a savasság és lúgosság, valamint az antitrombin aktivitás. Jelenleg nincs feljegyzés a különböző alapelemek közötti differenciált jellemzésről, ami nélkülözi a tudományos alapot, és nem tudja azonosítani a főzetet vagy a gyógyászati anyagok főzés utáni összetételét.
Ebben a vizsgálatban 22 különböző eredetű pióca tételt vizsgáltak, köztük 15 tétel piócát, 2 tétel fűzfalevél piócát és 5 tétel piócát. Az eredmények azt mutatták, hogy mind a 15 tétel pióca képes volt kimutatni a pióca peptid I és a pióca peptid II kromatográfiás csúcsokat, 2 tétel fűzfalevél pióca csak a pióca peptid II-t, és 5 tétel pióca csak a pióca peptid I-t. A vizsgálati eredményekből látható, hogy a különböző eredetű piócák megkülönböztethetők a pióca peptid I és a pióca peptid II mérésével. A PLS-DA analízis révén látható, hogy a különböző eredetű piócák egyértelműen három kategóriába sorolhatók, és az analízis eredményei összhangban vannak az eredet azonosítási eredményeivel. Más dokumentumok szerint a hirudo polipeptid aktivitása elsősorban véralvadásgátló hatású, és magában foglalja a proteáz gátlást, gyulladáscsökkentő, hidroláz, a makrofágok migrációjának gátlását az ateroszklerózisban és más farmakológiai tevékenységeket is. Ez azt jelzi, hogy az aminosavak és nukleozidok mellett a hirudo polipeptid is a farmakológiai hatás egyik fő összetevője. A fenti dokumentumok azonban a polipeptid farmakológiai vizsgálatára összpontosítanak, és a polipeptid kimutatási módszere nem került megállapításra. Ez a dokumentum LC-MS módszert használ a hirudo polipeptid meghatározására, hivatkozva a polipeptid más fajtáinak extrakciós és vizsgálati módszereire, tudományos és technikai eszközt biztosítva a minőségellenőrzéshez, amely a hirudo polipeptid csúcsterületének mérésével tükrözheti a farmakológiai hatás minőségét; Ezenkívül a Kínai Gyógyszerkönyvben a piócák tartalmi meghatározási pontja szerint a "piócák trombinellenes aktivitása nem lehet kevesebb 16-nál.0U per 1g; a piócák és a fűzfalevél piócák nem lehetnek 3,0U-nál kisebbek". Ez azt mutatja, hogy a póréhagyma és a fűzfalevél póréhagyma trombinellenes aktivitása jelentősen eltér a póréhagyma és a fűzfalevél póréhagymáéhoz képest, vagyis a különböző eredetű póréhagymák jelentős minőségi különbségeket mutatnak. Ezért ennek a módszernek a használata a különböző eredetű piócás gyógyászati anyagok és az alapvető jellemzőiket elvesztett vizes főzeteik, formulakészítményeik stb. gyors és pontos megkülönböztetésére nagy jelentőséggel bír a piócák és a kapcsolódó termékek minőségének javítása szempontjából.
A kutatóintézet által létrehozott módszer a gyorsaság, a hatékonyság és a reprodukálhatóság jellemzőivel rendelkezik, ami javíthatja a minőségellenőrzési szintet, és referenciát biztosíthat a piócákkal kapcsolatos gyógyszerek klinikai alkalmazásának biztonságosságához és hatékonyságához. Hatékonyan megoldja a piócák problémáját, amelyek hosszú ideig csak a hagyományos azonosítási módszerekkel tudják megkülönböztetni a különböző eredetűeket.