UPLC-Q-XActive Orbitrap масс-спектрометрия высокого разрешения количественный анализ содержания 9 компонентов в Ligustrum lucidum различного происхождения, до и после обработки
Ligustrum Lucidum Ait. - это высушенные и зрелые плоды Ligustrum Lucidum Ait, растения семейства Oleaceae. Обладает сладким, горьким и прохладным вкусом, проникает в меридианы печени и почек. Он питает печень и почки, улучшает зрение и чернит волосы; его можно использовать при недостатке инь в печени и почках, головокружении и шуме в ушах, болезненности и слабости в талии и коленях, преждевременном поседении волос, нечетком зрении, утолении внутреннего жара, распаривании костей, приливах жара и т. д. Fructus Ligustri Lucidi содержит множество активных ингредиентов, таких как тритерпеноиды, иридоиды, фенилэтанол, флавоноиды, летучие масла, сахара, аминокислоты, стерины и др. Он обладает разнообразными фармакологическими эффектами, такими как противодиабетический, противоопухолевый, защищающий печень, антиоксидантный, противовоспалительный, гипогликемический, липидоснижающий, иммунорегулирующий и др. В основном он используется в клинической терапии гиперлипидемии, остеопороза, рака толстой кишки, рака легких, гепатита и других заболеваний. Основными действующими веществами Ligustrum lucidum являются иридоидные гликозиды, однако эффективность Ligustrum lucidum не определяется содержанием отдельных компонентов. Такие компоненты, как фенилэтанол, флавоноиды и иридоиды, содержащиеся в Ligustrum lucidum, также использовались для оценки качества благодаря их антиоксидантной и противоостеопорозной активности, но они все еще не совершенны. Только анализируя содержание групп соединений, связанных с эффективностью Ligustrum lucidum, можно достоверно оценить качество лекарственного сырья Ligustrum lucidum. Поэтому в данном исследовании для оценки качества Ligustrum lucidum был разработан метод одновременного определения содержания нескольких активных компонентов, включая фенилэтанол (салидрозид, эхинакозид), флавоноиды (кверцетин, апигенин, рутин, вербаскозид, вербаскозид) и циклогексеновые эфиры терпенов (олеуропеин, астрагалозид).

Впервые метод обработки Ligustrum lucidum был описан в книге "Су Ян" времен династии Сун. Традиционные продукты переработки Ligustrum lucidum используются и сегодня, включая сырые и алкогольные продукты. В современное время к ним также добавляют очищенные продукты, продукты, приготовленные на пару, соль, уксус и т.д. В клинической практике обычно используются сырые и спиртовые продукты. Сырые продукты Ligustrum lucidum очищают печень и проясняют глаза, питают инь и увлажняют сухость, а питательное действие на печень и почки значительно усиливается после приема алкоголя. Исследования показали, что усиление тонизирующего действия вина из Ligustrum lucidum на печень и почки тесно связано с гидролизом и трансформацией иридоидных гликозидов в Ligustrum lucidum в процессе переработки. После обработки содержание иридоидных гликозидов и фенилэтаноловых гликозидов в Ligustrum lucidum уменьшается, в то время как содержание салидрозида и фенилэтаноловых гликозидов увеличивается. Однако эти исследования достаточно разрозненны и не систематизированы, что недостаточно для научной оценки изменений химического состава до и после обработки Fructus Zhenzi. В связи с этим в данном исследовании с помощью масс-спектрометрии высокого разрешения UPLC-Q Exactive-Orbitrap было проведено одновременное определение содержания салидрозида, рутина, вербаскозида, лигустилида, олеуропеина, лютеолина, апигенина, кверцетина и шишковидной кислоты в Ligustrum lucidum. Проанализирована структура распределения химических компонентов в Ligustrum lucidum из разных регионов, изучены изменения в содержании химических компонентов до и после обработки, чтобы обеспечить теоретическую основу для стандартизации стандартов качества отвара Ligustrum lucidum и продуктов переработки.

Анализ результатов определения содержания компонентов в Ligustrum lucidum различного происхождения. В данном исследовании был разработан метод ЖХ-МС для определения содержания 9 компонентов в Ligustrum lucidum различного происхождения. Согласно китайской фармакопее издания 2020 года, предельное содержание лигустилида должно составлять не менее 0,70%. Среди 22 партий протестированных лекарственных материалов Ligustrum lucidum различного происхождения содержание лигустилида в лекарственных материалах Ligustrum lucidum трех происхождений (Синьсян, Хэнань, Баодин, Хэбэй, и Хуэйсянь, Хэнань) было ниже предела, установленного Китайской фармакопеей издания 2020 года, и составляло 13,64%. Причины этого требуют дальнейшего изучения. В различных районах производства содержание салидрозида и паэонифлорина относительно высоко в Чжэнчжоу, Хэнань, Даньян, Хубэй, Гуаньюань, Сычуань, Янлинг, Шэньси, Наньян, Хэнань, Чанша, Хунань, и Чандэ, Хунань, с концентрацией от 0,9862 до 1,5440 мг/г и от 12,8500 до 18,1066 мг/г, соответственно. После обработки Ligustrum lucidum содержание гликозидов Ligustrum lucidum значительно увеличилось, и все они превышали предел содержания, установленный Китайской фармакопеей издания 2020 года. С помощью программного обеспечения SIMCA14.1 был проведен анализ главных компонент для Ligustrum lucidum различного происхождения и обработанного Ligustrum lucidum различного происхождения. Ligustrum lucidum различного происхождения и обработанный Ligustrum lucidum различного происхождения можно разделить на две категории: Категория I включает S2 S4、S6、S8、S13、S14、S15；Z2、Z4、26、Z8、Z13、Z14、Z15； Класс II включает S1 S3、S5、S7、S9、S10、S11、S12、S16~S22；Z1、Z3、Z5、Z7、Z9、Z10、Z11、Z12、Z16~Z22。 Согласно графику VIP в дискриминантном анализе частичных наименьших квадратов, видно, что вклад лигустилида, вербаскозида и салидрозида в разделение производственных зон является значительным. Результаты анализа показывают, что существуют значительные различия в качестве лекарственного сырья Ligustrum lucidum из разных районов производства, что может быть связано с различиями в условиях произрастания лекарственного сырья. Простое измерение содержания одного или двух компонентов не может эффективно отразить качество лекарственного сырья. Необходимо одновременно измерять несколько компонентов Ligustrum lucidum, чтобы всесторонне отразить его внутреннее качество.

Анализ результатов определения содержания Ligustrum lucidum до и после обработки. Существуют различные методы переработки Ligustrum lucidum, среди которых наиболее часто используется метод спиртовой ферментации, включающий тушение в спирте и пропаривание в спирте. В данном исследовании использовался метод тушения в вине для предварительного изучения изменений содержания компонентов в Ligustrum lucidum в процессе обработки. После тушения Ligustrum lucidum в спирте содержание салидрозида, астрагалозида и олеуропеина в Ligustrum lucidum значительно увеличилось. Возможно, из-за изменений в организационной структуре или физико-химических свойствах компонентов после получения спирта, он благоприятно влияет на процессы проникновения, растворения, вытеснения, диффузии и другие процессы растворения компонентов, что приводит к солюбилизирующему эффекту и улучшению скорости растворения эффективных ингредиентов. Конкретные факторы влияния требуют дальнейшего изучения. Гликозиды османтуса, лютеолин и рутин внесли значительный вклад в классификацию Ligustrum lucidum до и после обработки. Исследования показали, что после обработки Ligustrum lucidum гликозиды Ligustrum lucidum гидролизуются в салидрозид, и содержание салидрозида в обработанном Ligustrum lucidum значительно увеличивается. В данном исследовании был разработан метод определения содержания девяти компонентов, включая салидрозид, рутин, вербаскозид, рутинозид, олеуропеин, лютеолин, апигенин, кверцетин и гликозид шишковидной железы, в Ligustrum lucidum различного происхождения, до и после обработки с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. По сравнению с УФ-детектированием, этот метод исследования обладает сильной способностью к разделению, высокой чувствительностью, надежными результатами качественного анализа и низким пределом обнаружения. Значительные различия в качестве лекарственного сырья Ligustrum lucidum различного происхождения могут быть связаны с такими факторами, как регион, климат, почва, период роста и время сбора. В частности, гликозид, вербаскозид и салидрозид Ligustrum lucidum вносят значительный вклад в разделение по происхождению. После производства спиртового раствора Ligustrum lucidum содержание салидрозида, лигустилида и олеуропеина значительно увеличилось, что может быть связано с увеличением скорости растворения активных ингредиентов при производстве спиртового раствора. Конкретные причины этого явления требуют дальнейшего изучения. Данный экспериментальный метод является простым, надежным и высокочувствительным, что дает возможность использовать его для улучшения и повышения стандартов качества сырых и переработанных продуктов Ligustrum lucidum.