Análisis cuantitativo por espectrometría de masas de alta resolución UPLC-Q-XActive Orbitrap del contenido de 9 componentes en Ligustrum lucidum de diferentes orígenes y antes y después del procesado
Ligustrum Lucidum Ait. es un fruto seco y maduro de Ligustrum Lucidum Ait, una planta de la familia de las oleáceas. Tiene un sabor dulce, amargo y fresco y penetra en los meridianos del hígado y los riñones. Tiene los efectos de nutrir el hígado y los riñones, mejorar la visión y ennegrecer el cabello; puede utilizarse para la deficiencia de yin de hígado y riñón, mareos y acúfenos, dolor y debilidad de cintura y rodillas, encanecimiento prematuro del cabello, visión poco clara, sofocación del calor interno, vaporización de los huesos y sofocos, etc. El Fructus Ligustri Lucidi contiene diversos principios activos, como triterpenoides, iridoides, feniletanol, flavonoides, aceites volátiles, azúcares, aminoácidos, esteroles, etc. Tiene diversos efectos farmacológicos, como antidiabético, antitumoral, protector hepático, antioxidante, antiinflamatorio, hipoglucémico, hipolipemiante, regulador inmunitario, etc. Se utiliza principalmente en el tratamiento clínico de la hiperlipidemia, la osteoporosis, el cáncer de colon, el cáncer de pulmón, la hepatitis y otras enfermedades. Los principales ingredientes activos de Ligustrum lucidum son glucósidos iridoides, pero la eficacia de Ligustrum lucidum no está determinada por el contenido de los componentes individuales. Los componentes como el feniletanol, los flavonoides y los iridoides del Ligustrum lucidum también se han utilizado para evaluar la calidad debido a sus actividades antioxidantes y contra la osteoporosis, pero aún no son perfectos. Sólo analizando el contenido de los grupos de compuestos relacionados con la eficacia de Ligustrum lucidum se puede evaluar realmente la calidad de los materiales medicinales de Ligustrum lucidum. Por lo tanto, este estudio estableció un método para determinar simultáneamente el contenido de múltiples ingredientes activos en Ligustrum lucidum, incluyendo feniletanol (salidroside, echinacoside), flavonoides (quercetina, apigenina, rutina, verbascósido, verbascósido) y terpenos de éter ciclohexeno (oleuropeína, astragalósido), para evaluar la calidad de Ligustrum lucidum.

El método de procesamiento del Ligustrum lucidum apareció por primera vez en el libro "Su Yang" de la dinastía Song. Los productos procesados tradicionales de Ligustrum lucidum se siguen utilizando hoy en día, incluidos los productos crudos y alcohólicos. En los tiempos modernos, también se añaden productos purificados, productos al vapor, productos de sal, productos de vinagre, etc. Los productos crudos y alcohólicos se utilizan habitualmente en la práctica clínica. Los productos crudos de Ligustrum lucidum limpian el hígado y aclaran los ojos, nutren el yin y humedecen la sequedad, y el efecto nutritivo sobre el hígado y los riñones aumenta significativamente tras la producción de alcohol. Las investigaciones han demostrado que los efectos tonificantes del vino de Ligustrum lucidum sobre el hígado y los riñones están estrechamente relacionados con la hidrólisis y la transformación de los glucósidos iridoides de Ligustrum lucidum durante el procesado. Tras el procesado, el contenido de glucósidos iridoides y glucósidos feniletanólicos en Ligustrum lucidum disminuye, mientras que el contenido de salidrosida y glucósidos feniletanólicos aumenta. Sin embargo, estos estudios están relativamente dispersos y carecen de sistematicidad, lo que resulta insuficiente para evaluar científicamente los cambios en la composición química antes y después del procesado del Fructus Zhenzi. En vista de ello, este estudio utilizó la espectrometría de masas de alta resolución UPLC-Q Exactive-Orbitrap para establecer una determinación simultánea de los contenidos de salidrosida, rutina, verbascósido, ligustilida, oleuropeína, luteolina, apigenina, quercetina y ácido pineal en Ligustrum lucidum. Se analizó el patrón de distribución de los componentes químicos en Ligustrum lucidum de diferentes regiones y se examinaron los cambios en el contenido de los componentes químicos antes y después del procesado, con el fin de proporcionar una base teórica para estandarizar las normas de calidad de las piezas de decocción y los productos procesados de Ligustrum lucidum.

Análisis de los resultados de la determinación del contenido de Ligustrum lucidum de diferentes orígenes. Este estudio estableció un método LC-MS para determinar el contenido de 9 componentes en Ligustrum lucidum de diferentes orígenes. La edición 2020 de la Farmacopea China estipula que el límite de ligustilida no debe ser inferior a 0,70%. Entre los 22 lotes de materiales medicinales de Ligustrum lucidum de diferentes orígenes analizados, el contenido de ligustilida en los materiales medicinales de Ligustrum lucidum de tres orígenes (Xinxiang, Henan, Baoding, Hebei, y Huixian, Henan) fue inferior al límite de la edición de 2020 de la Farmacopea China, con 13,64%. Es necesario seguir investigando las razones de este hecho. En las diferentes zonas de producción, el contenido de salidrosida y paeoniflorina es relativamente alto en Zhengzhou, Henan, Dangyang, Hubei, Guangyuan, Sichuan, Yangling, Shaanxi, Nanyang, Henan, Changsha, Hunan, y Changde, Hunan, con concentraciones que oscilan entre 0,9862 y 1,5440 mg/g y 12,8500 y 18,1066 mg/g, respectivamente. Tras el procesado de Ligustrum lucidum, el contenido de glucósidos de Ligustrum lucidum aumentó significativamente, siendo todos ellos superiores al límite de contenido de la edición 2020 de la Farmacopea China. Utilizando el software SIMCA14.1, se realizó un análisis de componentes principales en Ligustrum lucidum de diferentes orígenes y en Ligustrum lucidum procesado de diferentes orígenes. El Ligustrum lucidum de diferentes orígenes y el Ligustrum lucidum procesado de diferentes orígenes pueden dividirse en dos categorías: La categoría I incluye S2 S4、S6、S8、S13、S14、S15；Z2、Z4、26、Z8、Z13、Z14、Z15； La categoría II incluye S1 S3、S5、S7、S9、S10、S11、S12、S16~S22；Z1、Z3、Z5、Z7、Z9、Z10、Z11、Z12、Z16~Z22。 Según el gráfico VIP en el análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales, se observa que la contribución de ligustilida, verbascósido y salidrósido a la división de las zonas de producción es significativa. Los resultados del análisis indican que existen diferencias significativas en la calidad de los materiales medicinales de Ligustrum lucidum procedentes de distintas zonas de producción, que pueden estar relacionadas con diferencias en el entorno de crecimiento de los materiales medicinales. La simple medición del contenido de uno o dos componentes no puede reflejar eficazmente la calidad de los materiales medicinales. Es necesario medir simultáneamente múltiples componentes de Ligustrum lucidum para reflejar de forma exhaustiva su calidad intrínseca.

Análisis de los resultados de la determinación del contenido de Ligustrum lucidum antes y después del procesado. Existen varios métodos para procesar Ligustrum lucidum, entre los cuales el más utilizado es la fermentación alcohólica, que incluye el estofado con alcohol y el vaporizado con alcohol. En este estudio se utilizó el método de guisado con vino para explorar de forma preliminar los cambios en el contenido de componentes de Ligustrum lucidum durante el procesado. Después de guisar Ligustrum lucidum con alcohol, el contenido de salidrosida, astragalósido y oleuropeína en Ligustrum lucidum aumentó significativamente. Tal vez debido a cambios en la estructura organizativa o en las propiedades fisicoquímicas de los componentes tras la producción de alcohol, éste es beneficioso para la infiltración, disolución, desplazamiento, difusión y otros procesos de disolución de los componentes, lo que produce un efecto solubilizante y mejora la velocidad de disolución de los ingredientes efectivos. Es necesario seguir investigando los factores específicos que influyen. Los glucósidos de osmanto, la luteolina y la rutina han contribuido significativamente a la clasificación de Ligustrum lucidum antes y después del procesado. Los estudios han demostrado que después de procesar Ligustrum lucidum, específicamente los glucósidos de Ligustrum lucidum se hidrolizan en salidrosida, y el contenido de salidrosida en Ligustrum lucidum procesado aumenta significativamente. En este estudio se estableció un método para determinar el contenido de nueve componentes, incluidos el salidrosido, la rutina, el verbascósido, el rutinósido, la oleuropeína, la luteolina, la apigenina, la quercetina y el glucósido pineal, en Ligustrum lucidum de diferentes orígenes y antes y después del procesado mediante cromatografía líquida de ultra alta resolución-espectrometría de masas. En comparación con la detección UV, este método de investigación tiene una gran capacidad de separación, alta sensibilidad, resultados de análisis cualitativos fiables y bajo límite de detección. Las diferencias significativas en la calidad de los materiales medicinales de Ligustrum lucidum de distintos orígenes pueden estar relacionadas con factores como la región, el clima, el suelo, el periodo de crecimiento y el momento de la recolección. En concreto, el glucósido, el verbascósido y el salidrósido de Ligustrum lucidum contribuyen significativamente a la división de orígenes. Tras la producción de licor de Ligustrum lucidum, el contenido de salidrosida, ligustilida y oleuropeína aumentó significativamente, lo que puede deberse al aumento de la velocidad de disolución de los ingredientes activos en la producción de licor. Es necesario seguir investigando las razones específicas. Este método experimental es sencillo, fiable y altamente sensible, y proporciona una referencia para la mejora y el aumento de los estándares de calidad de los productos crudos y procesados de Ligustrum lucidum.