Étude sur la qualité de différentes sangsues primitives et de leurs produits confondus
L'édition 2020 de la pharmacopée de la République populaire de Chine, ci-après dénommée "pharmacopée chinoise", stipule que les sangsues sont les parties sèches des animaux de la famille des sangsues, telles que la sangsue Whitman pigra Whitman, la sangsue Hirudo nipponica Whitman ou la sangsue acranulata Whitman. Son goût est salé, amer et plat. Il existe une petite toxine qui appartient au méridien du foie. Elle a pour fonction de briser le sang et de favoriser la circulation, de supprimer la stase sanguine et d'éliminer la stagnation. Il est couramment utilisé en cas de stase sanguine et d'obstruction du méridien, pour traiter les masses, l'hémiplégie consécutive à un accident vasculaire cérébral, les chutes et les blessures. Des études ont montré que les effets pharmacologiques des sangsues comprennent principalement des effets anticoagulants, antithrombotiques, antitumoraux, hypolipidémiques et anti-inflammatoires, et que leurs applications cliniques sont très vastes, notamment pour le traitement de la thrombose, de l'hyperlipidémie, de l'hypertension, du diabète, de la prostatite, du cancer, des varices, de l'infertilité, de la cirrhose et d'autres maladies. Les principaux composants des sangsues sont des composés macromoléculaires, contenant principalement des protéines et 17 types d'acides aminés, dont 8 acides aminés essentiels pour le corps humain. La teneur en acides aminés hydrolysés peut atteindre 49,4% ; en outre, elle contient également diverses substances telles que l'hirudine, l'héparine, l'histamine, l'hirudine, les glycolipides, les sphénoïdes, les stéroïdes et les esters carboxyliques.
L'analyse de la littérature a montré que les recherches actuelles sur les sangsues se concentrent sur les mécanismes anticoagulants et la détermination des acides aminés, et que les études globales sur la qualité des différentes sangsues primitives et de leurs mélanges sont limitées. Les études d'identification entre les différentes sangsues primitives et leurs mélanges sont principalement basées sur l'identification des caractéristiques conformément à l'édition 2020 de la pharmacopée chinoise. Le marché des sangsues est cher et chaotique, et l'identification traditionnelle de l'apparence ne permet pas à elle seule d'évaluer rapidement et efficacement leur qualité. En outre, l'identification de l'apparence ne peut être appliquée aux extraits et préparations de sangsues, ce qui présente certaines limites. Par conséquent, l'établissement d'une méthode d'évaluation rapide, scientifique et efficace est d'une grande importance. Cette étude a utilisé la CLHP pour établir le spectre caractéristique et la méthode de détermination du contenu des sangsues. Cette méthode évalue de manière exhaustive les sangsues et leurs produits mixtes, fournissant ainsi une base scientifique pour l'évaluation de la qualité des sangsues et de leurs produits mixtes.

Optimisation des conditions chromatographiques. Sur la base de l'établissement d'un spectre caractéristique, cette étude a utilisé la même méthode pour déterminer la teneur de deux composants caractéristiques de la sangsue, le dérivé carboxyle de l'amine C de la sangsue et l'amine B de la sangsue. Un détecteur à barrettes de diodes a été utilisé pour effectuer un balayage complet de la longueur d'onde de la solution d'essai dans la gamme de longueurs d'onde de 200-400nm. Les résultats ont montré que les pics chromatographiques de chaque composant principal présentaient une forte absorption UV à la longueur d'onde de 254 nm. Par conséquent, les mêmes conditions ont été utilisées pour analyser le spectre caractéristique et le contenu des échantillons de sangsue.
Analyse des résultats de la carte des caractéristiques. La sangsue est le corps entier séché de l'animal de la famille des sangsues, la Whitmania pigra Whitman. Ses propriétés médicinales sont en forme de fuseau plat. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise ne contrôle sa qualité que par l'humidité, la teneur totale en cendres, les tests d'acidité et d'alcalinité et l'activité antithrombine, et n'a pas encore effectué de caractérisation différentielle entre les différents substrats. Dans cette étude, des cartes caractéristiques CLHP de l'hirudo de différentes origines et de ses adultérants ont été établies. La comparaison des substances de référence a confirmé que l'hirudo contient cinq composants : l'uracile, l'hypoxanthine, la xanthine, les dérivés carboxyliques C de l'hirudine et l'hirudine B. D'après les rapports de la littérature, les composés de ptéridine susmentionnés ont des structures similaires à celles des médicaments antiagrégants plaquettaires tels que le clopidogrel, et l'on pense que ces composants peuvent être les composants actifs de l'hirudo pour jouer un rôle dans l'antiagrégant plaquettaire. Les effets pharmacologiques de l'hirudo rapportés sont principalement des effets anticoagulants, antithrombotiques et antiathérosclérotiques. Il est très important de clarifier les substances fonctionnelles des sangsues qui jouent un rôle pharmacologique et de promouvoir la recherche secondaire et le développement de médicaments. En même temps, la méthode établie peut identifier différentes sangsues primitives et leurs produits mixtes. L'étape suivante consiste à poursuivre la recherche sur l'application de cette méthode aux extraits et aux préparations, en fournissant des références pour le développement et l'utilisation de matériaux médicinaux à base de sangsues.
Analyse des résultats de la détermination du contenu. Sur la base de l'étude des cartes caractéristiques, cette étude a déterminé quantitativement cinq composants dans les sangsues, dont trois composés nucléosidiques, l'uracile et l'hypoxanthine, et deux composés sphénoïdes, les dérivés carboxylés de la leechamine C et la leechamine B. Selon les rapports de la littérature existante, les composés nucléosidiques et les composés sphénoïdes peuvent être utilisés comme indicateurs d'évaluation de la qualité des sangsues. Les résultats expérimentaux ont montré qu'il existait certaines différences dans la teneur en uracile et en hypoxanthine entre les différentes sangsues primitives et leurs mélanges. La teneur moyenne en uracile et en hypoxanthine était dans l'ordre suivant : sangsue> sangsue> sanglier> sangsue philippine ; La teneur moyenne en xanthine est la suivante : La teneur moyenne en xanthine est la suivante : sangsue> sangsue> sangsue des Philippines> sangsue des feuilles ; La teneur moyenne en dérivés C-carboxyle de l'amine de sangsue est la suivante : sangsue des feuilles> sangsue> sangsue> sangsue des Philippines ; La teneur moyenne en leechamine B est la suivante : sangsue des feuilles> sangsue> sangsue> sangsue> sangsue des Philippines. La sangsue philippine ne contient pas de leechamine B et la teneur en hypoxanthine est nettement inférieure à celle des trois autres substrats. Par conséquent, la détermination de la teneur des composants susmentionnés peut être utilisée pour distinguer les sangsues aquatiques (y compris les sangsues, les sangsues et les sangsues à feuilles) des sangsues médicales (sangsues des Philippines). En outre, l'analyse PLS-DA utilise les surfaces de 8 pics caractéristiques de l'échantillon comme variables, et les surfaces des pics caractéristiques sont étroitement liées à la teneur de leurs composants indicateurs correspondants. Si l'on combine les résultats de l'analyse PLS-DA au point "2.4.5", les valeurs VIP des pics caractéristiques correspondant à l'hypoxanthine et à la xanthine sont supérieures à 1, et la sangsue à feuilles de saule ne contient pas de xanthine. La teneur moyenne des trois autres xanthines primitives présente également des différences significatives, ce qui indique que le choix de ces cinq composants comme indicateurs de détermination de la teneur a une certaine validité scientifique.
La méthode établie par notre institut de recherche est précise, sensible et présente une bonne spécificité. Elle permet d'analyser simultanément les spectres caractéristiques et d'évaluer le contenu des matières médicinales de sangsues. Elle peut être utilisée comme méthode d'évaluation de la qualité pour différentes sangsues primitives et leurs mélanges, fournissant ainsi une référence pour l'évaluation de la qualité des matières médicinales à base de sangsues.