Tanulmány a különböző primitív piócák és az azokból készült termékek minőségéről
A Kínai Népköztársaság gyógyszerkönyvének (a továbbiakban: Kínai Gyógyszerkönyv) 2020-as kiadása előírja, hogy a piócák a piócafélék családjába tartozó állatok, például a Whitman pigra Whitman pióca, a Hirudo nipponica Whitman pióca vagy a Whitman acranulata Whitman fűzfalevél pióca szárított egészét jelentik. Íze sós, keserű és lapos; van egy kis méreganyag, amely a májmeridiánhoz tartozik. Funkciója a vér megtörése és a keringés elősegítése, a vér pangásának megszüntetése és a stagnálás megszüntetése. Általánosan használják a vér pangására és a meridián elzáródására, tömegek kezelésére, stroke hemiplegia, valamint esések és sérülések kezelésére. Tanulmányok kimutatták, hogy a piócák farmakológiai hatásai közé elsősorban a véralvadásgátló, antitrombotikus, daganatellenes, hipolipidémiás és gyulladáscsökkentő hatások tartoznak, és nagyon széles klinikai alkalmazásuk van, beleértve a trombózis, a hiperlipidémia, a magas vérnyomás, a cukorbetegség, a prosztatagyulladás, a rák, a visszerek, a meddőség, a májzsugor és más betegségek kezelését. A piócák fő összetevői makromolekuláris vegyületek, amelyek főként fehérjéket és 17 féle aminosavat tartalmaznak, köztük 8, az emberi szervezet számára esszenciális aminosavat. A hidrolizált aminosavtartalom elérte a 49,4%-t; Ezenkívül különböző anyagokat is tartalmaz, mint például hirudin, heparin, hisztamin, hirudin, glikolipidek, szfenoidok, szteroidok és karboxil-észterek.
A szakirodalmi áttekintés során megállapítást nyert, hogy a piócákkal kapcsolatos jelenlegi kutatások a véralvadásgátló mechanizmusokra és az aminosav-meghatározásra összpontosítanak, és csak korlátozottan végeznek átfogó vizsgálatokat a különböző primitív piócák és keverékeik minőségéről. A különböző primitív piócák és keverékeik közötti azonosítási vizsgálatok többnyire a Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása szerinti tulajdonságazonosításon alapulnak. A piócák piaca drága és kaotikus, és a hagyományos megjelenés szerinti azonosítás önmagában nem képes gyorsan és hatékonyan értékelni a minőségüket. Ráadásul a megjelenés szerinti azonosítás nem alkalmazható a piócakivonatokra és -készítményekre, ami bizonyos korlátokkal jár. Ezért nagy jelentőséggel bír egy gyors, tudományos és hatékony értékelési módszer kidolgozása. Ez a tanulmány HPLC-t használt a piócák jellemző spektrumának és tartalom meghatározási módszerének megállapítására. Ez a módszer átfogóan értékeli a piócákat és a belőlük készült vegyes termékeket, tudományos alapot biztosítva a piócák és a belőlük készült vegyes termékek minőségének értékeléséhez.

A kromatográfiás feltételek optimalizálása. A jellegzetes spektrum megállapítása alapján ebben a tanulmányban ugyanezt a módszert alkalmaztuk a póréhagyma két jellegzetes komponensének, a póréhagyma C karboxilszármazékának és a póréhagyma B aminjának tartalmának meghatározására. 200-400 nm hullámhossz-tartományban diódasoros detektort használtunk a vizsgálati oldat teljes hullámhosszú letapogatására. Az eredmények azt mutatták, hogy az egyes fő komponensek kromatográfiás csúcsai erős UV-abszorpciót mutattak 254 nm hullámhosszon. Ezért ugyanazokat a feltételeket alkalmaztuk a piócaminták jellemző spektrumának és tartalmának elemzésére.
A funkciótérképek eredményeinek elemzése. A pióca a piócák családjába tartozó állat, a Whitmania pigra Whitman pióca szárított egész teste. Gyógyászati tulajdonságai lapos orsó alakúak. A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása csak a nedvességtartalom, az összes hamutartalom, a savassági és lúgossági vizsgálatok és az antitrombinaktivitás révén ellenőrzi a minőségét, és még nem végzett differenciált jellemzést a különböző szubsztrátumok között. Ebben a tanulmányban a különböző eredetű hirudo és hamisított anyagainak HPLC-jellemző térképeit állították fel. A referenciaanyagok összehasonlításával megerősítést nyert, hogy a hirudo öt komponenst tartalmaz: uracil, hipoxantin, xantin, hirudin C-karboxilszármazékok, hirudin B. Az irodalmi jelentések szerint a fenti pteridinvegyületek hasonló szerkezetűek a trombocitaaggregáció-ellenes gyógyszerekhez, például a klopidogrélhez, és úgy véljük, hogy ezek a komponensek lehetnek a hirudo aktív összetevői, amelyek trombocitaaggregáció-ellenes szerepet játszanak. A hirudo több jelentett farmakológiai hatása elsősorban véralvadásgátló, antitrombotikus és antiatheroszklerotikus hatású. Ezenkívül vannak daganatellenes, gyulladáscsökkentő, fibrózisellenes és lipidémiás tevékenységek, amelyek azt jelzik, hogy a kiválasztott jellemző csúcsok ebben a tanulmányban kapcsolódnak A piócák farmakológiai tevékenységet játszó funkcionális anyagainak tisztázása és a gyógyszerek másodlagos kutatásának és fejlesztésének elősegítése nagy jelentőséggel bír. Ugyanakkor a megállapított módszerrel azonosítani lehet a különböző primitív piócákat és azok vegyes termékeit. A következő lépés a módszer alkalmazási kutatásának folytatása a kivonatokban és készítményekben, referenciát biztosítva a piócás gyógyászati anyagok fejlesztéséhez és felhasználásához.
A tartalmi meghatározás eredményeinek elemzése. A jellegzetes térképek tanulmányozása alapján ez a tanulmány kvantitatív módon öt komponenst határozott meg a piócákban, köztük három nukleozidvegyületet, uracilt, hipoxantint, és két szfenoidvegyületet, a piócamin C-karboxilszármazékokat és a piócamin B-t. A meglévő irodalmi jelentések szerint a nukleozidvegyületek és a szfenoidvegyületek a piócák minőségértékelési mutatóiként használhatók. A kísérleti eredmények azt mutatták, hogy az uracil és hipoxantin tartalomban bizonyos különbségek mutatkoztak a különböző primitív piócák és keverékeik között. Az uracil és hipoxantin átlagos tartalma a következő sorrendben alakult: pióca>pióca>fűzpióca>filippi pióca; A xantin átlagos tartalma a következő: Pióca>pióca>filippinai pióca>fűzlevelű pióca; A pióca-amin C-karboxil-származékainak átlagos tartalma a következő: levélpióca>pióca>pióca>pióca>filippinai pióca; A pióca-amin B átlagos tartalma a következő: levélpióca>pióca>pióca>pióca>filippinai pióca. A Fülöp-szigeteki pióca nem tartalmaz pióca-amin B-t, és a hipoxantin-tartalom lényegesen alacsonyabb, mint a másik három szubsztrát esetében. Ezért a fenti komponensek tartalmának meghatározása alkalmas a vízi piócák (beleértve a piócát, a piócát és a levélpiócát) és az orvosi piócák (Fülöp-szigeteki pióca) megkülönböztetésére; Ezenkívül a PLS-DA elemzés a mintában lévő 8 jellegzetes csúcs területét használja változóként, és a jellegzetes csúcsok területe szorosan összefügg a megfelelő indikátor komponensek tartalmával. A "2.4.5." pontban szereplő PLS-DA analízis eredményeivel kombinálva a hipoxantinhoz és a xantinhoz tartozó jellemző csúcsok VIP értékei nagyobbak, mint 1, és a fűzfalevél pióca nem tartalmaz xantint. A másik három primitív xantin átlagos tartalma szintén jelentős különbségeket mutat, ami tovább jelzi, hogy az öt komponens tartalommeghatározási indikátorként való kiválasztása bizonyos tudományos érvényességgel bír.
A kutatóintézetünk által kidolgozott módszer pontos, érzékeny és jó specificitású. Egyidejűleg képes a jellegzetes spektrumok elemzésére és a pióca gyógyászati anyagok tartalmának értékelésére. Minőségértékelési módszerként használható különböző primitív piócák és keverékeik esetében, referenciát biztosítva a piócás gyógyászati anyagok minőségértékeléséhez.