Turunçgil Flavonoidlerinin Tripsin Aktivitesi Üzerindeki İnhibisyonu ve Mekanizması Üzerine Ön Çalışma
Narenciye kabuğu kalıntısı, narenciye işlemenin ana yan ürünüdür ve toplam meyvenin yaklaşık 30-50%'sini oluşturur ve genellikle yem yapmak için kullanılır veya doğrudan atılır. Deri kalıntısı, diyet lifi ve flavonoidler gibi fonksiyonel bileşenler açısından zengindir ve geliştirilmesi ve kullanılması, işletme verimliliğini artırmak ve çevreyi korumak için faydalıdır.
Tripsin, hem insanlarda hem de hayvanlarda diğer sindirim enzimlerini aktive edebilen ve metabolik süreçte çok önemli bir rol oynayan önemli bir sindirim enzimidir. Bu arada, çeşitli hastalıkların (pankreatit, amfizem, serebral ödem, kanser vb.) ortaya çıkması aşırı tripsin salgılanmasıyla ilgilidir ve tripsin inhibitörü ilaçlar klinik uygulamada tedavi için sıklıkla kullanılmaktadır.
Araştırmalar, bazı bitki polifenolik bileşiklerinin tripsin üzerinde belirli inhibitör etkiler sergilediğini göstermiştir; örneğin mor tatlı patates antosiyaninleri tripsinin katalitik aktivitesi üzerinde önemli bir inhibitör etki göstererek tripsinin içsel floresansının statik olarak söndürülmesine ve ikisi arasında hidrojen bağı ve van der Waals kuvvetleri yoluyla etkileşime neden olur; Quercetin, rutin, hesperetin, rutin ve quercetin'in hepsi değişen derecelerde tripsin inhibisyonuna sahiptir; Kar Krizantemindeki bir flavonoid bileşik, tripsin aktivitesini inhibe edebilir ve farelerde alkolik akut pankreatitin hasarını hafifletebilir. Sağlık ürünlerinde yaygın bir fonksiyonel bileşen olarak, turunçgil flavonoid ekstraktının tripsin aktivitesi üzerindeki etkisi hala belirsizdir. Bu çalışmada, turunçgil flavonoidlerinin tripsin aktivitesi ve inhibisyon türleri üzerindeki etkisini araştırmak için substrat olarak Na benzoil DL arginin p-nitroamid hidroklorür (BAPNA) kullanılmıştır. Turunçgil flavonoidleri ve tripsin arasındaki etki mekanizması, turunçgil flavonoidli özel diyet gıdaları ve sağlıklı gıdaların geliştirilmesi ve kullanımı için referans sağlamak amacıyla floresan spektroskopisi ile de incelenmiştir.

Bu deneyin sonuçları, turunçgil flavonoidlerinin tripsin aktivitesi üzerinde inhibitör bir etkiye sahip olduğunu ve flavonoid konsantrasyonu ne kadar yüksekse, inhibitör etkinin o kadar güçlü olduğunu göstermektedir; 37 ℃'de, 0.66mg/ml flavonoidlerin 0.5mg/ml tripsin üzerindeki inhibisyon oranı 29.9% idi. Turunçgil flavonoidleri tarafından tripsinin inhibisyonu geri dönüşümlüdür ve rekabetçi inhibisyonun baskın olduğu rekabetçi inhibisyon ve rekabetçi olmayan inhibisyondan oluşan karışık bir inhibisyon tipine aittir.

Floresan spektroskopisi genellikle küçük moleküller ve proteinler arasındaki etkileşimleri incelemek için kullanılır. Bu deney, narenciye flavonoidlerinin (naringin) tripsinin floresan spektrum yoğunluğunu zayıflatabildiğini, floresan pikinde kırmızıya kaymaya neden olduğunu ve statik söndürme sergilediğini buldu. Bağlanma sabitleri ve bağlanma bölgelerinin analizi, naringinin tripsin ile bir bağlanma bölgesine sahip olduğunu ve ana bağlanma kuvvetlerinin hidrojen bağı ve van der Waals kuvvetleri olduğunu ortaya koydu. Deneyde ayrıca, naringin ve tripsin arasındaki bağlanma sabiti Ka'nın artan sıcaklıkla azaldığı, 20 ℃'de (293K) 1.10x106L/mol ve 35 ℃'de (308K) 1.04x105L/mol olduğu ve düşük sıcaklıklarda daha güçlü bağlanmaya işaret ettiği bulunmuştur. Bu, narenciye flavonoidlerinin farklı sıcaklıklarda tripsin üzerindeki inhibisyon oranıyla tutarlıdır: narenciye flavonoidlerinin tripsin üzerindeki inhibisyon oranı 27 ℃'de 0,66 mh/ml'de 50,7% idi, 37 ℃'de 29,9% ve 47%'de 18,0%'den daha yüksekti.

Bu çalışma, turunçgil flavonoidlerinin tripsin üzerindeki inhibitör etkisini, türlerini ve bağlanma mekanizmalarını ortaya koymaktadır; bu da hastalıkların oluşumunu yavaşlatmak ve tedaviye yardımcı olmak için aşırı tripsin salgılanmasıyla ilgili özel diyet ve sağlıklı gıdaların geliştirilmesinde referans olarak kullanılabilir.