Taze Rehmannia glutinosa'dan elde edilen oligosakkaritlerin saflaştırılması, fizikokimyasal özellikleri ve antioksidan aktivitesi
Rehmannia glutinosa Libosch., Scrophulariaceae familyasında ve Rehmannia cinsinde bir bitki olan Rehmannia glutinosa Libosch'un kök yumrusudur. Yaygın olarak kullanılan geleneksel bir Çin ilacıdır ve genellikle üç şekilde (taze Rehmannia, çiğ Rehmannia ve pişmiş Rehmannia) kullanılır. Rehmannia glutinosa'nın taze köküne taze Rehmannia glutinosa denir. Taze Rehmannia glutinosa soğuk bir yapıya, tatlı ve acı bir tada sahiptir ve kan şekerini düşürücü, karaciğer ve böbrekleri besleyici etkilere sahiptir. Özel etkileri tıp tarihinde tartışılmış ve klinik olarak kanıtlanmıştır. Taze Rehmannia glutinosa, Henan halk kültüründe soğuk yemekler ve kızarmış yemekler gibi taze olarak yenme geleneğine sahiptir. Rehmannia glutinosa'daki şeker bileşikleri toplam alanın büyük bir bölümünü kaplar ve oligosakkaritleri, glikozitler ve polisakkaritlerden sonra keşfedilen bir başka aktif bileşen türüdür. Rehmannia glutinosa oligosakkaritlerinin kan canlandırıcı ve kan şekerini düşürücü gibi farmakolojik aktivitelere sahip olduğu ve Rehmannia glutinosa'nın etkili bileşenleri olduğu bilinmektedir. Depolama ve taşımadaki zorluk nedeniyle, taze Rehmannia glutinosa'nın geliştirilmesi ve uygulanması belirli bir ölçüde sınırlıdır. Şu anda, araştırmalar çoğunlukla çiğ ve pişmiş Rehmannia glutinosa üzerine odaklanmıştır ve taze Rehmannia glutinosa sistemi üzerine nispeten az araştırma vardır. Jia ve arkadaşlarının araştırma sonuçları, taze Rehmannia glutinosa'daki rafinoz içeriğinin 26.45% olduğunu, bunun çiğ Rehmannia glutinosa (9.16%) ve pişmiş Rehmannia glutinosa'dan (5.98%) önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ve potansiyel araştırma değerine sahip olduğunu göstermektedir. Bu deneyde, hem ultrason hem de sıcak su yöntemleri kullanılarak oligosakkarit hazırlamak için hammadde olarak taze dondurularak kurutulmuş tabletler kullanılmıştır. Daha fazla saflaştırmadan sonra, iki grup oligosakkarit parçası (GRCP ve GRSP) elde edilmiş ve bunların fizikokimyasal özellikleri ve antioksidan kapasiteleri sistematik ve kapsamlı bir şekilde analiz edilmiştir. Amaç, taze Rehmannia glutinosa'nın geliştirilmesi ve kullanımı için teorik temel sağlamaktır.

Taze Rehmannia glutinosa dondurularak kurutulmuş tabletleri hammadde olarak kullanarak, içerdikleri oligosakkaritler ultrason ve sıcak su yöntemleri kullanılarak ekstrakte edilmiş ve saflaştırılmıştır, sonuçta GRCP ve GRSP olmak üzere iki parça seti elde edilmiştir. İkisinin karbonhidrat içeriği sırasıyla 901.39 ve 948.06mg/g'dır. Her ikisi de düşük safsızlığa ve yüksek saflığa sahiptir, bu da başarılı bir saflaştırmaya işaret eder, bu da ekstrakte edilen şekerlerdeki rafinoz oranının 26.45% olduğu yönündeki önceki sonuçtan çok daha yüksektir. Bu deney, taze Rehmannia glutinosa'daki rafinozun ekstraksiyonu, saflaştırılması ve fizikokimyasal özelliklerini kapsamlı bir şekilde incelemiştir. Sonuçlar, GRCP ve GRSP'deki ana fonksiyonel grupların aynı olduğunu ve ana bileşenlerin başta rafinoz olmak üzere oligosakkaritler olduğunu göstermiştir. Termal analiz, yapılarının sırasıyla 205.5 ve 209.0 ℃ altında nispeten kararlı olduğunu göstermiştir. İki parçanın monosakkarit bileşimi aynıdır, ancak oranları farklıdır. SEM gözlemi, görünümlerinin ve morfolojilerinin belirli farklılıklara sahip olduğunu göstermektedir, bu da farklı ekstraksiyon yöntemlerinin oligosakkaritlerin yapısı üzerinde belirli bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Aktivite testi sonuçları, her iki grup parçanın da belirli antioksidan aktiviteye sahip olduğunu göstermektedir. Kütle spektrometresi sonuçları da GRCP ve GRSP'nin ana bileşeninin 2 molekül alfa galaktoz, 1 molekül alfa glukoz ve 1 molekül beta fruktozdan oluşan fonksiyonel bir oligosakkarit olan stakioz olduğunu göstermektedir. Bağırsak mikrobiyota dengesini ve bağışıklığı düzenleyici etkileri vardır ve mükemmel bir fonksiyonel gıda bileşenidir. Oligosakkaritler, 2-10 monosakkaritin glikozidik bağlarla bağlanmasıyla oluşan oligosakkaritlerdir. Oligosakkaritlerin ekstraksiyonu için yaygın olarak kullanılan yöntem, polisakkaritleri uzaklaştırmak ve daha fazla saflaştırma için faydalı olan girişimlerini azaltmak için hacimce 80% etanol ile çökeltmeyi içeren su ekstraksiyonu ve alkol çökeltmesidir. Wu, taze Rehmannia oligosakkaritlerini çıkarmak için 75% etanol kullanmış ve sonraki ekstraksiyon için süpernatantı almıştır. Bu arada, yaklaşık 80% hacim fraksiyonuna sahip etanol, polisakkaritleri elde etmek için genellikle çökeltme için kullanılır. Wang ve arkadaşlarının bulduğu gibi, Pleurotus ostreatus'tan polisakkaritler elde etmek için sırasıyla 30%, 60% ve 80% hacim fraksiyonlarında etanol ile çökeltme yoluyla farklı moleküler ağırlıklarda polisakkaritler elde edilebilir. Yang ve arkadaşları polisakkaritleri çökeltmek için 80% etanol kullanmış ve bunları saflaştırarak sırasıyla Botrytis cinerea ve hünnaptan polisakkaritler elde etmiştir. Ye ve arkadaşları Hedyotis diffusa'nın polisakkaritlerini ekstraksiyon çözeltisinin 90% etanol ile çökeltilmesinden elde etmiştir. Bu deneyde, alkol çökeltmesi için susuz etanole (nihai konsantrasyonu 80% olan) ekstraksiyon çözeltisinin hacminin dört katı eklenmiştir. Çökelti daha sonra saflaştırıldı ve nihai saflaştırılmış ürünün ana bileşeni rafinozdu, bu da etanol çökeltisinin 80%'sinde oligosakkaritlerin bulunduğunu ve bunların hepsinin polisakkarit olmadığını gösteriyordu. Bu sonucun nedeni, stakiyozun 80% etanol tarafından kapsüllenmesi ve yoğun bir şekilde çökeltilmesi veya stakiyozun 80% etanolde sınırlı çözünürlüğe sahip olması ve kısmen çökelebilmesi olabilir. Bununla birlikte, spesifik nedenler hala daha fazla araştırmaya ihtiyaç duymaktadır. Ön deneyde, alkol çökeltisi 3500Da diyaliz torbası kullanılarak diyalize edilmiş ve 3500Da diyaliz torbasındaki şeker maddelerinin veriminin sadece 0,61% olduğu bulunmuştur, bu da alkol çökeltisindeki maddelerin çoğunun küçük moleküler ağırlıklara sahip olduğunu göstermektedir. Bu nedenle daha sonraki aşamada, saflaştırılmış maddeyi diğer küçük moleküllü maddelerden ve safsızlıklardan ayırmak için 500~1000Da diyaliz torbası kullanılır, bu da numune saflığını artırmak için basit ve etkili bir yöntemdir. Bu çalışma, sistematik araştırma ve taze Rehmannia oligosakkaritlerinin, özellikle de rafinoz kaynaklarının daha rasyonel bir şekilde geliştirilmesi ve kullanılması için teorik bir temel sağlamaktadır.