İnsan osteosarkom hücresi MG63'te kemik fragman yamasının UPLC parmak izi ile alkalin fosfataz aktivitesi arasındaki spektral etki ilişkisi üzerine çalışma
Gu Duan Bu, bir su ejderi ortopedik bitkisi olan Drynaria fortunei (Kunze) J. Sm.'nin kurutulmuş rizomudur. Doğası gereği sıcak, tadı acıdır ve karaciğer ve böbrek meridyenlerine aittir. İyileştirici ve ağrı giderici, böbrekleri güçlendirici ve kemikleri güçlendirici, rüzgâr ve lekeleri giderici etkilere sahiptir. Modern farmakolojik ve klinik çalışmalar, kemik parçası toniklerinin osteoporozu önleme, kırık iyileşmesini destekleme, böbrekleri koruma, anti-enflamatuar ve diş büyümesini destekleme gibi etkilere sahip olduğunu göstermiştir. Kimyasal bileşim çalışmaları, kemik kırığı toniklerindeki ana aktif bileşenlerin flavonoidler, triterpenoidler, fenilpropanoidler ve fenoller olduğunu göstermiştir. Çok sayıda çalışma, kemik iliği toniklerinin kemikle ilgili hastalıkların tedavisinde önemli terapötik etkilere sahip olduğunu ve in vitro deneyler kemik iliği toniklerinin osteoblastların osteojenik farklılaşma yeteneğini destekleyebileceğini göstermiştir. Bununla birlikte, kemik iliği toniklerindeki spesifik aktif bileşenler hakkında herhangi bir rapor bulunmamaktadır. Alkalin fosfataz (ALP), osteoblastların farklılaşması ve olgunlaşması için bir biyobelirteçtir ve ALP aktivite seviyelerindeki değişiklikler osteoblastların farklılaşma yeteneğini belirlemek için kullanılabilir. Bu nedenle, bu deneyde UPLC parmak izi ile insan osteosarkom MG63 hücrelerinin ALP aktivite spektrumu arasındaki ilişki analiz edilmiş ve osteoblastlar için kullanılan kemik parçası toniklerinin ana bileşenleri araştırılmıştır.
Geleneksel Çin tıbbı spektrum etkinliğinin değerlendirme modu, kimyasal bileşen parmak izini farmakolojik etkileriyle birleştirmektir, böylece parmak izindeki kimyasal bileşenler karşılık gelen farmakolojik etkileri yansıtır ve parmak izinin karakteristik zirveleri ile farmakolojik etkiler arasındaki ilişkiyi netleştirir, karşılık gelen farmakolojik madde temelini belirler ve böylece geleneksel Çin tıbbının kalite kontrolünü ve farmakolojik değerlendirmesini gerçekleştirir.
Bu çalışma, ham ve sıcak kemik parçası takviyelerinin UPLC parmak izi spektrumlarını oluşturmuş ve UPLC-Q-TOF-MS teknolojisini kullanarak kimyasal bileşenlerini tanımlamıştır. Gri korelasyon analizi, iki değişkenli korelasyon analizi ve kısmi en küçük kareler yöntemi, kemik parçası takviyelerinin parmak izi spektrumlarını ve ALP aktivitesinin spektral etki ilişkisini oluşturmak için kullanıldı ve kemik parçası takviyelerinin farmakolojik madde temelini ve kalite kontrolünü aydınlatmak için bir referans sağladı.

Bu çalışmada, kemik parçası takviyeleri ve sıcak ürünlerin parmak izi spektrumlarını oluşturmak için çoklu dalga boyu tespiti ile birleştirilmiş UPLC yöntemi kullanılmıştır. Kemik parçası takviyeleri ve sıcak ürünlerin farklı partileri arasında 12 ortak pik vardı ve benzerlik 0,9'dan büyüktü, bu da ikisi arasında yüksek benzerlik ve belirsiz farklılaşma olduğunu gösteriyordu. ALP, osteoblast farklılaşması ve olgunlaşmasının bir biyobelirtecidir ve kemik oluşumunun biyokimyasal göstergelerinden biridir. Osteoblastların farklılaşma yeteneği ALP aktivite seviyelerindeki değişikliklerle belirlenebilir. Önceki çalışmalar kemik parçası takviyesinin osteoblast farklılaşmasını destekleyebileceğini göstermiştir. Bu çalışmada, kemik parçası takviyeleri ve haşlamalar, ALP aktivitesi üzerindeki etkilerini analiz etmek için MG63 hücrelerine uygulanmıştır. Sonuçlar, aynı kemik parçası grubunun kum haşlamasından sonra MG63 hücreleri tarafından ALP salgılanmasını önemli ölçüde teşvik edebileceğini göstermektedir. MG63 osteojenik farklılaşmasını teşvik eden kemik parçalanması ve onarımındaki aktif bileşenleri araştırmak için, ALP aktivitesi ile parmak izi spektrumları ile kalibre edilen karakteristik pikler arasında spektral bir korelasyon analizi yapılmıştır. Kemik parçası yama parmak izi spektrumunun karakteristik pikleri ile ALP aktivitesi arasındaki spektral etki ilişkisini kapsamlı bir şekilde analiz etmek için bu deneyde üç yöntem kullanılmıştır: gri korelasyon analizi, iki değişkenli korelasyon analizi ve en küçük kareler regresyon analizi. Pik 4, pik 5 ve pik 12'nin ALP aktivitesi ile yüksek korelasyona sahip olduğu ve pozitif ilişkili olduğu, ALP aktivitesine en fazla katkıda bulunduğu ve ALP aktivitesini etkileyen önemli değişkenler olduğu bulunmuştur.
UPLC-Q-TOF/MS teknolojisi, kemik parçalarının kimyasal bileşenlerini daha kapsamlı ve hızlı bir şekilde tanımlayabilen güçlü seçicilik, yüksek hassasiyet, basit numune ön işlemi, yüksek doğruluk ve yüksek çözünürlük özelliklerine sahiptir. Bu çalışmada, kemik parçası toniklerindeki 40 bileşeni tanımlamak için negatif iyon modunda UPLC-Q-TOF/MS kullanılmıştır. ALP aktivitesine önemli ölçüde katkıda bulunan tanımlanmış bileşen pik 4 kafeik asit-4-O - β - D-glukopiranozit; Pik 5 kateşinler 7-glukozit; Pik 12 naringin ve aktivitesi doğrulanmıştır. Naringin flavonoid bir bileşiktir ve modern farmakolojik araştırmalar naringinin osteoporoz, antioksidan, anti-tümör ve miyokardiyal hasarın iyileştirilmesi gibi çeşitli hastalıkları tedavi etmek veya önlemek için kullanılabileceğini göstermiştir. Mevcut araştırmalar ayrıca naringinin kemik parçası toniklerinde önemli bir aktif bileşen olduğunu göstermektedir. Kafeik asit-4-O - β - D-glukopiranosid ve kateşin 7-glukosidin farmakolojik aktiviteleri henüz rapor edilmemiştir ve daha fazla araştırma yapılması gerekmektedir. Bu çalışmanın sonuçları, kemik parçası toniklerinin kalite kontrolü ve farmakolojik araştırmaları için belirli referans önemine sahiptir.