Farklı İlkel Sülüklerin ve Karışık Ürünlerinin Kalitesi Üzerine Çalışma
Bundan böyle Çin Farmakopesi olarak anılacak olan Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'nin 2020 baskısı, sülüklerin Whitman pigra Whitman sülüğü, Hirudo nipponica Whitman sülüğü veya söğüt yaprağı sülüğü Whitman acranulata Whitman gibi sülük ailesi hayvanlarının kurutulmuş bütünü olduğunu belirtmektedir. Tadı tuzlu, acı ve düzdür; karaciğer meridyenine ait küçük bir toksin vardır. Kanı kırma ve dolaşımı teşvik etme, kan stazını giderme ve durgunluğu ortadan kaldırma işlevine sahiptir. Genellikle kan stazı ve meridyen tıkanıklığı, kitlelerin tedavisi, inme hemiplejisi ve düşme ve yaralanmalar için kullanılır. Çalışmalar, sülüklerin farmakolojik etkilerinin esas olarak antikoagülasyon, antitrombotik, anti-tümör, hipolipidemik ve anti-inflamatuar etkileri içerdiğini ve tromboz, hiperlipidemi, hipertansiyon, diyabet, prostatit, kanser, varisli damarlar, kısırlık, siroz ve diğer hastalıkların tedavisi dahil olmak üzere çok geniş klinik uygulamalara sahip olduğunu göstermiştir. Sülüklerin ana bileşenleri, esas olarak proteinler ve insan vücudu için 8 temel amino asit dahil olmak üzere 17 tip amino asit içeren makromoleküler bileşiklerdir. Hidrolize amino asit içeriği 49.4% kadar yüksektir; ayrıca hirudin, heparin, histamin, hirudin, glikolipidler, sfenoidler, steroidler ve karboksilik esterler gibi çeşitli maddeler de içerir.
Literatür taraması sonucunda, sülükler üzerine yapılan mevcut araştırmaların antikoagülan mekanizmalar ve amino asit tayini üzerine odaklandığı, farklı ilkel sülüklerin ve karışımlarının kalitesi üzerine kapsamlı çalışmaların sınırlı olduğu tespit edilmiştir. Farklı ilkel sülükler ve karışımları arasındaki tanımlama çalışmaları çoğunlukla Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı kapsamındaki özellik tanımlamasına dayanmaktadır. Sülük pazarı pahalı ve kaotiktir ve geleneksel görünüm tanımlaması tek başına kalitelerini hızlı ve etkili bir şekilde değerlendiremez. Dahası, görünüm tanımlaması, belirli sınırlamaları olan sülük özlerine ve preparatlarına uygulanamaz. Bu nedenle, hızlı, bilimsel ve etkili bir değerlendirme yönteminin oluşturulması büyük önem taşımaktadır. Bu çalışmada, sülüklerin karakteristik spektrumunu ve içerik belirleme yöntemini oluşturmak için HPLC kullanılmıştır. Bu yöntem, sülükleri ve karışık ürünlerini kapsamlı bir şekilde değerlendirerek, sülüklerin ve karışık ürünlerinin kalite değerlendirmesi için bilimsel bir temel sağlar.

Kromatografik koşulların optimizasyonu. Karakteristik bir spektrum oluşturma temelinde, bu çalışmada sülüğün iki karakteristik bileşeni olan sülük amin C karboksil türevi ve sülük amin B'nin içeriğini belirlemek için aynı yöntem kullanılmıştır. 200-400nm dalga boyu aralığında test çözeltisinin tam dalga boyu taramasını gerçekleştirmek için bir diyot dizi dedektörü kullanılmıştır. Sonuçlar, her bir ana bileşenin kromatografik piklerinin 254nm dalga boyunda güçlü UV absorpsiyonuna sahip olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, sülük örneklerinin karakteristik spektrumunu ve içeriğini analiz etmek için aynı koşullar kullanılmıştır.
Özellik haritası sonuçlarının analizi. Sülük, sülükgiller familyasından bir hayvan olan Whitmania pigra Whitman sülüğünün kurutulmuş bütün gövdesidir. Tıbbi özellikleri düz iğ şeklindedir. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı kalitesini yalnızca nem, toplam kül içeriği, asitlik ve alkalinite testleri ve antitrombin aktivitesi ile kontrol etmektedir ve henüz farklı substratlar arasında ayırıcı karakterizasyon yapmamıştır. Bu çalışmada, farklı kökenlere sahip hirudo ve tağşişlerinin HPLC karakteristik haritaları oluşturulmuştur. Referans maddelerin karşılaştırılmasıyla hirudo'nun beş bileşen içerdiği doğrulanmıştır: urasil, hipoksantin, ksantin, hirudin C-karboksil türevleri, hirudin B. Literatür raporlarına göre, yukarıdaki pteridin bileşikleri klopidogrel gibi antiplatelet agregasyon ilaçlarıyla benzer yapılara sahiptir ve bu bileşenlerin antiplatelet agregasyonunu oynamak için hirudo'nun aktif bileşenleri olabileceğine inanılmaktadır. Hirudo'nun bildirilen farmakolojik etkileri daha çok antikoagülan, antitrombotik ve antiaterosklerotik etkilerdir. Buna ek olarak, anti-tümör, anti inflamatuar, anti fibrozis ve lipidemik aktiviteler vardır, bu da bu çalışmada seçilen karakteristik zirvelerin Farmakolojik aktiviteleri oynayan sülüklerin fonksiyonel maddelerini açıklığa kavuşturmak ve ilaçların ikincil araştırma ve geliştirmesini teşvik etmek büyük önem taşımaktadır. Aynı zamanda, oluşturulan yöntem farklı ilkel sülükleri ve bunların karışık ürünlerini tanımlayabilir. Bir sonraki adım, bu yöntemin ekstrakt ve preparatlarda uygulama araştırmasına devam etmek ve sülük tıbbi malzemelerinin geliştirilmesi ve kullanımı için referans sağlamaktır.
İçerik belirleme sonuçlarının analizi. Karakteristik haritaların incelenmesine dayanan bu çalışma, sülüklerde üç nükleozit bileşiği, urasil, hipoksantin ve iki sfenoid bileşiği, leechamine C-karboksil türevleri ve leechamine B dahil olmak üzere beş bileşeni kantitatif olarak belirlemiştir. Mevcut literatür raporlarına göre, nükleozit bileşikleri ve sfenoid bileşikleri sülükler için kalite değerlendirme göstergeleri olarak kullanılabilir. Deneysel sonuçlar, farklı ilkel sülükler ve bunların karışımları arasında urasil ve hipoksantin içeriğinde belirli farklılıklar olduğunu göstermiştir. Ortalama urasil ve hipoksantin içeriği şu sıradaydı: sülük>sülük>söğüt sülüğü>Philippine sülüğü; Ortalama ksantin içeriği aşağıdaki gibidir: sülük>sülük>Filipin sülüğü>söğüt yaprağı sülüğü; Sülük amininin C-karboksil türevlerinin ortalama içeriği şu şekildedir: yaprak sülüğü>sülük>sülük>Filipin sülüğü; Sülükamin B'nin ortalama içeriği şu şekildedir: yaprak sülüğü>sülük>sülük>Filipin sülüğü. Filipin sülüğü sülükamin B içermez ve hipoksantin içeriği diğer üç substrattan önemli ölçüde daha düşüktür. Bu nedenle, yukarıdaki bileşenlerin içeriğinin belirlenmesi, su sülükleri (sülükler, sülükler ve yaprak sülükleri dahil) ve tıbbi sülükler (Filipin sülükleri) arasında ayrım yapmak için kullanılabilir; Ayrıca PLS-DA analizi, numunedeki 8 karakteristik pikin pik alanlarını değişken olarak kullanır ve karakteristik piklerin pik alanları, karşılık gelen gösterge bileşenlerinin içeriği ile yakından ilişkilidir. "2.4.5 "teki PLS-DA analiz sonuçları ile birleştirildiğinde, hipoksantin ve ksantine karşılık gelen karakteristik piklerin VIP değerleri 1'den büyüktür ve söğüt yaprağı sülüğü ksantin içermez. Diğer üç ilkel ksantinin ortalama içeriği de önemli farklılıklar göstermekte, bu da bu beş bileşenin içerik belirleme göstergeleri olarak seçilmesinin belirli bir bilimsel geçerliliğe sahip olduğunu göstermektedir.
Araştırma enstitümüz tarafından oluşturulan yöntem doğru, hassas ve iyi bir özgüllüğe sahiptir. Karakteristik spektrumları eş zamanlı olarak analiz edebilir ve sülük tıbbi malzemelerinin içeriğini değerlendirebilir. Farklı ilkel sülükler ve bunların karışımları için bir kalite değerlendirme yöntemi olarak kullanılabilir ve sülük tıbbi malzemelerinin kalite değerlendirmesi için bir referans sağlar.