Farklı Üreticilerin Kaplumbağa Kabuğu Yapıştırıcılarındaki Amino Asit İçeriğindeki Farklılıkların ve Anti Osteoporozun Potansiyel Mekanizmalarının Ağ Farmakolojisi ile Birleştirilmiş UHPLC-QTRAP-MS/MS'ye Dayalı Olarak Araştırılması
Testudinis Carapacis et Plasti Colla (TCPC), kaplumbağa ailesinden Chinemys reevesii (Gray) adlı hayvanın kaplumbağa kabuğunun suda kaynatılıp konsantre edilmesiyle elde edilen katı bir jel olan geleneksel bir Çin besleyici ilacıdır. İlk olarak "Compendium of Materia Medica "da kaydedilmiştir. Serin bir doğası, tuzlu ve tatlı bir tadı vardır ve karaciğer, böbrek ve kalp meridyenleri için uygundur. Klinik uygulamada osteoporoz tedavisinde yaygın olarak kullanılır. Guilu Erxian serisi formülü, Zuogui Wan, Huqian Wan, vb. gibi esas olarak kaplumbağa kabuğu tutkalından oluşan klasik formüller, özü beslemede, iliği doldurmada, tendonları ve kemikleri güçlendirmede önemli etkilere sahiptir. Kaplumbağa kabuğu tutkalı kolajen, keratin ve serbest amino asitler bakımından zengindir. Protein hidrolizinden elde edilen amino asitler, kaplumbağa kabuğu tutkalındaki ana aktif bileşenlerdir ve sonuçta insan vücudu tarafından emilir ve kullanılır. Geleneksel Çin tıbbı teşhis ve tedavisinde osteoporoz çoğunlukla "kemik tıkanıklığı", "kemik nekrozu" ve "kemik fistülü" olarak sınıflandırılır. "Acil Bakım için Temel Reçeteler" şunları belirtmektedir: "Aşırı kemik rahatsızlığı olanlar... el ve ayaklarında ağrı, uzun süre ayakta duramama, eğilme ve esnemede zorluk yaşayabilir, bu da vücut tıkanıklığına, beyin ve omurilik işlev bozukluğuna yol açabilir. Böbrek öz depolar ve kemik iliği üretimini kontrol eder. Yetersiz olması durumunda ilik azalır ve kemik körelir. Kemik iliği kaybı kemik kırılganlığının artmasına ve osteoporoza yol açacaktır. Modern araştırmalar, kaplumbağa kabuğu tutkalı ve klasik formüllerinin kemik sağlığı, bağışıklık geliştirme, anti-tümör ve diğer yönlerden iyi aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir. Kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısındaki glisin ve prolin, menopoz sonrası osteoporozun teşhisi için potansiyel biyobelirteçler olarak hizmet edebilir. Amino asitlerin kendileri de sinyal molekülleridir ve kalsiyum iyonları ile kalsiyuma duyarlı reseptörleri sinerjik olarak aktive edebilir, kemik yoğunluğunu artırabilir, osteoblast farklılaşmasını teşvik edebilir ve kemik kalsifikasyonunu geliştirebilir. Farklı üreticilerin kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısının amino asit içeriğindeki farklılıkları araştırmak için bu çalışmada 4 farklı üreticiden 15 parti kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısı örneği seçilmiştir. Kaplumbağa kabuğu tutkalının asit hidrolizinden sonra 17 amino asidi belirlemek için sıvı kromatografi-kütle spektrometresi kullanılmıştır. Farklı üreticilerin kaplumbağa kabuğu tutkalındaki hidrolize amino asit bileşenlerinin kompozisyon farklılıklarını karşılaştırmak için çok değişkenli istatistikler kullanıldı ve kaplumbağa kabuğu tutkalının kalite kontrolü için referans sağlandı. Ve kaplumbağa kabuğu tutkalındaki amino asit bileşenlerini analiz etmek için ağ farmakolojisi ile birleştirilerek, osteoporoz karşıtı kaplumbağa kabuğu tutkalının ana aktif bileşenlerini ve hedeflerini daha fazla tahmin etmek için bir temel sağlanmıştır.

Bu makalede çeşitli üreticilerden ve partilerden elde edilen hidrolize kaplumbağa kabuğu tutkalının genel amino asit içeriği farmakope seviyesinden daha düşüktür. Bunun nedeni sadece numunenin kalitesiyle değil, aynı zamanda test yöntemiyle de ilgili olabilir. Hidrolize amino asitlerin karakteristik iyon çiftlerini tespit etmek için yüksek hassasiyet ve özgüllüğe sahip sıvı kromatografi-kütle spektrometresi kullanıyoruz; Farmakopede kullanılan HPLC yöntemi, bileşiklerin karakteristik fonksiyonel gruplarının absorbans sinyallerini tespit ederek benzer yapılara sahip bileşiklerin ayırt edilmesini zorlaştırır. Sıvı kromatografi-kütle spektrometresi (LC-MS) yöntemi daha doğrudur ve spesifik olmayan bileşenlerin girişimini ortadan kaldırabilir, bu nedenle hidrolize amino asitlerin içeriği farmakopedekinden daha düşük olabilir. Ağ farmakolojisinin sonuçları, osteoporoz tedavisinde kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısının temel bileşenlerinin Ala ve Gly olduğunu göstermektedir. Ala, şekerlerin ve organik asitlerin metabolizmasına yardımcı olabilir ve menopoz sonrası osteoporozu iyileştirebilir. Gly, erkeklerde kırık riskiyle doğrudan ilişkilidir ve kolajendeki mutasyonlar osteogenezis imperfekta'ya neden olabilir. Osteoporozun kaplumbağa kabuğu tutkalı ile tedavisi için temel hedefler CAT, NOS1, NOS3, F2 vb. içerir. Katalaz (CAT), oksidatif stresi inhibe ederek farelerde kemik yoğunluğunu ve kemik mineral içeriğini artırabilir; Nöronal nitrik oksit sentaz (NOS1) kemik iyileşmesi ile ilişkilidir ve esas olarak fibröz doku ile kallus arasındaki fibrokartilaj bölgesinde ifade edilir; Endotelyal nitrik oksit sentaz (NOS3) da kemik iyileşmesi ile ilişkilidir ve esas olarak kondrositlerde ve perivasküler hücrelerde ifade edilir; Protrombin, organ kültüründe kemik rezorpsiyonunu uyarabilen osteoblastlarda spesifik bir agonisttir. KEGG ve GO zenginleştirme analizi sonuçları, kaplumbağa kabuğu sakızının kemik hücrelerinde vitamin bağlama, piridoksal fosfat bağlama, organik asit bağlama ve amino asit sentezi metabolizması gibi bir dizi biyolojik fonksiyonda yer alabileceğini göstermektedir; insülin sinyali, kalsiyum sinyali, siklik guanozin monofosfat protein kinaz G (cGMP PKG) sinyali, karbon metabolizması ve amino asit sentezi gibi sinyal yollarını etkileyerek çalışır. İnsülin sinyal yolu, iskelet kaslarını vücudun glikozunun 80%'sini alması için uyarabilir; cGMP PKG sinyal yolu kemik oluşumunu düzenleyebilir ve osteoblast mineralizasyonunu ve olgunlaşmasını teşvik ederek osteogenezin çift yönlü ve karmaşık düzenlemesini sergileyebilir.
Özetle, bu makalede UHPLC-QTRAP-MS/MS çok değişkenli istatistiksel analiz ile birlikte kullanılarak dört üretici arasında A üreticisinin kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısının istikrarlı kalitesine ve yüksek hidrolize amino asit içeriğine sahip olduğu; Kaplumbağa kabuğu yapıştırıcısının CAT, NOS1, NOS3, vb. dahil olmak üzere osteoporozun 68 temel hedefini düzenleyebileceği Alanin ve glisin gibi bileşenler aracılığıyla, böylece amino asit sentezi, arginin ve prolin metabolizması ve osteoporoz üzerinde terapötik etkiler uygulamak için karbon metabolizması gibi 212 sinyal yolunu etkiler.