Gouteng'in UHPLC Parmak İzi ve Kimyasal Örüntü Tanıma Araştırması
Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısı Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil Uncaria macrophylla Wall, Uncaria hirsuta Havil Uncaria sinensis (Oliv.) Havil. veya Uncaria sessilifructus Roxb'un kurutulmuş çengelli sap ve dallarını içermektedir. Şu anda ilaç piyasasında dolaşan başlıca tıbbi asmalar Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil'dir. Gouteng, ısıyı temizleme ve karaciğeri sakinleştirme, rüzgarı yatıştırma ve irkilmeyi yatıştırma etkilerine sahiptir. Karaciğer rüzgarı iç hareketi, epileptik nöbetler, ateşli nöbetler, soğuk şoku, pediatrik ağlama, gebelik eklampsisi, baş ağrısı ve baş dönmesi vb. için kullanılabilir. Klinik uygulamada hipertansiyon, aritmi, anksiyete, epilepsi gibi hastalıkları tedavi etmek için yaygın olarak kullanılır. Gouteng, esas olarak alkaloidler, flavonoidler, triterpenoidler vb. dahil olmak üzere çok sayıda kimyasal bileşen içerir. Bunlar arasında alkaloidler, kan basıncını düşürmek için Gouteng'in ana farmakolojik bileşenleri olarak kabul edilir.

Geleneksel Çin tıbbının parmak izi, kimyasal bileşim özellikleri sağlayan kapsamlı ve ölçülebilir bir kromatogramdır. Şifalı bitki Gouteng'e gelince, birçok bilim insanı Gouteng'in parmak izi spektrumu üzerine araştırmalar yapmıştır. Örneğin, Huang ve arkadaşları Uncaria alkaloidleri ve Isocrocea alkaloidlerini indikatör bileşenler olarak kullanarak farklı bölgelerden Uncaria'nın HPLC kromatografik parmak izi spektrumlarını oluştururken, Tan ve arkadaşları farklı bölgelerden Uncaria alkaloidlerinin HPLC parmak izi spektrumlarını oluşturmuştur. Bu çalışmalar Gouteng kalitesinin derinlemesine değerlendirilmesi için faydalı keşifler yapmıştır, ancak Gouteng alkaloidleri ve IsoGouteng alkaloidleri gibi birkaç alkaloid bileşenine odaklanılması ve yalnızca tek bir benzerlik değerlendirmesi kullanılması nedeniyle, parmak izi verilerinin daha derin madenciliği ve araştırması olmadan Gouteng'in iç kalitesini doğru ve kapsamlı bir şekilde yansıtmada hala iyileştirme alanı vardır.

Gouteng tıbbi malzemelerinin kalitesini objektif, kapsamlı ve verimli bir şekilde değerlendirmek amacıyla, bu deneyde UHPLC kullanılarak farklı kaynaklardan elde edilen 30 parti Gouteng'in parmak izi spektrumları oluşturulmuştur. On beş ortak pik "Çin Tıbbı Kromatografik Parmak İzi Benzerlik Değerlendirme Yazılımı" kullanılarak kalibre edilmiştir. Referans standartlarla karşılaştırıldıktan sonra, klorojenik asit, izokaprilik asit, izokaprilik asit, Gouteng alkaloidi, dikiş tohumu metil eteri, dehidrojenlenmiş Gouteng alkaloidi ve Gouteng alkaloidi dahil olmak üzere yedi ortak pik tanımlanmıştır. Parmak izi spektrumlarının benzerlik değerlendirmesine dayanarak, parmak izi verileri kemometrik yöntemlerle birleştirilir ve kemometriye dayalı küme analizi (CA), temel bileşen analizi (PCA) ve ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi (OPLS-DA) gibi çok değişkenli istatistiksel yöntemler, Gouteng kalite farklılıklarının karakteristik bileşiklerini taramak ve tanımlamak ve Gouteng'in etkili kalite kontrolü için referans sağlamak amacıyla Gouteng tıbbi malzemelerinin kalitesini analiz etmek ve değerlendirmek için uygulanır.

Bu çalışmada ekstraksiyon süresi (ultrason 20, 40, 60 dakika), ekstraksiyon çözücüleri (100%, 75%, 50% metanol ve 100%, 75%, 50% etanol), kromatografik kolonlar (ACQUITY UPLC HSS T3, Cortecs UPLC T3, Cortecs UPLC C18 ve ACQUITY UPLC BEH C18) ve farklı mobil faz sistemlerinin (metanol-0.1% formik asit sulu çözeltisi ve asetonitril-0.1% formik asit sulu çözeltisi) kromatografik piklerin sayısı ve ayrılması üzerindeki etkilerini incelemiştir. Son olarak, test numunesi için hazırlama yöntemi olarak 40 dakika süreyle 75% metanol ultrason ekstraksiyonu belirlenmiş ve kromatografik kolon olarak ACQUITY UPLC HSS T3 seçilmiş, asetonitril-0.1% formik asit sulu çözeltisi ile gradyan bir şekilde elüe edilmiştir. Aynı zamanda 254, 274 ve 366 nm gibi farklı tespit dalga boyları incelenmiş ve 254 nm'deki kromatogramda iyi bir ayrımla birçok pik olduğu görülmüştür.

Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısında Gouteng tıbbi malzemelerinin kalite kontrolü, gösterge bileşen olarak izorhynchophylline ile TLC yöntemi kullanılarak kalitatif olarak tanımlanmıştır. Bu yöntemin kullanımı zahmetlidir ve düşük hassasiyete sahiptir, bu da çengelli asmaların kalitesini kapsamlı bir şekilde kontrol etmeyi zorlaştırır. Bu çalışma ilk olarak benzerlik değerlendirmesi için farklı ticari kaynaklardan 30 parti çengel asmanın parmak izi spektrumlarını oluşturmuş ve daha sonra bunlar üzerinde kimyasal örüntü tanıma araştırması yapmıştır. Benzerlik değerlendirme yazılımına göre, sonuçlar 30 parti Gouteng tıbbi malzemesi arasındaki benzerliğin 0,850 ila 0,995 arasında değiştiğini göstermiştir; Parmak izi spektrumunda toplam 15 ortak pik tespit edilmiş ve referans standartlarla karşılaştırılarak 7 kimyasal bileşen tanımlanmıştır, yani klorojenik asit, izofenantrolin, izorhynchophylline, rhynchophylline, selegilin metil eter, dehydrorhynchophylline ve rhynchophylline. Klorojenik asit, antibakteriyel, antiviral, anti-tümör, lipid düşürücü ve kan basıncını düşürücü gibi çok çeşitli farmakolojik etkilere sahiptir; İzokamptotesin, insan lenfositik lösemi T hücreleri üzerinde anti proliferatif etkilere sahiptir; İzorhynchophylline ve rhynchophylline, hipertansiyon tedavisinde rhynchophylline'ın ana aktif bileşenleridir; Cesare metil eter etkili bir 5-HT1A reseptör agonisti ve geleneksel Japon tıbbı Yigan San'ın ana bileşenidir; Dehidrohidroquercetin sinir hücreleri üzerinde nöroprotektif etkinin etkili bir bileşenidir; Uncaria alkaloidi, insan meme kanseri MCF-7 hücrelerinin in vitro canlılığını inhibe edebilen ve DNA hasar tepkisini ve oksidatif stres tepkisini indükleyebilen antikanser etkiye sahiptir. Denetimsiz küme analizi ve temel bileşen analizi, 30 parti numuneyi farklı gruplara ayırmak için kullanılmış ve Gouteng tıbbi malzemelerinin kalitesinin tutarlılığını değerlendirirken diferansiyel değerlendirme yapılmıştır; Ve numune gruplaması üzerinde önemli bir etkiye sahip olan kromatografik zirveleri taramak için ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizini kullanın. Parmak izi benzerlik değerlendirmesi ve örüntü tanıma yöntemlerinin kombinasyonu yoluyla, parti farklılıklarına neden olan ana faktörlerin 1, 3 (klorojenik asit), 7 (izokaprilik asit), 9 ve 12 (selejilin metil eter) olduğunu bulduk. Bu durum, Gouteng tıbbi malzemelerinin kalitesi değerlendirilirken bu farklı bileşenlere özel önem verilmesi gerektiğini göstermektedir. Kütle spektrometresi, nükleer manyetik rezonans ve diğer tekniklerin birleştirilmesi veya pik 1 ve 9'u daha fazla tanımlamak için ilgili referans standartlarının kullanılması gerekmektedir.

Kimyasal örüntü tanıma teknolojisinin parmak izi veri analizi ile birlikte kullanılması, geleneksel Çin tıbbının orijinalliği ve kalitesinin daha objektif ve eksiksiz bir şekilde değerlendirilmesini sağlayabilir. Bu deneyde, farklı Gouteng kaynaklarını incelemek için parmak izi benzerlik değerlendirmesi ve kimyasal örüntü tanıma teknolojisinin bir kombinasyonu kullanılmıştır. Yalnızca içerik belirleme veya parmak izi analizine dayanan mevcut kalite değerlendirme ve kalite kontrol yöntemleriyle karşılaştırıldığında, yalnızca Gouteng tıbbi malzeme kalitesinin tutarlılığını etkili bir şekilde değerlendirmekle kalmaz, aynı zamanda Gouteng tıbbi malzemesinin kalite farklılıklarına katkıda bulunan ana faktörleri de açıklığa kavuşturur. Bu nedenle, Gouteng'in kalite değerlendirmesi ve kalite kontrolü için daha zengin bilgi sağlar ve Gouteng'in kalite kontrolü ve sonraki gelişimi için belirli bir referans sağlar.