Forschung zum UHPLC-Fingerprint und zur Erkennung chemischer Muster von Gouteng
Die Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs enthält Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil Uncaria macrophylla Wall, Uncaria hirsuta Havil Getrocknete hakenförmige Stängel und Zweige von Uncaria sinensis (Oliv.) Havil. oder Uncaria sessilifructus Roxb. Gegenwärtig sind die wichtigsten Heilpflanzen auf dem pharmazeutischen Markt Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil. Gouteng wirkt hitzelösend, leberberuhigend, windstillend und beruhigend auf den Schreck. Er kann bei innerer Bewegung der Leberwinde, epileptischen Anfällen, Fieberkrämpfen, Kälteschock, pädiatrischem Weinen, Schwangerschaftseklampsie, Kopfschmerzen und Schwindel usw. eingesetzt werden. In der klinischen Praxis wird er häufig zur Behandlung von Krankheiten wie Bluthochdruck, Herzrhythmusstörungen, Angstzuständen, Epilepsie usw. eingesetzt. Gouteng enthält zahlreiche chemische Bestandteile, darunter vor allem Alkaloide, Flavonoide, Triterpenoide usw. Unter ihnen gelten die Alkaloide als die wichtigsten pharmakologischen Bestandteile von Gouteng zur Senkung des Blutdrucks.

Der Fingerabdruck der traditionellen chinesischen Medizin ist ein umfassendes und quantifizierbares Chromatogramm, das Merkmale der chemischen Zusammensetzung liefert. Was das Heilkraut Gouteng betrifft, so haben viele Wissenschaftler das Fingerabdruck-Spektrum von Gouteng untersucht. Huang et al. beispielsweise erstellten HPLC-Chromatographie-Fingerprint-Spektren von Uncaria aus verschiedenen Regionen unter Verwendung von Uncaria-Alkaloiden und Isocrocea-Alkaloiden als Indikatorkomponenten, während Tan et al. HPLC-Fingerprint-Spektren von Uncaria-Alkaloiden aus verschiedenen Regionen erstellten. Diese Studien haben nützliche Untersuchungen für die eingehende Bewertung der Qualität von Gouteng durchgeführt, aber aufgrund der Konzentration auf einige wenige Alkaloidkomponenten wie Gouteng-Alkaloide und IsoGouteng-Alkaloide und der Verwendung nur einer einzigen Ähnlichkeitsbewertung gibt es immer noch Raum für Verbesserungen, um die interne Qualität von Gouteng genau und umfassend wiederzugeben, ohne dass die Fingerabdruckdaten eingehender ausgewertet und untersucht werden.

Um die Qualität von Gouteng-Arzneimitteln objektiv, umfassend und effizient zu bewerten, wurden in diesem Experiment Fingerabdruck-Spektren von 30 Gouteng-Chargen aus verschiedenen Quellen mittels UHPLC erstellt. Fünfzehn gemeinsame Peaks wurden mit der "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" kalibriert. Nach dem Vergleich mit Referenzstandards wurden sieben gemeinsame Peaks identifiziert, darunter Chlorogensäure, Isocaprylsäure, Isocaprylsäure, Gouteng-Alkaloid, Nähsamenmethylether, dehydriertes Gouteng-Alkaloid und Gouteng-Alkaloid. Basierend auf der Ähnlichkeitsbewertung der Fingerabdruckspektren werden die Fingerabdruckdaten mit chemometrischen Methoden kombiniert und multivariate statistische Methoden wie die Clusteranalyse (CA), die Hauptkomponentenanalyse (PCA) und die orthogonale partielle Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse (OPLS-DA) auf der Grundlage der Chemometrie angewandt, um die Qualität von Gouteng-Medizinprodukten zu analysieren und zu bewerten, um charakteristische Verbindungen für Gouteng-Qualitätsunterschiede zu identifizieren und eine Referenz für eine effektive Qualitätskontrolle von Gouteng zu liefern.

In dieser Studie wurden die Auswirkungen der Extraktionszeit (Ultraschall 20, 40, 60 min), der Extraktionslösungsmittel (100%, 75%, 50% Methanol und 100%, 75%, 50% Ethanol), der chromatographischen Säulen (ACQUITY UPLC HSS T3, Cortecs UPLC T3, Cortecs UPLC C18 und ACQUITY UPLC BEH C18) und der verschiedenen Systeme mobiler Phasen (Methanol-0.1% wässrige Ameisensäurelösung und Acetonitril-0.1% wässrige Ameisensäurelösung) auf die Anzahl und Trennung der chromatographischen Peaks. Schließlich wurde die 75%-Methanol-Ultraschallextraktion für 40 Minuten als Vorbereitungsmethode für die Testprobe festgelegt, und die ACQUITY UPLC HSS T3 wurde als chromatographische Säule ausgewählt, die mit Acetonitril-0.1%-Ameisensäurelösung in einem Gradienten eluiert wurde. Gleichzeitig wurden verschiedene Detektionswellenlängen wie 254, 274 und 366 nm untersucht, und es wurde festgestellt, dass es viele Peaks im Chromatogramm bei 254 nm mit guter Trennung gab.

Die Qualitätskontrolle von Gouteng-Arzneimitteln in der Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs erfolgt qualitativ durch die TLC-Methode mit Isorhynchophyllin als Indikatorkomponente. Diese Methode ist umständlich in der Anwendung und hat eine geringe Empfindlichkeit, was eine umfassende Kontrolle der Qualität von Hakenreben erschwert. In dieser Studie wurden zunächst die Fingerabdruck-Spektren von 30 Partien der Hakenrebe aus verschiedenen kommerziellen Quellen für die Ähnlichkeitsbewertung erstellt und anschließend eine chemische Mustererkennung durchgeführt. Nach der Ähnlichkeitsbewertung Software, die Ergebnisse zeigten, dass die Ähnlichkeit zwischen 30 Chargen von Gouteng medizinischen Materialien reichte von 0,850 bis 0,995; Insgesamt 15 gemeinsame Peaks wurden in der Fingerabdruck-Spektrum identifiziert, und 7 chemische Komponenten wurden durch den Vergleich mit Referenzstandards, nämlich Chlorogensäure, Isophenanthrolin, Isorhynchophyllin, Rhynchophyllin, Selegilin Methylether, Dehydrorhynchophyllin, und Rhynchophyllin. Chlorogensäure hat ein breites Spektrum pharmakologischer Wirkungen, wie z. B. antibakterielle, antivirale, antitumorale, lipidsenkende und blutdrucksenkende Wirkungen; Isocamptothecin hat eine proliferationshemmende Wirkung auf T-Zellen der menschlichen lymphatischen Leukämie; Isorhynchophyllin und Rhynchophyllin sind die Hauptwirkstoffe von Rhynchophyllin bei der Behandlung von Bluthochdruck; Cesare-Methylether ist ein wirksamer 5-HT1A-Rezeptor-Agonist und der Hauptbestandteil der traditionellen japanischen Medizin Yigan San; Dehydrohydroquercetin ist ein wirksamer Bestandteil der neuroprotektiven Wirkung auf Nervenzellen; Uncaria-Alkaloid hat Anti-Krebs-Wirkung, die die Lebensfähigkeit von menschlichen Brustkrebs MCF-7-Zellen in vitro hemmen kann, und induzieren DNA-Schaden-Reaktion und oxidative Stress-Reaktion. Unüberwachte Clusteranalyse und Hauptkomponentenanalyse wurden verwendet, um die 30 Probenchargen in verschiedene Gruppen aufzuteilen, und es wurde eine differenzierte Bewertung durchgeführt, während die Konsistenz der Qualität von Gouteng-Arzneimitteln evaluiert wurde; und es wurde eine orthogonale partielle Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse verwendet, um chromatographische Peaks zu untersuchen, die einen signifikanten Einfluss auf die Probengruppierung haben. Durch die Kombination von Fingerabdruck-Ähnlichkeitsbewertung und Mustererkennungsmethoden fanden wir heraus, dass die Hauptfaktoren, die Chargenunterschiede verursachen, 1, 3 (Chlorogensäure), 7 (Isocaprylsäure), 9 und 12 (Selegilinmethylether) sind. Dies legt nahe, dass diesen unterschiedlichen Komponenten bei der Bewertung der Qualität von Gouteng-Arzneimitteln besondere Aufmerksamkeit geschenkt werden sollte. Zur weiteren Identifizierung der Peaks 1 und 9 müssen Massenspektrometrie, kernmagnetische Resonanz und andere Techniken kombiniert oder entsprechende Referenzstandards verwendet werden.

Der Einsatz der Technologie zur Erkennung chemischer Muster in Verbindung mit der Analyse von Fingerabdruckdaten kann eine objektivere und vollständigere Bewertung der Authentizität und Qualität der traditionellen chinesischen Medizin ermöglichen. In diesem Experiment wurde eine Kombination aus Fingerabdruck-Ähnlichkeitsbewertung und chemischer Mustererkennungstechnologie verwendet, um verschiedene Gouteng-Quellen zu untersuchen. Im Vergleich zu bestehenden Qualitätsbewertungs- und Qualitätskontrollmethoden, die sich nur auf die Bestimmung des Inhalts oder die Fingerabdruckanalyse stützen, kann damit nicht nur die Konsistenz der Qualität von Gouteng-Arzneimitteln effektiv bewertet werden, sondern es werden auch die Hauptfaktoren geklärt, die zu den Qualitätsunterschieden bei Gouteng-Arzneimitteln beitragen. Daher liefert sie umfassendere Informationen für die Qualitätsbewertung und Qualitätskontrolle von Gouteng und stellt eine sichere Referenz für die Qualitätskontrolle und die anschließende Entwicklung von Gouteng dar.