UPLC yöntemi kullanılarak farklı dut dallarında beş flavonoid bileşenin eşzamanlı tayini
Dut şeritleri olarak da bilinen dut dalları, dutgiller familyasındaki Morus alba L. ve Morus alba M. bitkileri Australis Poir. ve Huasan M cathayana Hemsl'nin kuru yumuşak dallarıdır. Dut dalları düz bir yapıya, hafif acı bir tada sahiptir ve karaciğer meridyenine aittir. Rüzgar ve rutubeti giderme, eklem sağlığını geliştirme etkilerine sahip olan ve esas olarak romatizma, felç ve kol ve omuzlarda eklem uyuşması ve ağrı gibi semptomları tedavi etmek için kullanılan geleneksel bir Çin şifalı bitkisidir. Eski kitaplarda dut dallarının "ağız kuruluğunu tedavi ettiği, vücut sıvılarını beslediği ve böbrek suyunu beslediği" ve nemi kurutma, kan dolaşımını ve meridyen dolaşımını teşvik etme gibi tedavi edici etkilere sahip olduğu kaydedilmiştir. Çin'de geleneksel Çin tıbbında uzun bir klinik uygulama geçmişine sahiptirler. Dut dalları flavonoidler, alkaloidler, amino asitler vb. gibi çeşitli etkili aktif bileşenler içerir. Modern farmakolojik araştırmalara göre, dut dallarının anti-enflamatuar, antioksidan, hipoglisemik, lipid düşürücü, hipotansif, antibakteriyel, antiviral ve anti-tümör dahil olmak üzere birçok etkisi vardır. Dut dalı flavonoidlerinin kan lipitlerini düşürme, kan şekerini düşürme, antibakteriyel ve antioksidan özellikleri üzerinde iyi etkileri vardır.
Bu çalışmada, Chongqing'deki 9 farklı üretim alanından ve 3 farklı türden 18 parti dut dalı deneysel numune olarak kullanılmıştır. Ultrasonik ekstraksiyon gerçekleştirilmiş ve ultra performans sıvı kromatografisi (UPLC), 9 farklı üretim alanından ve 3 farklı türden bu 18 parti dut dalında rutin, dut pigmenti, kaempferol, izoquercitrin ve dut kuersetin dahil olmak üzere beş flavonoid içeriğini belirlemek ve analiz etmek için kullanılmıştır. Dut dallarının 18 partisi arasındaki flavonoid içeriğindeki farklılıklar karşılaştırılarak, sonraki dut dalı araştırma ve geliştirme çalışmaları için veri desteği ve referans sağlanmıştır.

Ekstraksiyon koşullarının seçimi. Bu çalışmada metanol ısıtma reflü ekstraksiyon yöntemi, metanol ultrasonik ekstraksiyon yöntemi, etanol ısıtma reflü ekstraksiyon yöntemi ve etanol ultrasonik ekstraksiyon yöntemi incelenmiştir. Ekstraksiyon çözücüsü olarak metanol kullanımının daha iyi sonuçlar verdiği görülmüştür. Isıtma reflü ekstraksiyon yöntemi ve ultrasonik ekstraksiyon yönteminin ekstraksiyon etkileri önemli ölçüde farklı değildi. Ultrasonik ekstraksiyon yönteminin basit çalışması göz önünde bulundurularak, bu çalışmada metanol ultrasonik ekstraksiyon yöntemi seçilmiştir. Bu çalışmada ekstraksiyon sıcaklığı, ekstraksiyon süresi ve ekstraksiyon sürelerinin ekstraksiyon verimliliği üzerindeki etkileri eş zamanlı olarak değerlendirilmiştir. Nihai deneysel sonuçlar, ekstraksiyon sıcaklığı 25 ℃, ekstraksiyon süresi 30 dakika ve ekstraksiyon süreleri 2 kat olduğunda genel ekstraksiyon etkisinin optimal olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, bu deneyin nihai ekstraksiyon koşulları, 25 ℃ ekstraksiyon sıcaklığı, 30 dakika ekstraksiyon süresi ve 2 kez ekstraksiyon süreleri ile metanol çözeltisi ve ultrasonik ekstraksiyon yöntemi kullanılarak belirlenmiştir.
Mobil faz seçimi. Bu çalışmada dört mobil faz bileşiminin (0.2% formik asit çözeltisi+metanol, 0.2% formik asit çözeltisi+asetonitril, 0.2% fosforik asit çözeltisi+metanol, 0.2% fosforik asit çözeltisi+asetonitril) pik oluşumu üzerindeki etkilerindeki farklılıklar araştırılmıştır. Deneysel sonuçlar, mobil faz 0.2% formik asit çözeltisi+metanol ve 0.2% fosforik asit çözeltisi+metanol olduğunda, pik oluşum süresinin daha geç olduğunu ve özellikle kuersetin için analiz süresinin daha uzun olduğunu göstermiştir. Mobil faz metanol olduğunda, pik oluşum süresi daha geç olmuş ve bu da genel analiz süresini etkilemiştir. Mobil faz 0.2% fosforik asit çözeltisi+asetonitril olduğunda, analiz süresi daha kısa, pik şekli ve ayırma etkisi daha iyi olmuştur. Bu nedenle, bu çalışmada mobil faz olarak 0.2% fosforik asit çözeltisi+asetonitril seçilmiştir. Aynı zamanda, farklı kolon sıcaklıklarının (30, 35, 40 ℃) deneysel sonuçlar üzerindeki etkisi de araştırılmıştır. Deneysel sonuçlar, kolon sıcaklığı 35 ℃ olduğunda ayırma etkisinin optimal olduğunu göstermiştir.
Dut dallarındaki flavonoid içeriği. Araştırma sonuçları, rutin, isoquercitrin, dut pigmenti, kaempferol ve kaempferolün 18 parti dut dalı örneğinin tamamında tespit edildiğini, ancak içeriklerinde önemli farklılıklar olduğunu göstermiştir. En yüksek içeriğe sahip kaempferolün ortalama içeriği 135.154 μ g/g ve en düşük içeriğe sahip kaempferolün ortalama içeriği 6.929 μ g/g idi. Bu da dut dallarının (özellikle Huangjueya Kasabası, Nan'an Bölgesindeki Huasang) kaempferolün çıkarılması ve daha da geliştirilerek kullanılması için kaynak materyal olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Dut dallarındaki bu beş flavonoidin içeriği, dalların hasat zamanı, dut ağacının türü, dalların kısımları (ön, orta ve arka), dalların kökeni ve benzeri gibi çeşitli faktörlerden etkilenir. Sangxinsu'nun anti AIDS virüsü ve anti-tümör etkileri vardır. Dut pigmentleri ve izoquercitrin hem antioksidan aktiviteye sahiptir hem de DPPH serbest radikal aktivitesini temizleyebilir. Rutin kılcal damarların esnekliğini artırabilir, çeşitli doku ve organları koruyabilir ve hücre apoptozunu indükleyebilir. Kaempferol kanser hücreleri üzerinde iyi bir inhibitör etkiye sahiptir. Rutin gibi, hücre ölümü sürecinde apoptozu indükler ve anti-kanser etkileri vardır. Özetle, dut özü, dut pigmenti, isoquercitrin, rutin ve kaempferolün hepsi iyi bir tıbbi değere sahiptir ve klinik tıp için büyük önem taşımaktadır. Dut ağacı kaynakları Three Gorges Rezervuar alanında geniş bir ekim alanına sahiptir, elde edilmesi kolaydır ve hammadde edinme maliyetleri düşüktür. Dut dallarının quercetin, dut pigmenti, isoquercitrin, rutin ve kaempferol gibi flavonoidleri çıkarmak için hammadde olarak kullanılması, dut dallarının daha da geliştirilmesi ve kullanılması için yeni bir trend olacaktır.