Исследование качества различных примитивных пиявок и продуктов их переработки
В Фармакопее Китайской Народной Республики издания 2020 года, далее именуемой "Китайская фармакопея", указано, что пиявки - это высушенные целые животные семейства пиявочных, такие как пиявка Whitman pigra Whitman, пиявка Hirudo nipponica Whitman или пиявка из ивовых листьев Whitman acranulata Whitman. Вкус соленый, горький, плоский; есть небольшой токсин, который относится к меридиану печени. Она обладает функцией разгона крови и стимулирования кровообращения, устранения застоя крови и устранения застойных явлений. Он широко используется при застое крови и непроходимости меридианов, при лечении массовых заболеваний, гемиплегии инсульта, падений и травм. Исследования показали, что фармакологические эффекты пиявок в основном включают антикоагуляционный, антитромботический, противоопухолевый, гиполипидемический и противовоспалительный эффекты и имеют очень широкое клиническое применение, включая лечение тромбоза, гиперлипидемии, гипертонии, диабета, простатита, рака, варикозного расширения вен, бесплодия, цирроза и других заболеваний. Основными компонентами пиявок являются макромолекулярные соединения, в основном содержащие белки и 17 видов аминокислот, в том числе 8 незаменимых для человеческого организма. Содержание гидролизованных аминокислот достигает 49,4%; кроме того, в состав пиявки входят различные вещества, такие как гирудин, гепарин, гистамин, гирудин, гликолипиды, сфеноиды, стероиды и карбоксильные эфиры.
Обзор литературы показал, что современные исследования пиявок сосредоточены на механизмах антикоагулянтов и определении аминокислот, а комплексные исследования качества различных примитивных пиявок и их смесей ограничены. Идентификационные исследования между различными примитивными пиявками и их смесями в основном основаны на идентификации признаков в соответствии с изданием 2020 года Китайской фармакопеи. Рынок пиявок дорог и хаотичен, и традиционная идентификация по внешнему виду не может быстро и эффективно оценить их качество. Кроме того, идентификация по внешнему виду не может быть применена к экстрактам и препаратам пиявок, что имеет определенные ограничения. Поэтому создание быстрого, научного и эффективного метода оценки имеет большое значение. В данном исследовании использовалась ВЭЖХ для создания спектра характеристик и метода определения содержания пиявок. Этот метод всесторонне оценивает пиявок и их смешанные продукты, обеспечивая научную основу для оценки качества пиявок и их смешанных продуктов.

Оптимизация условий хроматографирования. На основе определения характерного спектра в данном исследовании был использован тот же метод для определения содержания двух характерных компонентов пиявки - карбоксильного производного пиявочного амина С и пиявочного амина В. Детектор на диодной матрице использовался для полноволнового сканирования тестового раствора в диапазоне длин волн 200-400 нм. Результаты показали, что хроматографические пики каждого основного компонента имели сильное УФ-поглощение при длине волны 254 нм. Поэтому те же условия были использованы для анализа характерного спектра и содержания образцов пиявок.
Анализ результатов построения карты признаков. Пиявка - это высушенное целое тело животного семейства пиявок, пиявки Whitmania pigra Whitman. Лекарственными свойствами обладает плоская веретенообразная форма. Китайская фармакопея издания 2020 года контролирует его качество только по влажности, общей зольности, кислотности и щелочности, а также по антитромбиновой активности, и пока не проводит дифференциальную характеристику между различными субстратами. В данном исследовании были составлены карты ВЭЖХ-характеристик гирудо различного происхождения и его фальсификатов. Путем сравнения эталонных веществ было подтверждено, что гирудо содержит пять компонентов: урацил, гипоксантин, ксантин, гирудин С-карбоксильные производные, гирудин В. Согласно литературным данным, вышеуказанные птеридиновые соединения имеют схожую структуру с антитромбоцитарными препаратами, такими как клопидогрель, и считается, что эти компоненты могут быть активными компонентами гирудо для воспроизведения антитромбоцитарной агрегации. Фармакологические эффекты гирудо, о которых сообщалось выше, в основном включают антикоагулянтный, антитромботический и антиатеросклеротический эффекты. Кроме того, имеются противоопухолевые, противовоспалительные, противофиброзные и липидемические активности, которые указывают на то, что выбранные в данном исследовании характерные пики связаны с Это имеет большое значение для выяснения функциональных веществ пиявок, которые играют фармакологическую активность и способствуют вторичному исследованию и разработке лекарств. В то же время, разработанный метод позволяет идентифицировать различные примитивные пиявки и их смешанные продукты. Следующим шагом будет продолжение исследований по применению этого метода в экстрактах и препаратах, что послужит основой для разработки и использования лекарственного сырья из пиявок.
Анализ результатов определения содержания. На основании изучения карт характеристик в данном исследовании количественно определены пять компонентов пиявок, в том числе три нуклеозидных соединения - урацил, гипоксантин и два сфеноидных соединения - производные пиявки С-карбоксил и пиявки В. Согласно имеющимся литературным данным, нуклеозидные соединения и сфеноидные соединения могут быть использованы в качестве показателей оценки качества пиявок. Результаты эксперимента показали, что содержание урацила и гипоксантина в разных примитивных пиявках и их смесях имеет определенные различия. Среднее содержание урацила и гипоксантина находилось в следующем порядке: пиявка>пиявка>ивовая пиявка>филиппинская пиявка; среднее содержание ксантина следующее: пиявка>пиявка>филиппинская пиявка>пиявка; Среднее содержание С-карбоксильных производных амина пиявки следующее: пиявка>пиявка>пиявка>филиппинская пиявка; Среднее содержание пиявки B следующее: пиявка>пиявка>пиявка>филиппинская пиявка. Филиппинская пиявка не содержит пихамина В, а содержание гипоксантина в ней значительно ниже, чем в трех других субстратах. Поэтому определение содержания указанных компонентов может быть использовано для различения водяных пиявок (включая пиявок, пиявок и листоносов) и медицинских пиявок (филиппинских пиявок); Кроме того, PLS-DA анализ использует площади пиков 8 характерных пиков в образце в качестве переменных, а площади характерных пиков тесно связаны с содержанием соответствующих им индикаторных компонентов. В сочетании с результатами анализа PLS-DA в разделе "2.4.5", VIP-значения характерных пиков, соответствующих гипоксантину и ксантину, больше 1, и пиявка из листьев ивы не содержит ксантина. Среднее содержание трех других примитивных ксантинов также имеет значительные различия, что свидетельствует о том, что выбор этих пяти компонентов в качестве показателей определения содержания имеет определенную научную обоснованность.
Метод, разработанный в нашем исследовательском институте, отличается точностью, чувствительностью и высокой специфичностью. Он позволяет одновременно анализировать характерные спектры и оценивать содержание лекарственного сырья пиявок. Он может быть использован в качестве метода оценки качества различных примитивных пиявок и их смесей, являясь эталоном для оценки качества лекарственного сырья пиявок.