Одновременное определение пяти флавоноидных компонентов в различных видах ветвей шелковицы с помощью метода UPLC
Ветки шелковицы, также известные как тутовые полоски, - это растения рода Morus alba L. и Morus alba M. семейства тутовых Australis Poir. и Huasan M. Сухие нежные ветви cathayana Hemsl. Ветки шелковицы имеют плоскую природу, слегка горький вкус и относятся к меридиану печени. Это традиционное китайское лекарственное растение, которое обладает эффектом рассеивания ветра и сырости, способствует здоровью суставов и в основном используется для лечения таких симптомов, как ревматизм, паралич, онемение и болезненность суставов рук и плеч. В древних книгах записано, что ветки шелковицы могут "лечить сухость во рту, питать жидкости в организме и питать воду в почках", а также оказывают терапевтическое воздействие, осушая сырость, способствуя циркуляции крови и меридианов. Они имеют долгую историю клинического применения в традиционной китайской медицине в Китае. Ветки шелковицы содержат различные эффективные активные ингредиенты, такие как флавоноиды, алкалоиды, аминокислоты и т.д. Согласно современным фармакологическим исследованиям, ветки шелковицы обладают множеством эффектов, включая противовоспалительный, антиоксидантный, гипогликемический, липидоснижающий, гипотензивный, антибактериальный, противовирусный и противоопухолевый. Флавоноиды ветвей шелковицы хорошо влияют на снижение уровня липидов в крови, понижают уровень сахара в крови, а также обладают антибактериальными и антиоксидантными свойствами.
В данном исследовании в качестве экспериментальных образцов использовались 18 партий ветвей шелковицы из 9 различных районов производства и 3 различных видов в Чунцине. Ультразвуковая экстракция и ультраэффективная жидкостная хроматография (УЭЖХ) были использованы для определения и анализа содержания пяти флавоноидов, включая рутин, тутовый пигмент, каэмпферол, изокверцитрин и тутовый кверцетин, в этих 18 партиях ветвей шелковицы из 9 различных производственных районов и 3 различных типов. Было проведено сравнение различий в содержании флавоноидов в 18 партиях тутовых веток, что позволило получить данные, необходимые для последующих исследований и разработок тутовых веток.

Выбор условий экстракции. В данном исследовании изучался метод экстракции метанолом при нагревании с рефлюксом, метод ультразвуковой экстракции метанолом, метод экстракции этанолом при нагревании с рефлюксом и метод ультразвуковой экстракции этанолом. Было установлено, что использование метанола в качестве растворителя для экстракции дает лучшие результаты. Эффекты экстракции при использовании метода экстракции при нагревании под рефлюксом и ультразвукового метода экстракции существенно не отличались. Учитывая простоту работы ультразвукового метода экстракции, в данном исследовании был выбран метод ультразвуковой экстракции метанолом. В данном исследовании одновременно рассматривалось влияние температуры экстракции, времени экстракции и времени экстрагирования на эффективность экстракции. Результаты эксперимента показали, что общий эффект экстракции был оптимальным, когда температура экстракции составляла 25 ℃, время экстракции - 30 минут, а время экстракции - 2 раза. Таким образом, окончательные условия экстракции в данном эксперименте были определены как использование метанольного раствора и ультразвукового метода экстракции, с температурой экстракции 25 ℃, временем экстракции 30 минут и временем экстракции 2 раза.
Выбор подвижной фазы. В данном исследовании изучалось влияние четырех составов подвижной фазы (0,2% раствор муравьиной кислоты+метанол, 0,2% раствор муравьиной кислоты+ацетонитрил, 0,2% раствор фосфорной кислоты+метанол, 0,2% раствор фосфорной кислоты+ацетонитрил) на формирование пиков. Результаты эксперимента показали, что при использовании подвижной фазы 0,2% раствор муравьиной кислоты+метанол и 0,2% раствор фосфорной кислоты+метанол, время образования пика было более поздним, а время анализа более длительным, особенно для кверцетина. Когда подвижной фазой был метанол, время образования пика было более поздним, что влияло на общее время анализа. Когда подвижной фазой служил 0,2% раствор фосфорной кислоты+ацетонитрил, время анализа было короче, форма пика и эффект разделения были лучше. Поэтому в данном исследовании в качестве подвижной фазы был выбран 0,2% раствор фосфорной кислоты+ацетонитрил. В то же время было изучено влияние различных температур колонки (30, 35, 40 ℃) на результаты эксперимента. Результаты эксперимента показали, что эффект разделения был оптимальным, когда температура колонки составляла 35 ℃.
Содержание флавоноидов в ветках шелковицы. Результаты исследования показали, что рутин, изокверцитрин, тутовый пигмент, каэмпферол и каэмпферол были обнаружены во всех 18 партиях образцов ветвей шелковицы, но их содержание существенно различалось. Среднее содержание каэмпферола с наибольшим содержанием составило 135,154 мк г/г, а среднее содержание каэмпферола с наименьшим содержанием составило 6,929 мк г/г. Это позволяет предположить, что ветви шелковицы (особенно Huasang в городе Huangjueya, район Nan'an) могут быть использованы в качестве исходного материала для извлечения каэмпферола и его дальнейшего развития и использования. Содержание этих пяти флавоноидов в ветвях шелковицы зависит от различных факторов, таких как время сбора ветвей, вид тутового дерева, части ветвей (передняя, средняя и задняя), происхождение ветвей и так далее. Сангсинсу обладает противовирусным и противоопухолевым действием. Пигменты шелковицы и изокверцитрин обладают антиоксидантной активностью и способны уничтожать свободные радикалы DPPH. Рутин способен повышать эластичность капилляров, защищать различные ткани и органы, а также вызывать апоптоз клеток. Каэмпферол обладает хорошим ингибирующим действием на раковые клетки. Как и рутин, он индуцирует апоптоз в процессе гибели клеток и оказывает противораковое действие. Таким образом, экстракт шелковицы, пигмент шелковицы, изокверцитрин, рутин и каэмпферол обладают хорошей лекарственной ценностью и имеют большое значение для клинической медицины. Ресурсы тутового дерева имеют широкую площадь посадки в районе водохранилища Трех ущелий, их легко добывать, а затраты на приобретение сырья невелики. Использование ветвей шелковицы в качестве сырья для извлечения флавоноидов, таких как кверцетин, тутовый пигмент, изокверцитрин, рутин и каэмпферол, станет новой тенденцией для дальнейшего развития и использования ветвей шелковицы.