A Gouteng UHPLC ujjlenyomatának és kémiai mintázatának felismerésére irányuló kutatás
A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadása tartalmazza az Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil Uncaria macrophylla Wall, Uncaria hirsuta Havil Uncaria sinensis (Oliv.) Havil. vagy Uncaria sessilifructus Roxb. szárított kampós szárát és ágait. Jelenleg a gyógyszerpiacon forgalomban lévő fő gyógyszőlők az Uncaria rhynchhophylla (Miq.) Miq.ex Havil. A goutengnek hőtisztító és májnyugtató, szélcsendesítő és nyugtató hatása van. Használható májszél belső mozgására, epilepsziás rohamokra, lázas rohamokra, hidegsokkra, gyermekkori sírásra, terhességi eklampsziára, fejfájásra és szédülésre stb. A klinikai gyakorlatban gyakran használják olyan betegségek kezelésére, mint a magas vérnyomás, aritmia, szorongás, epilepszia stb. A gouteng számos kémiai összetevőt tartalmaz, elsősorban alkaloidokat, flavonoidokat, triterpenoidokat stb. Közülük az alkaloidokat tekintik a Gouteng fő farmakológiai összetevőinek a vérnyomás csökkentésére.

A hagyományos kínai orvoslás ujjlenyomata egy átfogó és számszerűsíthető kromatogram, amely a kémiai összetétel jellemzőit adja meg. Ami a Gouteng gyógynövényt illeti, számos tudós végzett kutatásokat a Gouteng ujjlenyomat-spektrumával kapcsolatban. Huang és munkatársai például különböző régiókból származó Uncaria kromatográfiás ujjlenyomat-spektrumokat állítottak össze HPLC-kromatográfiával, Uncaria-alkaloidokat és Isocrocea-alkaloidokat használva indikátor komponensként, míg Tan és munkatársai különböző régiókból származó Uncaria-alkaloidok HPLC-ujjlenyomat-spektrumát állították össze. Ezek a tanulmányok hasznos feltárásokat végeztek a Gouteng minőségének mélyreható értékeléséhez, de mivel néhány alkaloidkomponensre, például a Gouteng alkaloidákra és az IsoGouteng alkaloidákra összpontosítottak, és csak egyetlen hasonlósági értékelést használtak, az ujjlenyomatadatok mélyebb bányászata és feltárása nélkül még mindig van hova fejlődni a Gouteng belső minőségének pontos és átfogó tükrözése terén.

A Gouteng gyógyászati anyagok minőségének objektív, átfogó és hatékony értékelése érdekében ez a kísérlet UHPLC segítségével 30 különböző forrásból származó Gouteng-tétel ujjlenyomat-spektrumát állította össze. Tizenöt közös csúcsot kalibráltunk a "Kínai gyógyszer kromatográfiás ujjlenyomat hasonlóságértékelő szoftver" segítségével. A referenciastandardokkal való összehasonlítás után hét közös csúcsot azonosítottak, köztük a klorogénsavat, az izokaprilsavat, az izokaprilsavat, a Gouteng-alkaloidot, a vetőmag-metilétert, a dehidrogénezett Gouteng-alkaloidot és a Gouteng-alkaloidot. Az ujjlenyomat-spektrumok hasonlósági értékelése alapján az ujjlenyomat-adatokat kemometriai módszerekkel kombinálják, és a kemometrián alapuló többváltozós statisztikai módszereket, például a klaszterelemzést (CA), a főkomponens-elemzést (PCA) és az ortogonális részleges legkisebb négyzetek diszkrimináns analízisét (OPLS-DA) alkalmazzák a Gouteng gyógyászati anyagok minőségének elemzésére és értékelésére, annak érdekében, hogy a Gouteng minőségi különbségeire jellemző vegyületeket szűrjék és azonosítsák, és referenciát nyújtsanak a Gouteng hatékony minőségellenőrzéséhez.

Ebben a vizsgálatban az extrakciós idő (ultrahang 20, 40, 60 perc), az extrakciós oldószerek (100%, 75%, 50% metanol és 100%, 75%, 50% etanol), a kromatográfiás oszlopok (ACQUITY UPLC HSS T3, Cortecs UPLC T3, Cortecs UPLC C18 és ACQUITY UPLC BEH C18) és a különböző mobilfázis rendszerek (metanol-0.1% hangyasav vizes oldat és acetonitril-0,1% hangyasav vizes oldat) a kromatográfiás csúcsok számára és elválasztására. Végül a 75% metanolos ultrahangos extrakciót 40 percig határoztuk meg a vizsgálati minta előkészítési módjaként, és az ACQUITY UPLC HSS T3 kromatográfiás oszlopot választottuk, amelyet acetonitril-0,1% hangyasav vizes oldattal eluáltunk gradiens módon. Ugyanakkor különböző detektálási hullámhosszakat, például 254, 274 és 366 nm-t vizsgáltunk, és megállapítottuk, hogy a kromatogramban 254 nm-en sok csúcs volt, jó elválasztással.

A Kínai Gyógyszerkönyv 2020-as kiadásában szereplő Gouteng gyógyászati anyagok minőségellenőrzését TLC-módszerrel, az izorhynchophyllin mint indikátorkomponens segítségével minőségileg azonosítják. Ezt a módszert nehézkes működtetni és alacsony érzékenységű, ami megnehezíti a kampós szőlő minőségének átfogó ellenőrzését. Ebben a tanulmányban először 30, különböző kereskedelmi forrásból származó tétel horogszőlő ujjlenyomat-spektrumát határozták meg a hasonlóság értékelése céljából, majd kémiai mintafelismerési kutatást végeztek rajtuk. A hasonlóságot értékelő szoftver szerint az eredmények azt mutatták, hogy a 30 tételt tartalmazó Gouteng gyógyászati anyagok közötti hasonlóság 0,850 és 0,995 között volt; összesen 15 közös csúcsot azonosítottak az ujjlenyomat spektrumban, és 7 kémiai komponenst azonosítottak a referencia standardokkal való összehasonlítás révén, nevezetesen klorogénsavat, izofenantrolint, izorhynchophyllint, rhynchophyllint, szelegilin-metil-étert, dehidrorhynchophyllint és rhynchophyllint. A klorogénsavnak számos farmakológiai hatása van, például antibakteriális, antivirális, daganatellenes, lipidcsökkentő és vérnyomáscsökkentő; az izokamptotekin antiproliferatív hatással van a humán limfocita leukémia T-sejtjeire; az izorhynchophyllin és a rhynchophyllin a rhynchophyllin fő hatóanyagai a magas vérnyomás kezelésében; A cezare-metiléter hatékony 5-HT1A receptor agonista és a hagyományos japán gyógyszer, a Yigan San fő összetevője; A dehidrohidro-kvercetin hatékony összetevője az idegsejtekre gyakorolt neuroprotektív hatásnak; Az Uncaria alkaloid rákellenes hatással rendelkezik, amely képes gátolni az emberi emlőrák MCF-7 sejtek életképességét in vitro, és indukálja a DNS-károsodási választ és az oxidatív stresszválaszt. Nem felügyelt klaszterelemzést és főkomponens-elemzést használtak a 30 tételes minták különböző csoportokra történő további felosztására, és differenciált értékelést végeztek a Gouteng gyógyászati anyagok minőségének konzisztenciájának értékelése során; És ortogonális részleges legkisebb négyzetek diszkriminancia-analízisét használják a kromatográfiás csúcsok szűrésére, amelyek jelentős hatással vannak a minta csoportosítására. Az ujjlenyomat-hasonlósági értékelés és a mintafelismerési módszerek kombinációjával megállapítottuk, hogy a tételek közötti különbségeket okozó fő tényezők az 1, 3 (klorogénsav), 7 (izokaprilsav), 9 és 12 (szelegilin-metil-éter) voltak. Ez azt sugallja, hogy ezekre a differenciáló összetevőkre különös figyelmet kell fordítani a Gouteng gyógyászati anyagok minőségének értékelésekor. Az 1. és 9. csúcsok további azonosításához kombinálni kell a tömegspektrometriát, a nukleáris mágneses rezonanciát és más technikákat, vagy megfelelő referenciastandardokat kell használni.

A kémiai mintafelismerő technológia használata az ujjlenyomat-adatok elemzésével kombinálva objektívebb és teljesebb értékelést biztosíthat a hagyományos kínai gyógyászat eredetiségéről és minőségéről. Ez a kísérlet az ujjlenyomat hasonlósági értékelés és a kémiai mintafelismerő technológia kombinációját alkalmazta a Gouteng különböző forrásainak vizsgálatára. Összehasonlítva a meglévő minőségértékelési és minőségellenőrzési módszerekkel, amelyek csak a tartalom meghatározására vagy az ujjlenyomatelemzésre támaszkodnak, nemcsak a Gouteng gyógyászati anyag minőségének konzisztenciáját értékeli hatékonyan, hanem tisztázza a Gouteng gyógyászati anyag minőségi különbségeihez hozzájáruló fő tényezőket is. Ezért gazdagabb információt nyújt a Gouteng minőségértékeléséhez és minőségellenőrzéséhez, és bizonyos referenciát biztosít a Gouteng minőségellenőrzéséhez és későbbi fejlesztéséhez.