Identification des spectres caractéristiques UPLC de quatre plantes originales des herbes médicinales de Xihuangcao
L'herbe de Xihuang est une plante médicinale chinoise unique du sud des Cinq Crêtes, qui a pour effet de dissiper la chaleur et d'éliminer l'humidité, de refroidir le sang et d'éliminer les stases. Elle est utilisée pour traiter la jaunisse due à la chaleur humide, la distension abdominale et les douleurs hypochondriaques, la diarrhée due à la chaleur humide, la diarrhée due aux toxines de la chaleur et les lésions traumatiques. Il s'agit d'un médicament clinique couramment utilisé dans le sud des Cinq Crêtes, ainsi que d'une matière première pour la prescription des célèbres médicaments traditionnels chinois brevetés et des préparations simples de grande variété "comprimés anti-inflammatoires et cholagogues". La pharmacopée chinoise (édition 2020, volume 4) l'enregistre comme la partie aérienne séchée de Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara ou Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar, une plante appartenant à la famille des Labiées et au genre Rabdosia. La plante originale incluse dans les normes provinciales de la médecine chinoise à base de plantes est Rabdosia lophanthoides R serra、 Thread patterned fragrant tea and vegetable R Lophanthoides et sa variété de fleurs fibreuses R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 Au cours du processus de recherche et d'organisation des ressources génétiques des matières médicinales de Xihuangcao, les membres de notre groupe de recherche ont découvert que Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara, une plante appartenant au même genre, est également couramment utilisée comme matière médicinale de Xihuangcao dans la culture folklorique. En raison des caractéristiques morphologiques similaires de ces plantes, il est difficile de distinguer les substances médicinales sèches sur la base de leur apparence, et il y a toujours eu un phénomène de confusion dans les ressources variétales des substances médicinales commerciales de Xihuangcao. Il est donc très important d'établir des méthodes d'identification pour les différents types de Huangcao afin de garantir et d'améliorer la sécurité et l'efficacité des médicaments cliniques.

Traditionnellement, l'identification des différentes plantes d'origine des matières médicinales de Xihuangcao a été étudiée sous l'angle de la morphologie et de la microscopie. Toutefois, comme les matières médicinales sèches sont souvent ridées et cassées, il est difficile de les identifier avec précision et rapidité. Ces dernières années, les chercheurs ont mené des études d'identification sur les plantes d'origine au niveau des molécules d'ADN et des composants chimiques. Toutefois, l'identification moléculaire ne peut distinguer Rabdosia serora et Lycaena angustifolia qu'au niveau de l'espèce, ce qui rend difficile la distinction entre les variétés originales et les variantes de Lycaena angustifolia. En ce qui concerne la recherche sur la composition chimique, certains chercheurs pensent que la spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier et la spectroscopie infrarouge à corrélation bidimensionnelle peuvent permettre d'identifier le Xihuangcao, le thé végétal parfumé doublé, ses fleurs fibreuses et ses variétés à base étroite. Certains chercheurs ont également mené des recherches sur l'identification du contenu de la composition chimique et des spectres d'empreintes digitales, mais les résultats expérimentaux ne permettent pas de distinguer très bien la variété originale de thé vert parfumé de ses variantes. Ces dernières années, les méthodes chimiométriques ont été de plus en plus largement utilisées dans l'analyse chromatographique de la médecine traditionnelle chinoise. Elles permettent d'analyser et de traiter la grande quantité de données générées par l'analyse chromatographique et jouent un rôle de plus en plus important dans le contrôle de la qualité de la médecine traditionnelle chinoise lorsqu'elles sont combinées à l'analyse chromatographique. La chromatographie liquide à ultra haute performance (UPLC) présente les avantages d'un temps d'analyse court, d'un bon effet de séparation et d'une grande sensibilité. Par conséquent, cette étude a utilisé la CLU pour étudier les spectres caractéristiques de 32 lots de matériaux médicinaux collectés à partir de quatre plantes de base différentes, à savoir Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai et Longye Xiangchacai, et les a combinés avec des méthodes chimiométriques telles que l'analyse en grappes, l'analyse en composantes principales et l'analyse discriminante des moindres carrés partiels, afin de distinguer et d'identifier ces quatre plantes de base, dans le but de fournir des informations précieuses pour Xixi. Fournir une référence pour l'identification des matières médicinales de Huangcao et pour l'analyse et l'évaluation de leur qualité.

 

Cette étude a examiné et optimisé les méthodes de préparation et les conditions chromatographiques de la solution d'essai. Les résultats de l'étude des solvants d'extraction (méthanol, méthanol 80%, méthanol 60%) ont montré que lorsque le méthanol était utilisé comme solvant d'extraction, le chromatogramme de l'échantillon obtenu présentait davantage de pics chromatographiques, des surfaces de pic relativement plus importantes et une ligne de base stable, ce qui reflétait mieux la composition chimique de la matière médicinale de Xihuangcao. Le méthanol a donc été choisi comme solvant d'extraction pour le spectre caractéristique de la matière médicinale de Xihuangcao. Les résultats de la mesure des longueurs d'onde (250, 254, 260, 280nm) ont montré qu'il y avait de nombreux pics chromatographiques à 254nm et que la taille de chaque pic était uniforme. Par conséquent, 254 nm a été choisi comme longueur d'onde de détection ; Les résultats de l'étude des phases mobiles (méthanol -0,1% eau d'acide formique, acétonitrile -0,1% eau d'acide formique, 0,1% acide formique méthanol -0,1% eau d'acide formique, et 0,1% acide formique acétonitrile -0,1% eau d'acide formique) ont montré que lors de l'utilisation du méthanol -0.1% d'acide formique comme phase mobile pour l'élution, la ligne de base était plate, et le degré de séparation et la forme des pics étaient bons ; Les résultats de l'étude de la température de la colonne et du débit ont montré que l'efficacité de séparation de chaque méthode chromatographique était la meilleure lorsque la température de la colonne était de 30 ℃ et le débit de 0,3mL/min.

Dans cette étude, l'UPLC a été utilisée pour établir une carte caractéristique applicable à l'identification de quatre plantes de base de l'herbe médicinale Xihuangcao. La ligne de base était plate, le degré de séparation était bon et le nombre de pics communs était élevé. Dans les cartes de contrôle établies pour Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai et Longye Xiangchacai, 19, 24, 26 et 21 pics communs ont été calibrés respectivement. Sur la base des différences entre leurs pics communs, les quatre plantes de base peuvent être distinguées de manière préliminaire. En raison du petit nombre de lots collectés de Xianwen Xiangchacai et de Longye Xiangchacai, afin d'éviter les erreurs dans le processus de recherche, les pics chromatographiques présentant des valeurs de réponse plus élevées, un meilleur degré de séparation et une meilleure forme de pic ont été sélectionnés pour l'étalonnage lors de l'étude des pics communs. Les résultats de l'évaluation de la similarité indiquent qu'en raison des différences de lieu d'origine, il existe certaines différences entre les mêmes matières médicinales originales ; il existe également des différences entre les différentes matières médicinales de base, parmi lesquelles la similarité entre Xihuangcao et les trois autres matières médicinales de base est relativement faible et peut être clairement distinguée ; la similarité entre le thé végétal parfumé de Xianhua et le thé végétal parfumé de Xianwen est relativement élevée, et la similarité entre le thé végétal parfumé de Changye et le thé végétal parfumé de Xianhua est également relativement élevée. Cela peut s'expliquer par le fait que le thé végétal parfumé de Xianhua, le thé végétal parfumé de Xianwen et le thé végétal parfumé de Changye sont tous des plantes appartenant au groupe du thé végétal parfumé à feuilles ridées, dont les types de composition chimique sont similaires. Les recherches existantes ont montré qu'il existe peu de différences entre les types de composants chimiques contenus dans les plantes d'origine des matières médicinales de Xihuangcao, qui comprennent principalement des terpènes, des flavonoïdes, des acides phénoliques et des stérols. Parmi eux, les diterpènes sont des composants importants de la plante médicinale Xihuangcao. Le principal type de diterpènes contenu dans la plante originale Xihuangcao est le type de kaempférol énantiomérique, tandis que le thé végétal parfumé linéaire et sa variété de fleurs fibreuses, ainsi que le thé végétal parfumé à feuilles longues, contiennent principalement des diterpènes de type colophane et de type colophane énantiomérique. On suppose que la faible similitude entre le Xihuangcao et le thé vert linéaire, le thé vert fibreux et le thé vert à longues feuilles peut être liée aux différences entre les types de diterpènes, tandis que les différences entre le thé vert linéaire, le thé vert fibreux et le thé vert à longues feuilles peuvent être liées à la teneur et aux types de leurs composants respectifs.
L'analyse en composantes principales a montré que le Xihuangcao peut être distingué du théier parfumé à lignes, du théier parfumé et du théier parfumé à longues feuilles par la différence des scores en composantes principales de chaque élément de base. L'analyse discriminante par moindres carrés partiels permet de distinguer trois types de plantes primitives, à savoir le théier parfumé à lignes, le théier parfumé fibreux et le théier parfumé à longues feuilles, avec des effets de classification significatifs. Les 15 marqueurs de classification obtenus sont les principaux composants caractéristiques à l'origine des différences entre les trois types de plantes, qui sont d'une grande importance pour la distinction de ces trois plantes primitives différentes. L'identification de ces 15 pics chromatographiques doit encore faire l'objet de recherches et d'une identification plus approfondies.
En résumé, les cartes caractéristiques UPLC des quatre plantes basales de Xihuangcao établies dans cette étude peuvent distinguer de manière préliminaire les quatre plantes basales différentes grâce à l'étalonnage des pics caractéristiques et à l'évaluation de la similarité. Afin de mieux distinguer les quatre types de plantes originales et de rechercher des composantes différentielles, cette étude a également utilisé l'analyse en grappes, l'analyse en composantes principales et l'analyse discriminante par moindres carrés partiels pour distinguer complètement les quatre types de plantes originales de Xihuangcao. Les résultats de la recherche fournissent une méthode scientifique et une référence pour l'identification, l'analyse de la qualité et l'évaluation des plantes d'origine dans les matières médicinales de Xihuangcao.