Purification, structure et activité antioxydante in vitro des polypeptides du sarrasin de Tartarie
Le sarrasin, également connu sous le nom de blé noir, sarrasin, blé triangulaire, etc., appartient à la famille des Polygonaceae et au genre Buckwheat. Il s'agit d'une plante dicotylédone originaire de Chine, l'une des premières cultures au monde. Il s'agit également d'une petite céréale unique en Chine qui combine alimentation et médecine. Selon le Compendium of Materia Medica, le sarrasin amer a un goût amer, doux et froid, et a pour fonctions de réduire le qi, d'élargir les intestins, de soutenir l'esprit, de favoriser la circulation du qi et d'éliminer la stase sanguine. Des études antérieures ont montré que les extraits peptidiques bruts obtenus à partir des grains de sarrasin amer et l'hydrolyse de leurs protéines ont diverses activités biologiques, telles que la réduction du cholestérol, la prévention du cancer et des tumeurs, la prévention de l'hyperlipidémie et des effets antioxydants.
Les peptides bioactifs ont de multiples fonctions biologiques, qui sont étroitement liées à leur composition en acides aminés et à leur séquence. Par conséquent, la clé de l'étude de l'efficacité des peptides est l'identification de leur structure. La séparation et la purification constituent une étape cruciale dans l'étude de la relation entre la structure et l'efficacité des peptides. Les techniques de séparation et de purification des peptides couramment utilisées sont la chromatographie, la séparation membranaire, l'électrophorèse, etc. Parmi elles, la technologie de la chromatographie est la plus utilisée. En raison de la composition complexe des hydrolysats de protéines, plusieurs méthodes sont souvent utilisées en combinaison pour la séparation et la purification afin d'obtenir une séparation et un enrichissement des peptides. Des études antérieures ont montré que les protéines du sarrasin tartare ou les produits de l'hydrolyse enzymatique ont diverses activités biologiques, mais leurs mécanismes d'activité biologique ne sont pas encore très clairs, et il existe peu de rapports sur l'analyse structurelle et l'activité biologique des peptides actifs du sarrasin tartare. Ma et al. ont isolé et identifié quatre peptides antioxydants (WPL, VPW, VFPW et PW) à partir de protéines de sarrasin digérées, qui ont une plus grande capacité à piéger les radicaux libres ABTS que les mélanges de protéines de sarrasin. Luo a utilisé une protéase alcaline pour hydrolyser les protéines de sarrasin tartare et obtenir un hydrolysat de protéines de sarrasin tartare. Après séparation par ultrafiltration, chromatographie d'échange d'anions et chromatographie liquide inverse à haute performance, le composant peptidique actif du sarrasin tartare a été séparé avec succès et sa séquence d'acides aminés a été obtenue comme Ala Phe Tyr Arg Trp.
Cette étude a utilisé le résidu de l'extrait fonctionnel du sarrasin tartare comme matière première pour extraire la protéine brute du sarrasin tartare et a préparé des peptides de sarrasin tartare par fermentation avec des lactobacilles végétaux. Le bouillon de fermentation de polypeptides de sarrasin tartare obtenu a été purifié par résine d'adsorption macroporeuse, gel de dextran et chromatographie liquide, et son activité antioxydante a été déterminée. La structure des parties sélectionnées ayant une forte activité antioxydante a été identifiée, et la source principale de l'activité antioxydante de l'extrait brut de polypeptide de sarrasin tartare a été explorée, afin de fournir une base théorique pour les recherches ultérieures sur le polypeptide de sarrasin tartare et son application dans les aliments fonctionnels et les produits de santé.

 

Après séparation et purification par gel de glucane Sephadex G-15, la capacité de piégeage des radicaux libres ABTS et DPPH du composant T-3 était la meilleure, et les taux de piégeage étaient respectivement de 96% et 94%. Le polypeptide de sarrasin tartare purifié par une résine d'adsorption macroporeuse a un fort effet inhibiteur sur le DPPH et l'ABTS, similaire au composant T-3 séparé et purifié par le gel, et présente une activité antioxydante significative.
L'identification du matériel a été effectuée sur le composant T-3-1 séparé par chromatographie liquide, et un total de 249 protéines et 2324 peptides ont été identifiés à partir du composant T-3-1. Les peptides identifiés sont principalement constitués de 10 à 15 acides aminés et appartiennent à la gamme de longueur des peptides biologiquement actifs. D'après les résultats de l'identification par spectrométrie de masse du composant T-3-1, les séquences d'acides aminés des principaux peptides antioxydants sont la phénylalanine proline tyrosine (Phe Pro Tyr, FPY) et la tyrosine leucine proline phénylalanine (Tyr Leu Pro Phe, YLPF).
La capacité antioxydante des peptides de sarrasin tartare varie en fonction de leur pureté. Après une séparation et une purification supplémentaires du composant T-3 par chromatographie liquide, le composant T-3-1 a été obtenu. Bien que la pureté des peptides de sarrasin atteigne 98%, les taux d'inhibition du DP-PH et de l'ABTS n'ont plus augmenté, mais ont légèrement diminué, avec des taux d'inhibition de 89% et 90%, respectivement. L'activité antioxydante des peptides de sarrasin tartare préparés par la méthode de fermentation peut ne pas être entièrement corrélée positivement avec la pureté des peptides. Lorsque la pureté est augmentée dans une certaine mesure, l'activité antioxydante des peptides diminue en fait