Méthode de préparation et application d'une colonne intégrale d'affinité pour l'acide bétulinique immobilisé
L'acide 23 hydroxy bétulinique (23-HBA) est un composé triterpénoïde pentacyclique de type lupin isolé de la plante médicinale traditionnelle chinoise Pulsatilla chinensis de la famille des Ranunculaceae. Il est également présent dans diverses plantes telles que Betula pubescens, Ziziphus mauritiana, Prunella vulgaris, Apocynaceae, et est particulièrement abondant dans la famille Betula. La recherche pharmacologique moderne a montré qu'il a une série d'effets tels que l'antiviral, l'inhibition de la prolifération des cellules tumorales, l'inhibition de l'angiogenèse et la sensibilisation combinée. Par exemple, ce type de composé possède un mécanisme d'action unique, une toxicité extrêmement faible et des effets indésirables minimes, ce qui en fait un composé candidat très prometteur pour la thérapie anti-VIH-1. Par exemple, de nombreux dérivés du 23-HBA peuvent également inhiber l'activité biologique de diverses tumeurs et cellules cancéreuses, telles que le cancer du rectum, le cancer du poumon, la leucémie, le lymphome, le cancer de la prostate, le cancer de l'ovaire, etc. en inhibant des enzymes spécifiques nécessaires à la survie et à la croissance des cellules, telles que l'ornithine-décarboxylase. Par conséquent, le 23-HBA est considéré comme un composé de premier plan présentant une valeur significative pour la recherche.
Ces dernières années, notre groupe de recherche a mené des études systématiques sur la dérivatisation du 23-HBA et a obtenu un dérivé important, l'acide 3,23-diacétyl-17-acétique bétulinique (ci-après dénommé BA dérivé) du 23-HBA, doté d'une meilleure activité. Cependant, la recherche sur le mécanisme d'action de ces dérivés du 23-HBA n'en est qu'à ses débuts, et il existe peu de rapports sur leurs cibles, ce qui pose le dilemme des cibles et des mécanismes peu clairs. Par conséquent, la mise au point d'une méthode efficace, rapide et simple pour identifier les protéines/enzymes cibles des produits naturels offre des perspectives d'application très vastes et importantes. Il convient de noter que ces dernières années, divers moyens technologiques ont été utilisés pour la découverte et la recherche de protéines cibles de médicaments ; parmi eux, la technologie de protéomique chimique basée sur la pêche par enrichissement par affinité peut utiliser ou simuler les interactions spécifiques entre les biomolécules et servir de phase stationnaire pour la chromatographie afin d'analyser et de purifier sélectivement des substances spécifiques à partir de mélanges complexes. Elle est donc devenue l'une des principales méthodes d'étude des cibles protéiques des médicaments à petites molécules, avec des avantages significatifs tels que le haut débit et le faible coût. Jusqu'à présent, la chromatographie d'affinité a été appliquée avec succès à la recherche de protéines cibles de divers médicaments tels que le tacrolimus, la cyclosporine, le méthotrexate, etc. En préparant une nouvelle colonne de chromatographie d'affinité liée à des dérivés du 23-HBA, nous étudions le criblage d'affinité des protéines extraites de cellules ou de tissus, afin de découvrir les protéines cibles correspondantes. En préparant une nouvelle colonne de chromatographie d'affinité liée aux dérivés du 23-HBA, nous étudions le criblage d'affinité des protéines extraites de cellules ou de tissus, afin de découvrir les protéines cibles correspondantes. Cela devrait permettre d'établir de nouvelles idées et méthodes pour la recherche et l'étude des protéines cibles des produits naturels.
Parmi les matrices d'enrichissement par affinité courantes, le gel de silice présente de bonnes performances chromatographiques, mais une faible résistance aux acides et aux alcalis ; la résine et l'agarose conviennent à une large gamme de pH, mais leur résistance mécanique est médiocre. Une colonne monolithique est une phase stationnaire à lit continu formée par polymérisation in situ d'un mélange de monomères, de réticulants, d'initiateurs et d'agents de formation de pores dans une colonne chromatographique, adaptée à l'analyse rapide et au mode de gradient de débit. Par rapport aux colonnes à garnissage traditionnelles, elle présente les avantages d'une méthode de préparation simple, d'une modification facile, d'une efficacité élevée de la colonne, d'une bonne perméabilité, d'une faible contre-pression et d'un taux de transfert de masse rapide ; en même temps, elle présente également l'avantage d'une taille de pore contrôlable, ce qui présente de grands avantages pour la séparation et l'analyse des biomolécules. Par conséquent, le développement d'une nouvelle chromatographie d'affinité sur matériaux en vrac à base de polymères, fondée sur la résistance aux acides et aux alcalis et sur une bonne biocompatibilité, revêt une importance théorique et pratique considérable.
Il n'existe actuellement aucun rapport dans la littérature sur les colonnes monolithiques en polymère organique liées à des composés 23-HBA. Cette étude a principalement utilisé la méthode "one pot" rapportée précédemment pour préparer une nouvelle colonne monolithique polymère cible immobilisée 23 HBA poly (GMA-EDA-BA-co EDMA) par polymérisation thermique in situ dans une colonne capillaire de 100 μ m I.D. (diamètre intérieur) ; Dans le même temps, nous avons exploré en profondeur la composition et le rapport de la colonne monolithique préparée, et nous avons étudié son mécanisme d'action.

Dans cet article, une méthode de préparation d'une colonne de chromatographie d'affinité pour l'immobilisation de petites molécules de produits naturels est étudiée. Tout d'abord, des monomères fonctionnels EDA-BA (ligands) avec des groupes éthylènediamine actifs sont synthétisés en modifiant la position 28, qui n'affecte pas de manière significative l'activité. Des colonnes de chromatographie intégrale Poly (GMA-EDA-BA co EDMA) sont préparées par une méthode "one pot" avec d'autres monomères et agents de réticulation. L'objectif principal de cette étude est de développer une méthode de préparation de colonnes de chromatographie d'affinité pour l'immobilisation de petites molécules de produits naturels ayant une valeur promotionnelle. La méthode "one pot" présente de grands avantages en termes d'efficacité de préparation, permettant non seulement de gagner du temps et de réduire le coût de purification des composés monomères, mais aussi de maintenir l'affinité de la colonne chromatographique. Toutefois, le niveau de commercialisation des monomères fonctionnels (ligands) détermine la valeur de promotion future de la méthode ; à l'heure actuelle, il est encore nécessaire de concevoir des dérivés sur la base de chaque petite molécule, ce qui présente certaines lacunes. En ce qui concerne l'application pratique et la promotion de cette colonne de chromatographie d'affinité dans des systèmes complexes, des recherches supplémentaires sont nécessaires dans le cadre d'expériences ultérieures.
Les produits naturels ont toujours été une source importante de découverte de nouveaux médicaments, et l'immobilisation des produits naturels pour préparer des colonnes de chromatographie d'affinité correspondantes est utile pour le développement des produits naturels, devenant ainsi l'un des points chauds de la recherche. Cet article vise à établir une méthode rapide, efficace et réalisable pour la recherche et l'étude des protéines cibles des produits naturels ; en même temps, il fournit également une méthode de recherche importante et une plate-forme pour explorer l'interaction entre les produits naturels à petites molécules et différentes cibles, ce qui devrait montrer une bonne efficacité dans les maladies. Le principal moyen d'obtenir cet effet est d'inhiber l'alpha amylase et l'alpha glucosidase, réduisant ainsi l'hydrolyse des polysaccharides et favorisant la synthèse des glycanes. Cela suggère que la BA peut former une relation d'affinité avec l'alpha glucosidase, ce qui permet d'obtenir un effet de rétention chromatographique significatif. Cette étude fournit une base scientifique pour l'exploration du mécanisme d'action de cette colonne intégrale, mais son application spécifique à des échantillons réels doit encore être promue dans des travaux ultérieurs.