Spectres d'empreinte HPLC et détermination de la teneur en quatre alcaloïdes dans différentes régions du marteau à tige de fer Fu Mao
Aconitum flavum Hand. - Mazz. appartient au genre Aconitum de la famille des Ranunculaceae. Elle est également connue sous les noms de Duanchongcao, Wuyao et Yizhihao, et est une plante médicinale traditionnelle chinoise et une plante folklorique. Ses racines et ses plantules sont utilisées comme médicaments, et ses racines séchées sont communément appelées "marteau à tige de fer". Le Shaanxi Chinese Herbal Medicine indique que le Fumao Iron Rod Hammer a pour effet de favoriser la circulation sanguine, d'éliminer la stase sanguine, de soulager la douleur, de dissiper le vent et l'humidité, de réduire les gonflements et les toxines, d'arrêter les saignements, de traiter les blessures causées par les chutes, la polyarthrite rhumatoïde et les douleurs dans le bas du dos et les jambes.

D'après la littérature, les alcaloïdes sont les principaux ingrédients actifs de la plante médicinale chinoise Aconitum carmichaelii, et l'aconitine est le principal composant chimique avec une teneur relativement élevée. Les principaux composants de la différence de teneur entre Fumao Iron Hammer et Iron Hammer sont l'épiaconitine et l'aconitine. Fumao Iron Hammer a une teneur plus élevée en 12 épiaconitine et en aconitine qu'Iron Hammer. Des études pharmacologiques expérimentales modernes ont montré que l'aconitine, la 12 épiaconitine, la sophocarpine et la 3-acétylaconitine ont des activités analgésiques, anti-inflammatoires et anticancéreuses.

À l'heure actuelle, il existe peu de rapports sur les normes de qualité du marteau de fer de Fumao. Le spectre d'empreintes digitales de la médecine traditionnelle chinoise est largement utilisé pour l'évaluation de la qualité, car il peut refléter de manière exhaustive les types et les quantités de composants chimiques contenus dans la médecine traditionnelle chinoise. Par conséquent, cette étude a établi des chromatogrammes d'empreintes digitales CLHP pour 15 lots d'origines différentes de matériaux médicinaux du marteau de Fumao Tiebang et a déterminé les teneurs de quatre alcaloïdes, dont 12 épiaconitine, Song Guoling, aconitine et 3-acétylaconitine ; Deuxièmement, le système d'évaluation de la similarité des empreintes chromatographiques de la médecine chinoise (version 2012A) a été utilisé pour l'évaluation de la similarité, et le logiciel SPSS a été utilisé pour l'analyse en grappes et l'analyse en composantes principales, afin de fournir une base scientifique pour le dépistage des composants indicateurs et le contrôle complet de la qualité de la médecine chinoise Fumao Tiebang Hammer.

 

 

Détermination des conditions chromatographiques. La longueur d'onde d'absorption maximale de l'aconitine et du Song Guoling est de 210 nm, et la longueur d'onde d'absorption maximale de l'aconitine et de la 3-acétylaconitine est de 235 nm. Les longueurs d'onde 210, 215, 220 et 230 nm ont été étudiées pour équilibrer les quatre pics et obtenir la valeur de réponse la plus élevée. Finalement, la longueur d'onde de détection a été fixée à 215 nm. Nous avons étudié l'Agilent Eclipse Plus C18 (50 mm × 4,6 mm, 5 μ m), l'Unitary C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m), le JADE-PAK ODS (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m) et l'ACE Excel C18PFP (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m). En comparant le facteur de symétrie, la résolution et la forme des pics, nous avons finalement choisi la colonne chromatographique ACE Excel C18 PFP. Nous avons étudié l'ajout de 2,0, 2,5 et 3,0 ml de triéthylamine à la phase aqueuse et avons constaté que l'ajout de 2,5 ml de triéthylamine permettait d'obtenir de meilleures formes de pics chromatographiques et de meilleurs effets d'élution en gradient. Nous avons donc ajouté 2,5 ml de triéthylamine à la phase aqueuse. Conformément à la pharmacopée et à la littérature, des phases mobiles telles que acétonitrile : 0,1% acétate d'ammonium, acétonitrile : 0,2% acide acétique glacial (ajusté à pH=6,2 avec de la triéthylamine), acétonitrile et eau, et acétonitrile : 0,1% acide phosphorique ont été étudiées. Finalement, une élution en gradient de la solution aqueuse d'acétonitrile : 0,1% d'acide phosphorique a été sélectionnée, ce qui a permis d'obtenir une ligne de base régulière, une distribution uniforme des pics et un bon effet de séparation.

Analyse du spectre d'empreintes digitales et de la détermination du contenu. Il existe des différences dans le nombre de pics chromatographiques, le temps de rétention et la zone de pic au même temps de rétention dans le spectre d'empreintes digitales des échantillons de différentes origines du marteau à tige de fer Fu Mao ; les résultats de l'évaluation de la similarité des spectres d'empreintes digitales de 15 lots de matières médicinales sont compris entre 0,769 et 0,952 ; l'analyse en grappes a permis de classer les échantillons S1 et S2 dans la classe I ; les échantillons S3~S5 dans la classe II ; les échantillons S6~S13 dans la classe III ; et les échantillons S14 et S15 dans la classe IV. Ces résultats concordent avec ceux de l'analyse en composantes principales. L'analyse des composantes principales a été utilisée pour sélectionner les composantes caractéristiques communes, identifier les facteurs déterminants et fournir des références pour l'évaluation de la qualité des matériaux médicinaux du marteau de Fumao. L'analyse en composantes principales utilise des valeurs propres supérieures à 1,2 comme critère d'extraction, et lorsque le taux de contribution à la variance cumulée est supérieur à 80%, cinq composantes principales sont obtenues, qui peuvent représenter la plupart des informations des pics communs dans le spectre de l'empreinte digitale du marteau à tige de fer Fu Mao. Les résultats de la détermination de la teneur montrent que les teneurs en épiaconitine, en Song Guoling et en aconitine sont relativement élevées et que des études bibliographiques antérieures ont montré qu'elles ont toutes des activités anti-inflammatoires et analgésiques. Toutefois, la teneur en 3-acétylaconitine est généralement faible dans les différents échantillons et n'est pas utilisée comme indicateur de contrôle de la qualité pour Fuzhong Iron Hammer. Par conséquent, sur la base des résultats de la détermination de la teneur et de l'analyse des composantes principales, cette expérience a utilisé simultanément six composantes caractéristiques, à savoir 2, 3, 4 (12 épiaconitine), 5 (Song Guoling), 6 et 15 (aconitine), qui contribuent de manière significative aux cinq composantes principales et présentent de grandes surfaces de pics. Parmi eux, les pics 2, 3 et 6 sont inconnus et peuvent être confirmés par spectrométrie de masse afin d'étudier s'ils peuvent être utilisés comme indicateurs de contrôle de qualité pour le stade ultérieur du Fu Mao Iron Hammer.

Les résultats de la détermination de la teneur indiquent que Yushu (S3), Jiuzhi (S4) et Maqin (S5) dans la zone de production de Qinghai ont une teneur en alcaloïdes plus élevée ; Wang Rong et al. ont déterminé la teneur en alcaloïdes du marteau de fer de Fumao à Guoluo, Yushu, Haidong et Guyuan, Ningxia. Les résultats ont montré que la teneur en alcaloïdes était la plus élevée dans le marteau de fer de Fumao à Guoluo Banma et Yushu, ce qui est cohérent avec les résultats de cette étude. La quantité totale d'aconitine est la plus élevée parmi les quatre composants, tandis que la quantité totale de 3-acétylaconitine est la plus faible, ce qui correspond aux résultats des recherches de Zhao Meiyu. Les zones de production les plus riches en aconitine, Song Guoling, aconitine et 3-acétylaconitine sont la ferme forestière de Jiangxi à Yushu, Qinghai, l'aéroport de Maqin à Qinghai, Aba à Sichuan et Guinan à Qinghai ; la quantité totale des quatre alcaloïdes dans les échantillons de la ferme forestière de Jiangxi et de l'aéroport de Maqin était également la plus élevée. Il existe des différences dans la qualité des matières médicinales telles que le Fu Mao Tie Ban Hammer dans différentes régions, qui peuvent être dues à des facteurs tels que l'environnement de croissance, le climat, le sol, la période de collecte et les années de croissance des matières médicinales, qui affectent l'accumulation des métabolites secondaires dans les matières médicinales, entraînant des différences dans la similarité et le contenu des matières médicinales.

La pharmacopée chinoise ne couvre pas le contrôle de qualité par CLHP de l'herbe médicinale Fu Mao Tie Ban Zhong. Par conséquent, dans cette étude, la méthode HPLC-DAD a été utilisée pour établir le spectre d'empreintes digitales de Fu Mao Tie Ban Zhong, et la teneur en quatre composants alcaloïdes a été déterminée. Parallèlement, l'évaluation de la similarité, l'analyse en grappes et l'analyse en composantes principales ont été utilisées pour évaluer de manière exhaustive la qualité du Fu Mao Tie Ban Zhong de différentes origines. Les trois méthodes ont été mutuellement vérifiées et complétées, ce qui a permis d'éviter l'inconvénient de l'évaluation de la qualité des plantes médicinales basée sur la teneur d'un seul composant et de fournir une référence pour l'évaluation de la qualité des plantes médicinales Fu Mao Tie Ban Zhong.