Étude comparative des spectres caractéristiques UPLC et des teneurs en composants multi-index de différentes spécifications de matières médicinales Qingpi
Le Qingpi a été mentionné pour la première fois dans le livre "Sac de perles". Li Shizhen a déclaré : "L'écorce de Qingju était inutile dans les temps anciens, mais ce n'est que sous la dynastie Song que les experts médicaux ont commencé à l'utiliser". Ce n'est que sous la dynastie Song que l'on a comparé les écorces d'orange immatures et matures et que l'on a découvert qu'elles avaient des effets médicinaux légèrement différents, d'où la distinction entre l'écorce de Qingju et l'écorce de Huangju. Le Qingpi désigne la peau du fruit séché ou non mûr du Citrus reticulata Blanco et de ses variétés cultivées de la famille des Rutaceae. Il existe deux spécifications différentes pour le Qingpi utilisé en médecine : la collecte des jeunes fruits qui tombent du sol entre mai et juin, leur séchage au soleil, communément appelé "Geqingpi" ; la récolte des fruits immatures entre juillet et août, la coupe longitudinale en quatre pétales de la peau à la base, l'élimination de tous les pétales et le séchage au soleil, communément appelé "peau verte à quatre fleurs". La peau verte est de nature chaude, avec un goût amer et piquant. Elle renvoie aux méridiens du foie, de la vésicule biliaire et de l'estomac. Elle a pour effet d'apaiser le foie et de décomposer le qi, de réduire l'accumulation et de résoudre la stagnation. Il est utilisé pour les douleurs thoraciques et costales, les hernies, les fétiches mammaires, les abcès mammaires, l'accumulation d'aliments et la stagnation du qi, ainsi que la distension et les douleurs abdominales. Les principaux composants du Qingpi sont les huiles volatiles, les flavonoïdes, les acides aminés, etc. Des études pharmacologiques modernes ont montré que le qingpi a des effets régulateurs sur le tractus gastro-intestinal, favorise l'écoulement de la bile, a des effets antiarythmiques, des effets expectorants et traite la mastite. Les deux spécifications de la peau verte ont des indications fonctionnelles légèrement différentes. Un type de peau verte se concentre principalement sur l'élimination de la stagnation du qi, tandis que l'autre type se concentre sur la régulation du foie et du qi.
En outre, les deux ont également de légères différences dans leur composition. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise a établi différentes réglementations sur les caractéristiques et l'identification des différentes spécifications de l'écorce verte, et les éléments de détermination de la teneur n'ont que des exigences limites pour l'hespéridine. Les résultats des recherches de Li et al. ont montré que la teneur en hespéridine et en sinoménine du Geqingpi était plus élevée que celle du Sihuaqingpi, tandis que la teneur en N-méthylamine et en huile volatile était plus faible. La tendance des teneurs élevées et faibles des quatre composants dans deux spécifications provenant de régions différentes était fondamentalement la même. Zhao et al. ont utilisé la GC-MS pour analyser les huiles volatiles d'Eucommia ulmoides et d'Eucommia ulmoides, et ont découvert que neuf composés, dont le géraniol, le nérolidol et l'α-isoterpinène, étaient propres à Eucommia ulmoides. Les principaux composants, le limonène et le linalol, étaient plus de deux fois supérieurs à ceux d'Eucommia ulmoides, tandis que la teneur des autres composants variait considérablement. Yi et al. ont également mis en évidence certaines différences dans la composition du Geqingpi et du Sihuaqingpi en utilisant la chromatographie en phase gazeuse et la chromatographie en phase liquide pour étudier leurs composants. Les études susmentionnées indiquent toutes qu'il existe des différences dans la composition chimique du geqingpi et du sihuaqingpi.
Cette étude a établi des spectres caractéristiques de Qingpi et de Sihua Qingpi par chromatographie liquide à ultra haute performance (UPLC), combinés à des méthodes chimiométriques, afin de comparer les différences entre les deux spécifications du Qingpi et de comparer la teneur de cinq ingrédients efficaces dans les deux spécifications des matériaux médicinaux du Qingpi, fournissant ainsi une référence pour améliorer les normes de quantité du Qingpi dans les deux spécifications.

 

Préparation de la solution d'essai. Cette étude a utilisé une analyse factorielle unique pour évaluer les effets des solvants d'extraction (méthanol, méthanol 70%, méthanol 50%, éthanol, éthanol 70%, éthanol 50%), des méthodes d'extraction (extraction par ultrasons, chauffage à reflux) et des durées d'extraction (15, 30, 45 minutes) sur les spectres caractéristiques et la détermination de la teneur de chaque composant, 30, 45 minutes) sur les spectres caractéristiques et la détermination de la teneur de chaque composant, avec le pic chromatographique "surface totale du pic/taille de l'échantillon" et les teneurs en sinoménine, hespéridine, naringine et hespéridine comme indicateurs d'évaluation. Les résultats ont montré que le chauffage à reflux avec du méthanol 70% pendant 30 minutes avait le meilleur effet.
Établissement et analyse des cartes de caractéristiques. Les résultats de l'étude des cartes de caractéristiques ont montré qu'il y avait sept pics communs dans les cartes de caractéristiques UPLC du Geqingpi et du Sihuaqingpi. Cinq composants caractéristiques du Geqingpi et du Sihuaqingpi ont été identifiés à l'aide de normes de référence, à savoir la sinoménine, la naringine, l'hespéridine, la naringine et l'hespéridine. Nous avons étudié différentes phases aqueuses (acide phosphorique 0,1% et acide formique 0,1%), deux types différents de colonnes chromatographiques Waters ACQUITY HSS T3 (100mm × 2,1mm, 1,8 μ m), YMC Triart C18 (100mm × 2,1mm, 1.9 μ m), et ont comparé les effets des différentes longueurs d'onde de détection (275nm et 284nm), des températures de colonne (38, 40, 42 ℃) et des débits (0,28, 0,30, 0,32mL/min) sur les pics chromatographiques des spectres caractéristiques du Qingpi. Les résultats ont montré qu'en utilisant la colonne chromatographique Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m) avec 0,1% d'acide formique comme phase aqueuse, dans les conditions chromatographiques de longueur d'onde de détection de 275 nm, de température de colonne de 40 ℃, et de débit de 0,30mL/min, les pics chromatographiques ont été obtenus. Le degré de séparation est bon, la ligne de base est stable, le nombre de pics chromatographiques est élevé et le signal est également élevé.
Différence de composition chimique entre le Geqingpi et le Sihuaqingpi. Les spectres caractéristiques UPLC des différentes spécifications des matières médicinales Qingpi établies dans cette étude ont permis d'identifier 7 pics communs au Geqingpi et au Sihuaqingpi, dont 5 pics caractéristiques ont été identifiés. Le pic 1 a été déterminé comme étant la sinoménine ; le pic 3 est le glycoside de l'écorce de pomelo de Yunxiang ; le pic 4 est l'hespéridine ; le pic 6 est l'extrait de chenpi ; le pic 7 est l'extrait d'écorce d'orange. Une analyse plus poussée révèle que les composants chimiques représentés par les pics 1, 4 et 2 sont les composants différentiels entre ces deux spécifications des herbes médicinales Qingpi. Par conséquent, ces trois composants peuvent être utilisés comme points d'entrée pour une analyse plus approfondie afin de distinguer ces deux spécifications des herbes médicinales Qingpi.
Les flavonoïdes sont les principaux ingrédients actifs du Qingpi. Les résultats de la détermination de la teneur en cinq flavonoïdes connus dans le Geqingpi et le Sihuaqingpi ont montré que la teneur en sinoménine et en hespéridine dans le Geqingpi était supérieure à celle du Sihuaqingpi, tandis que la teneur en naringine et en hespéridine dans le Geqingpi était inférieure à celle du Sihuaqingpi. Dans l'ensemble, la teneur en naringine des deux spécifications du Qingpi Yunxiangyupi était relativement similaire. L'analyse du test t de l'échantillon indépendant a montré que les différences entre la sinoménine, l'hespéridine et la naringine étaient statistiquement significatives. Ce résultat est conforme aux conclusions des recherches de Li et al. Outre les flavonoïdes étudiés dans cette expérience, l'huile volatile est également l'un des composants efficaces des plantes médicinales Qingpi. Les recherches de Zhao sur les huiles volatiles du Geqingpi et du Sihuaqingpi ont montré que neuf composés, dont le géraniol, le nérolidol et l'α-isoterpinène, sont propres au Geqingpi. Les principaux composants, le limonène et le linalol, sont plus de deux fois supérieurs à ceux du Sihuaqingpi. Dans l'application clinique, les indications fonctionnelles de Four Flower Green Skin sont plus douces que celles de Geqing Skin, ce qui peut être lié à la teneur plus faible en ingrédients actifs tels que l'hespéridine et la sinoménine, ainsi qu'en huile volatile dans Four Flower Green Skin par rapport à Geqing Skin. Selon la littérature pertinente, le Geqingpi est un jeune fruit récolté entre mai et juin ; la peau verte à quatre fleurs est récoltée sur des fruits immatures en juillet et août, et la différence entre les deux réside dans le moment de la récolte et le stade de maturité. Les résultats ci-dessus montrent que les différents stades de croissance et de développement peuvent affecter l'accumulation des principes actifs dans le Qingpi. Toutefois, au cours de la période de reproduction et de développement, les principes actifs du Qingpi ne présentent pas simplement une tendance à l'augmentation ou à la diminution, mais plutôt une certaine augmentation et une certaine diminution : L'extrait de chenpi et l'hespéridine présentent une tendance à la hausse ; la simuline, l'hespéridine et la naringine présentent une tendance à la baisse. Pour savoir si les différences dans ces teneurs conduisent directement ou indirectement à des efficacités différentes selon les spécifications du Qingpi, il faut procéder à d'autres expériences pharmacologiques pour le prouver. Sur la base de la différence de teneur en cinq ingrédients actifs dans deux spécifications différentes de Qingpi, combinée à l'importance différente des deux effets, nous pouvons mieux mettre en œuvre la différenciation et le traitement des syndromes de la médecine traditionnelle chinoise et améliorer l'efficacité du traitement si la prescription est étiquetée séparément pour être utilisée dans des applications cliniques. Par ailleurs, si les normes actuelles de la pharmacopée peuvent établir des normes de qualité distinctes pour le Geqingpi et le Sihuaqingpi, elles peuvent être plus propices au contrôle de la qualité des matériaux médicinaux du Qingpi.