Recherche sur les marqueurs caractéristiques du chrysanthème basée sur les spectres caractéristiques HPLC combinés à la chimiométrie
Le chrysanthème est l'inflorescence de la tête séchée de la plante Asteraceae Chrysanthemum morifolium Ramat. Il contient principalement des parties actives telles que des flavonoïdes, des huiles volatiles, des acides organiques et des oligo-éléments. Il a pour effet de disperser le vent, de dissiper la chaleur, de calmer le foie, d'améliorer la vision, de dissiper la chaleur et de désintoxiquer. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise inclut des variétés de chrysanthèmes telles que "Boju", "Chuju", "Gongju", "Hangju" et "Huaiju" en fonction de leur lieu d'origine et de leurs méthodes de traitement. En tant qu'herbe médicinale chinoise aux propriétés médicinales et comestibles, le chrysanthème présente les caractéristiques d'une grande variété et d'une composition complexe d'ingrédients. Cependant, les différentes variétés de chrysanthèmes présentent des différences significatives de composition chimique en raison de leurs environnements de croissance différents, de leurs méthodes de culture et de traitement, et de leur qualité inégale, ce qui se traduit par des effets thérapeutiques cliniques différents. Actuellement, l'édition 2020 de la pharmacopée chinoise utilise le contenu de trois composants chimiques, l'acide chlorogénique, la lutéoline-7-O - β - D-glucoside et l'acide 3,5-O-dicaffeoylquinique, comme indicateurs d'évaluation, ce qui rend difficile l'évaluation complète de la qualité des matériaux médicinaux du chrysanthème.
Le spectre caractéristique de la médecine traditionnelle chinoise peut caractériser les changements globaux de la qualité interne de la médecine traditionnelle chinoise. De plus en plus de médicaments traditionnels chinois utilisent l'établissement de spectres d'empreintes caractéristiques pour le contrôle de la qualité, parmi lesquels la technologie des empreintes caractéristiques HPLC est également couramment utilisée pour l'identification des variétés de chrysanthèmes et la recherche sur le contrôle de la qualité. Le marqueur de qualité de la médecine traditionnelle chinoise (Q-Marker) est composé de composants chimiques exclusifs, cliniquement efficaces et contrôlés qui sont liés aux propriétés fonctionnelles de la médecine traditionnelle chinoise. Il peut refléter la sécurité et l'efficacité de la médecine traditionnelle chinoise et peut être utilisé pour construire un système d'évaluation de la qualité moderne, complet, systématique et quantitatif pour la médecine traditionnelle chinoise. Sur la base du Q-Marker, l'intégration des spectres d'empreintes digitales et des méthodes chimiométriques permet de découvrir les composants qui reflètent les caractéristiques communes des plantes médicinales ou des formules et d'établir un système d'évaluation de la qualité multidimensionnel conforme aux caractéristiques de la médecine traditionnelle chinoise. Cela pourrait constituer une meilleure solution pour la supervision scientifique de la médecine traditionnelle chinoise.
Sur la base de recherches antérieures sur les chrysanthèmes, cette étude a établi des chromatogrammes caractéristiques CLHP de différentes variétés de chrysanthèmes, combinés à des méthodes chimiométriques pour cribler la base de substance commune des chrysanthèmes en tant que marqueurs caractéristiques. Dans le même temps, des différences significatives dans les marqueurs caractéristiques entre différentes variétés de chrysanthèmes ont été examinées, fournissant une base scientifique pour l'évaluation de la qualité globale, l'identification des variétés et l'évaluation des caractéristiques d'une seule variété de chrysanthèmes.

 

Sélection des méthodes d'extraction. Cette expérience a étudié les effets de différents solvants (méthanol 70%, méthanol 50%, méthanol 80%), méthodes d'extraction (extraction par ultrasons et extraction par chauffage à reflux) et durées d'extraction (30, 35, 40 minutes) sur les chromatogrammes, et a déterminé l'utilisation de l'extraction par ultrasons du méthanol 70% pendant 40 minutes en tant que méthode d'extraction.
Optimisation des conditions chromatographiques. Cette expérience a examiné différentes colonnes chromatographiques (colonne Agilent XDB-C18, colonne Phenomenex Luna C18)、 Les longueurs d'onde de détection (220, 254, 330, 348nm) et les systèmes de phase mobile (acétonitrile -0,1% eau d'acide phosphorique, acétonitrile -0,1% eau d'acide formique, acétonitrile -0,2% eau d'acide acétique) ont été utilisés, et la forme des pics chromatographiques, le nombre de pics et la résolution ont été utilisés comme indicateurs d'évaluation. Enfin, une colonne chromatographique Agilent XDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 µ m) a été sélectionnée avec une longueur d'onde de détection de 348 nm et une solution aqueuse d'acétonitrile -0,2% d'acide acétique comme système de phase mobile.
Les cartes de contrôle des cinq variétés différentes de chrysanthème établies dans le cadre de l'expérience présentent des pics communs différents et des pics caractéristiques identifiés. Dans les cartes de contrôle établies pour Boju, Chuju, Gongju, Hangju et Huaiju, 21, 20, 25, 22 et 22 pics communs ont été respectivement identifiés, et 14, 14, 12, 13 et 13 pics caractéristiques principaux ont été identifiés par comparaison avec l'échantillon de contrôle ; Dans le spectre de contrôle du chrysanthème généré à partir de 50 lots d'échantillons de chrysanthème, 17 pics communs ont été identifiés, y compris l'acide néochlorogénique, l'acide chlorogénique, l'acide cryptochlorogénique, la lutéoline-7-O - β - D-glucoside, l'acide isochlorogénique B, l'acide 3,5-O-dicaffeoylquinique, l'apigénine 7-O - β - D-glucoside, l'acide isochlorogénique C, la vanillolignine 7-O - β - D-glucoside, la vanillogénine, l'apigénine et la lutéoline. L'acide caféique n'ayant pas été identifié à Gongju, Hangju et Huaiju, et l'acétine n'ayant pas été identifiée à Gongju, l'acide caféique et l'acétine n'ont pas été utilisés comme pics communs dans le spectre de contrôle du chrysanthème. La comparaison des surfaces des pics a révélé des différences significatives dans les surfaces des pics correspondant à la lutéoline-7-O - β - D-glucoside, à l'apigénine, à l'apigénine 7-O - β - D-glucoside et à l'acide isochlorogénique C entre les cinq spectres de contrôle du chrysanthème. Dans les spectres de contrôle de Gongju et Hangju, les surfaces des pics de lutéoline-7-O - β - D-glucoside et d'acide isochlorogénique C étaient plus importantes, tandis que dans les trois autres spectres de contrôle de chrysanthème, leurs surfaces de pics étaient plus petites ; Dans les spectres de contrôle de Boju, Chuju et Huaiju, la surface de pic de l'apigénine est relativement importante, tandis que dans les spectres de contrôle de Gongju et Hangju, sa surface de pic est très petite ; La surface de pic de l'apigénine 7-O - β - D-glucoside est plus importante dans le spectre de contrôle du chrysanthème de Hangzhou, tandis qu'elle est plus petite dans les quatre autres spectres de contrôle du chrysanthème. Ainsi, en comparant les différences entre les pics caractéristiques des cinq variétés de chrysanthèmes, nous pouvons refléter de manière préliminaire les différences entre les différentes variétés de chrysanthèmes, ce qui indique qu'il existe certaines différences dans les types et les contenus des composants chimiques dans les différentes variétés de chrysanthèmes.
Les résultats de l'évaluation de la similarité montrent une similarité intra-espèce élevée, indiquant que les différences entre les chrysanthèmes de la même variété provenant de différents lots sont relativement faibles ; la similarité inter-espèce faible est de 0,391-0,690, indiquant des différences significatives dans la composition chimique des différentes variétés de chrysanthèmes. L'AC, l'ACP et l'OPLS-DA peuvent classer avec précision cinq variétés différentes de chrysanthèmes en cinq catégories. Bien que les cinq variétés de chrysanthèmes soient différentes, elles présentent également des similitudes. L'ACP et l'OPLS-DA divisent les cinq régions spécifiques en deux catégories : gauche et droite. Parmi elles, Boju, Chuju et Huaiju sont classées dans une seule catégorie (à des fins médicinales), tandis que Gongju et Hangju sont classées dans une seule catégorie (à des fins médicinales). L'analyse chimiométrique montre que la coumarine-7-O - β - D-glucoside, l'acide isochlorogénique C et l'apigénine sont les principaux composants différentiels des deux catégories, qui peuvent être utilisés comme marqueurs caractéristiques pour distinguer les différences entre les deux types de chrysanthèmes. OPLS-DA a criblé 7 composants marqueurs principaux et a identifié 4 composants, dont l'apigénine, l'apigénine 7-O - β - D-glucoside, la lutéoline-7-O - β - D-glucoside et l'acide isochlorogénique, en les comparant à des normes de référence mixtes. Ces composants peuvent être utilisés comme marqueurs caractéristiques pour distinguer les différences entre les différentes variétés de chrysanthèmes, ce qui est confirmé par la comparaison des surfaces des pics. Parmi eux, les pics 24, 11 et 20 n'ont pas été identifiés et leur rôle dans l'évaluation de la qualité du chrysanthème doit faire l'objet de recherches plus approfondies. Dix composants dont les valeurs VIP sont inférieures à 1, notamment l'acide isochlorogénique B, l'acide 3,5-O-dicaffeoylquinique, la vanilline, l'acide cryptochlorogénique, l'acide chlorogénique, l'acide néochlorogénique, la lutéoline et le 7-O - β - D-glucoside de vanilline, peuvent être utilisés comme marqueurs caractéristiques de l'ensemble du chrysanthème.
En résumé, cette expérience a établi et analysé les spectres caractéristiques HPLC de cinq variétés de chrysanthèmes, comparé les pics caractéristiques et leurs surfaces de pics correspondantes, et effectué une évaluation de la similarité, démontrant de manière préliminaire les différences entre les différentes variétés de chrysanthèmes. En utilisant des méthodes chimiométriques pour analyser et sélectionner les mêmes substances parmi les différentes variétés de chrysanthèmes en tant que marqueurs caractéristiques représentant l'efficacité du chrysanthème et reflétant les différences entre les différents chrysanthèmes, une base scientifique est fournie pour l'identification des variétés de chrysanthèmes et l'évaluation de la qualité.