Évaluation de la qualité de la décoction standard de Dengzhanhua sur la base de l'atlas des empreintes digitales et du test d'activité antioxydante in vitro
Dengzhan Hua, également connu sous le nom de Dengzhan Xixin, est une plante de la famille des Asteraceae appelée Erigeron breviscapus (Vant.) Hand- Mazz. La plante entière séchée est récoltée au printemps et à l'automne et incluse dans l'édition 2020 de la pharmacopée chinoise. Elle a pour effet de favoriser la circulation sanguine, de débloquer les collatérales, de soulager la douleur, de dissiper le vent et de chasser le froid. Des études pharmacologiques modernes ont montré que Scutellaria baicalensis a des effets neuroprotecteurs, cardiovasculaires et cérébrovasculaires, antioxydants, anticancéreux et d'autres effets pharmacologiques. Le cancer et les maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires sont étroitement liés aux dommages oxydatifs causés par un excès d'espèces réactives de l'oxygène telles que les radicaux anions superoxydes, les radicaux hydroxyles et les radicaux lipides dans l'organisme. La prise appropriée d'antioxydants peut éliminer l'excès de radicaux libres dans l'organisme, ce qui est bénéfique pour la santé humaine et pour la prévention et le contrôle des maladies. La littérature indique que l'allumeur de réverbères possède une excellente activité antioxydante. La composition chimique du briquet est complexe et la relation entre la composition chimique et l'effet du dosage actif n'est pas encore très claire. L'empreinte chimique de la médecine traditionnelle chinoise a été largement utilisée pour l'évaluation de la qualité de la médecine chinoise en raison de sa capacité à caractériser les composants des substances contenues dans la médecine chinoise, ce qui est conforme à la nature globale et floue de la théorie de la médecine traditionnelle chinoise. Cependant, son application est de plus en plus limitée car elle ne reflète que les informations chimiques de la médecine chinoise traditionnelle et ne parvient pas à établir une relation avec ses effets thérapeutiques. En 2020, le Centre d'évaluation des médicaments de l'Administration nationale des produits médicaux a publié les "Directives techniques pour la détection des effets biologiques de la médecine traditionnelle chinoise (essai)", préconisant la mise en place de méthodes de contrôle de la qualité liées à l'activité pour garantir la sécurité et l'efficacité de la médecine traditionnelle chinoise dans les applications cliniques. L'étude de la "relation spectre-effet" de la médecine traditionnelle chinoise permet d'établir un lien étroit entre l'expression caractéristique globale des principes actifs et les effets d'indicateurs et de cibles multiples, et de déterminer raisonnablement la base de la substance pharmacologique, ce qui est également conforme aux caractéristiques de la médecine traditionnelle chinoise.

La décoction standard de médecine chinoise est une décoction unique de médecine traditionnelle chinoise préparée par des processus standardisés, utilisée pour une médication clinique standardisée, garantissant la précision de la médication et la cohérence des mesures. Elle sert de référence standard pour déterminer si les particules de la formule de médecine chinoise sont fondamentalement conformes à la décoction clinique. La proposition de décoction standard fournit une référence matérielle pour assurer la cohérence de la qualité des formes posologiques basées sur la décoction de la médecine traditionnelle chinoise et pour établir des méthodes efficaces d'évaluation de la qualité. Cet article prend la décoction standard de Dianzhanhua comme objet de recherche et vérifie son effet antioxydant par des expériences in vitro de piégeage des radicaux libres DPPH et ABTS. En même temps, son empreinte HPLC est établie et la teneur totale en flavonoïdes est déterminée ; en utilisant l'analyse de corrélation bivariée pour sélectionner les composants antioxydants significativement corrélés, l'analyse de cluster (CA) et l'analyse des composants principaux (PCA) ont été effectuées sur les composants sélectionnés, et l'analyse discriminante orthogonale des moindres carrés partiels (OPLS-DA) a été utilisée pour identifier les composants différentiels ; évaluer la qualité de son effet antioxydant pour fournir une base pour le contrôle de la qualité de l'allumeur de réverbères et de ses préparations.

 

 

Les radicaux libres DPPH et ABTS sont souvent utilisés comme indicateurs pour mesurer l'activité antioxydante in vitro des ingrédients actifs. La méthode DPPH détermine la capacité antioxydante des substances médicinales en se liant aux substances à paires d'électrons solitaires, tandis que la méthode ABTS détermine la capacité antioxydante en se liant aux substances hydrophiles et lipophiles. Les principaux principes actifs de Scutellaria baicalensis sont les flavonoïdes. Dans cette étude, la teneur totale en flavonoïdes de 16 lots de décoction standard de Scutellaria baicalensis a été déterminée comme étant comprise entre 2,85 et 11,28 mg/ml. Son activité antioxydante in vitro a été évaluée en piégeant les radicaux libres DPPH et ABTS en tant qu'indicateurs antioxydants. La valeur IC50 de DPPH était de 1,00-3,39mg/mL, et la valeur IC50 d'ABTS était de 0,254-2,16mg/mL, ce qui indique que la capacité de la décoction standard de Scutellaria baicalensis à piéger les radicaux libres ABTS est plus forte que celle de piéger les radicaux libres DPPH. L'analyse de corrélation bivariée de Pearson a montré que les deux activités antioxydantes in vitro (valeurs IC50) étaient significativement corrélées négativement avec la teneur totale en flavonoïdes (P<0,01), avec des coefficients de corrélation de -0,714 et -0,841, respectivement, ce qui indique que plus la valeur IC50 est faible et plus la teneur totale en flavonoïdes est élevée, plus la capacité antioxydante de l'extrait est forte. Par conséquent, la teneur en flavonoïdes totaux est l'un des indicateurs qui affectent le pouvoir antioxydant de Scutellaria baicalensis et peut être utilisée comme indicateur pour évaluer le pouvoir antioxydant de Scutellaria baicalensis.
Lors de l'établissement des spectres d'empreintes digitales, les colonnes chromatographiques Agilent ZORBAX-SB C18, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 et Agilent Extend C18 ont fait l'objet d'une étude expérimentale. La comparaison du nombre de pics chromatographiques et du degré de séparation a montré que la colonne ZORBAX Eclipse XDB-C18 d'Agilent était plus performante. Nous avons étudié différents débits (0,8, 1, 1,2 ml/min) et nous avons constaté que la colonne 0.8 mL/min avait un meilleur effet de séparation ; Nous avons étudié les systèmes binaires d'acide formique 0,1% eau méthanol, d'acide formique 0,1% eau acétonitrile, et d'acide formique 0,1% eau acétonitrile tétrahydrofurane avec différents gradients. Il a été constaté que l'effet de séparation de l'acide formique 0,1% eau acétonitrile tétrahydrofurane était meilleur et que la ligne de base était relativement stable ; en passant au crible la longueur d'onde de détection de 200-400 nm, les résultats ont montré que les pics chromatographiques obtenus en changeant la longueur d'onde à différentes périodes de temps étaient multiples et que la ligne de base était stable. Enfin, il a été déterminé que la longueur d'onde était de 252 nm de 0 à 9 minutes et de 330 nm de 9 à 60 minutes.
Ces dernières années, la littérature sur les spectres d'empreintes digitales des plantes médicinales telles que Scutellaria baicalensis a principalement utilisé la méthode HPLC, qui évalue la similarité des spectres d'empreintes digitales et détermine les pics communs ; la littérature a utilisé l'AC et l'ACP pour la reconnaissance des motifs chimiques des spectres d'empreintes digitales et a classifié les matières médicinales, mais n'a pas effectué d'analyse approfondie des raisons des différences. Sur la base du spectre d'empreintes digitales de la plante médicinale Lampyridis au début de cet article, un spectre d'empreintes digitales de la décoction standard de Lampyridis a été établi, avec une similarité de 0,770-0,993, et 21 pics communs ont été obtenus. Huit composants connus ont été identifiés à l'aide de la substance de référence. Cette étude a utilisé une analyse de corrélation bivariée pour sélectionner 10 pics chromatographiques, à savoir les pics 3, 4 et 6 (acide chlorogénique), les pics 7, 11 et 13 (scutellarine B), le pic 14 (acide isochlorogénique B), le pic 15 (scutellarine A) et les pics 17 et 19 (acide isochlorogénique C), qui présentaient une corrélation négative significative avec la capacité de piégeage des radicaux libres DPPH (c'est-à-dire que plus la surface du pic commun est importante, plus la valeur IC50 est faible). Les coefficients de corrélation de Person étaient de -0,552, -0,733, -0,626 et -0,665, respectivement, -0,537, -0,518, -0,767, -0,754, -0,541 et -0,748, ce qui indique que les substances chimiques correspondantes sont les principaux ingrédients actifs dans le piégeage des radicaux DPPH. Treize pics chromatographiques, dont les pics 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (acide isochlorogénique A) et 19, ont été corrélés négativement de manière significative avec le piégeage des radicaux libres ABTS. Les coefficients de corrélation de Person étaient respectivement de -0,594, -0,861, -0,761, -0,829, -0,645, -0,583, -0,676, -0,721, -0,740, 0,574, -0,652, -0,720 et -0,518. Les substances correspondantes étaient les principaux ingrédients actifs pour la capture des radicaux libres ABTS. L'activité antioxydante (valeurs IC50) déterminée par deux méthodes antioxydantes était significativement corrélée avec les composants connus que sont l'acide chlorogénique, la scutellarine B, l'acide isochlorogénique B, la scutellarine A et l'acide chlorogénique C, ce qui indique que ces cinq composants sont les principales substances actives dans l'activité antioxydante de la scutellarine.
L'expérience a utilisé 10 pics communs significativement corrélés avec la DPPH et la teneur totale en flavonoïdes comme variables, et 13 pics communs significativement corrélés avec l'ABTS et la teneur totale en flavonoïdes comme variables pour l'analyse CA et PCA, respectivement. Les échantillons ont été divisés en deux catégories, à savoir les échantillons sauvages S014 et S016, et les 14 lots restants d'échantillons plantés. On suppose que cela peut être lié à des facteurs tels que l'environnement de croissance (lumière, altitude, latitude et longitude, etc.) et la période de récolte des fleurs de lanterne. Parallèlement, un modèle de notation pour la décoction standard de Scutellaria baicalensis a été établi avec ces composants comme variables. Le classement des scores pour les 16 lots de la décoction standard était fondamentalement cohérent avec le classement de l'activité antioxydante in vitro. Sur la base de l'AC et de l'ACP, l'auteur a poursuivi l'analyse OPLS-DA et identifié quatre composantes différentielles principales liées à l'élimination des radicaux libres DPPH : les pics 11, 15 (scutellarine), 14 (acide isochlorogénique B) et le pic 13 (scutellarine) ; les quatre composantes différentielles principales liées à l'élimination des radicaux libres ABTS sont les pics 11, 15, 14 et le pic 8 (scutellarine). Les résultats de la recherche suggèrent que lors du contrôle de la qualité de Scutellaria baicalensis, outre le contrôle de la teneur élevée en Scutellaria baicalensis B (c'est-à-dire la baicaline), d'autres indicateurs de contrôle de la qualité ayant une forte activité pharmacologique devraient être ajoutés de manière appropriée.
En résumé, cette étude combine l'empreinte chimique et l'évaluation de l'activité biologique, et explore les principes actifs antioxydants de la décoction standard de Lampyridis par le biais d'une recherche de corrélation spectrale. La méthode établie est facile à utiliser et les résultats sont fiables, ce qui peut servir de base à d'autres recherches sur les effets pharmacologiques et l'évaluation de la qualité de Lampyridis. À l'avenir, la taille de l'échantillon pourra être augmentée et la technologie de la chromatographie liquide et de la spectrométrie de masse pourra être utilisée pour identifier les pics communs des composants inconnus dans la décoction standard, étudier leurs activités pharmacologiques et étudier de manière exhaustive la relation spectre-effet des activités pharmacologiques multiples, fournissant ainsi une base pour la recherche sur la qualité de Scutellaria baicalensis.