Estudio de la relación del efecto espectral entre la huella UPLC del fragmento óseo y la actividad de la fosfatasa alcalina en la célula de osteosarcoma humano MG63
Gu Duan Bu es el rizoma seco de Drynaria fortunei (Kunze) J. Sm., una planta ortopédica del dragón de agua. Es de naturaleza cálida, sabor amargo y pertenece a los meridianos de hígado y riñón. Tiene los efectos de curar y aliviar el dolor, tonificar los riñones y fortalecer los huesos, y disipar el viento y las manchas. Estudios farmacológicos y clínicos modernos han demostrado que los tónicos de fragmentos óseos tienen efectos como antiosteoporosis, favorecen la curación de fracturas, protegen los riñones, son antiinflamatorios y promueven el crecimiento de los dientes. Los estudios de composición química han demostrado que los principales principios activos de los tónicos para fragmentos óseos son flavonoides, triterpenoides, fenilpropanoides y fenoles. Un gran número de estudios han demostrado que los tónicos de médula ósea tienen importantes efectos terapéuticos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con los huesos, y los experimentos in vitro han demostrado que los tónicos de médula ósea pueden promover la capacidad de diferenciación osteogénica de los osteoblastos. Sin embargo, no se han publicado informes sobre los ingredientes activos específicos de los tónicos de médula ósea. La fosfatasa alcalina (ALP) es un biomarcador de la diferenciación y maduración de los osteoblastos, y los cambios en los niveles de actividad de la ALP pueden utilizarse para determinar la capacidad de diferenciación de los osteoblastos. Por lo tanto, este experimento analizó la relación entre la huella digital UPLC y el espectro de actividad ALP de las células MG63 de osteosarcoma humano, y exploró los principales componentes de los tónicos de fragmentos óseos utilizados para los osteoblastos.
El modo de evaluación de la eficacia del espectro de la medicina tradicional china consiste en combinar la huella dactilar de los componentes químicos con sus efectos farmacológicos, de modo que los componentes químicos de la huella dactilar reflejen los efectos farmacológicos correspondientes, y aclarar la relación entre los picos característicos de la huella dactilar y los efectos farmacológicos, determinar la base farmacológica de la sustancia correspondiente, y así llevar a cabo el control de calidad y la evaluación farmacológica de la medicina tradicional china.
En este estudio se establecieron espectros de huellas dactilares por UPLC de suplementos de fragmentos óseos crudos y calientes y se identificaron sus componentes químicos mediante la tecnología UPLC-Q-TOF-MS. Se utilizaron el análisis de correlación gris, el análisis de correlación bivariante y el método de mínimos cuadrados parciales para construir los espectros de huella dactilar de los suplementos de fragmentos óseos y la relación de efecto espectral de la actividad ALP, proporcionando una referencia para dilucidar la base de la sustancia farmacológica y el control de calidad de los suplementos de fragmentos óseos.

Este estudio utilizó el método UPLC combinado con la detección de longitud de onda múltiple para establecer espectros de huellas dactilares de suplementos de fragmentos óseos y productos calientes. Hubo 12 picos comunes entre diferentes lotes de suplementos de fragmentos óseos y productos calientes, y la similitud fue superior a 0,9, lo que indica una gran similitud y una diferenciación poco clara entre ambos. La ALP es un biomarcador de la diferenciación y maduración de los osteoblastos, y uno de los indicadores bioquímicos de la formación ósea. La capacidad de diferenciación de los osteoblastos puede determinarse mediante cambios en los niveles de actividad de la ALP. Estudios anteriores han demostrado que la suplementación con fragmentos óseos puede promover la diferenciación de los osteoblastos. En este estudio, se aplicaron suplementos de fragmentos óseos y escamas a células MG63 para analizar sus efectos sobre la actividad ALP. Los resultados indican que el mismo lote de fragmentos óseos puede promover significativamente la secreción de ALP por las células MG63 tras el escaldado con arena. Para investigar los ingredientes activos de la fragmentación y reparación ósea que promueven la diferenciación osteogénica de MG63, se realizó un análisis de correlación espectral entre la actividad de ALP y los picos característicos calibrados por espectros de huellas dactilares. Para analizar exhaustivamente la relación de efecto espectral entre los picos característicos del espectro de huella dactilar de parche de fragmento óseo y la actividad ALP, este experimento utilizó exhaustivamente tres métodos: análisis de correlación gris, análisis de correlación bivariante y análisis de regresión por mínimos cuadrados. Se encontró que el pico 4, el pico 5 y el pico 12 tienen una alta correlación con la actividad ALP y están correlacionados positivamente, contribuyendo en mayor medida a la actividad ALP y siendo variables importantes que afectan a la actividad ALP.
La tecnología UPLC-Q-TOF/MS tiene las características de fuerte selectividad, alta sensibilidad, pretratamiento sencillo de la muestra, alta precisión y alta resolución, lo que permite identificar de forma más exhaustiva y rápida los componentes químicos de los fragmentos óseos. Este estudio utilizó UPLC-Q-TOF/MS en modo de iones negativos para identificar 40 componentes en tónicos de fragmentos óseos. El componente identificado que contribuye significativamente a la actividad ALP es el pico 4 ácido cafeico-4-O - β - D-glucopiranósido; el pico 5 catequinas 7-glucósido; el pico 12 naringina y su actividad fueron validados. La naringina es un compuesto flavonoide, y la investigación farmacológica moderna ha demostrado que la naringina se puede utilizar para tratar o prevenir diversas enfermedades, como la osteoporosis, antioxidante, antitumoral, y la mejora de la lesión miocárdica. Las investigaciones existentes también indican que la naringina es un ingrediente activo importante en los tónicos para fragmentos óseos. Las actividades farmacológicas del ácido cafeico-4-O - β - D-glucopiranósido y del 7-glucósido de catequina aún no se han comunicado, por lo que se justifica la realización de nuevas investigaciones. Los resultados de este estudio tienen cierta importancia de referencia para el control de calidad y la investigación farmacológica de los tónicos de fragmentos óseos.