Estudio sobre la calidad de diferentes sanguijuelas primitivas y sus productos confundidos
La edición de 2020 de la Farmacopea de la República Popular China, denominada en lo sucesivo Farmacopea China, estipula que las sanguijuelas son los animales desecados enteros de la familia de las sanguijuelas, como la sanguijuela Whitman pigra Whitman, la sanguijuela Hirudo nipponica Whitman o la sanguijuela de hoja de sauce Whitman acranulata Whitman. Su sabor es salado, amargo y plano; tiene una pequeña toxina, que pertenece al meridiano del hígado. Tiene la función de romper la sangre y promover la circulación, eliminar la estasis sanguínea y eliminar el estancamiento. Se utiliza comúnmente para la estasis sanguínea y la obstrucción de meridianos, el tratamiento de masas, la hemiplejia por apoplejía y las caídas y lesiones. Los estudios han demostrado que los efectos farmacológicos de las sanguijuelas incluyen principalmente efectos anticoagulantes, antitrombóticos, antitumorales, hipolipidémicos y antiinflamatorios, y tienen aplicaciones clínicas muy amplias, como el tratamiento de la trombosis, la hiperlipidemia, la hipertensión, la diabetes, la prostatitis, el cáncer, las varices, la infertilidad, la cirrosis y otras enfermedades. Los principales componentes de las sanguijuelas son compuestos macromoleculares, que contienen principalmente proteínas y 17 tipos de aminoácidos, incluidos 8 aminoácidos esenciales para el cuerpo humano. El contenido de aminoácidos hidrolizados alcanza el 49,4%; Además, también contiene diversas sustancias como hirudina, heparina, histamina, hirudina, glicolípidos, esfenoides, esteroides y ésteres carboxílicos.
A través de la revisión de la literatura, se ha descubierto que la investigación actual sobre las sanguijuelas se centra en los mecanismos anticoagulantes y la determinación de aminoácidos, con limitados estudios exhaustivos sobre la calidad de las diferentes sanguijuelas primitivas y sus mezclas. Los estudios de identificación entre diferentes sanguijuelas primitivas y sus mezclas se basan principalmente en la identificación de rasgos según la edición 2020 de la Farmacopea China. El mercado de las sanguijuelas es caro y caótico, y la identificación tradicional por el aspecto por sí sola no puede evaluar rápida y eficazmente su calidad. Además, la identificación por apariencia no puede aplicarse a los extractos y preparados de sanguijuelas, lo que tiene ciertas limitaciones. Por lo tanto, es muy importante establecer un método de evaluación rápido, científico y eficaz. Este estudio utilizó HPLC para establecer el espectro característico y el método de determinación del contenido de sanguijuelas. Este método evalúa exhaustivamente las sanguijuelas y sus productos mezclados, proporcionando una base científica para la evaluación de la calidad de las sanguijuelas y sus productos mezclados.

Optimización de las condiciones cromatográficas. Sobre la base del establecimiento de un espectro característico, este estudio utilizó el mismo método para determinar el contenido de dos componentes característicos de la sanguijuela, el derivado carboxílico de la amina C de la sanguijuela y la amina B de la sanguijuela. Se utilizó un detector de matriz de diodos para realizar un barrido completo de la longitud de onda de la solución de ensayo en el intervalo de longitudes de onda de 200-400nm. Los resultados mostraron que los picos cromatográficos de cada componente principal presentaban una fuerte absorción UV a una longitud de onda de 254 nm. Por lo tanto, se utilizaron las mismas condiciones para analizar el espectro característico y el contenido de las muestras de sanguijuela.
Análisis de los resultados del mapa de características. La sanguijuela es el cuerpo entero desecado del animal de la familia de las sanguijuelas, la sanguijuela Whitmania pigra Whitman. Sus propiedades medicinales tienen forma de huso plano. La edición 2020 de la Farmacopea China sólo controla su calidad a través de la humedad, el contenido total de cenizas, las pruebas de acidez y alcalinidad, y la actividad antitrombina, y aún no ha realizado una caracterización diferencial entre los distintos sustratos. En este estudio, se establecieron los mapas característicos por HPLC del hirudo de diferentes orígenes y de sus adulterantes. Mediante la comparación de sustancias de referencia, se confirmó que el hirudo contiene cinco componentes: uracilo, hipoxantina, xantina, derivados C-carboxilo de hirudina, hirudina B. Según los informes de la literatura, los compuestos de pteridina mencionados tienen estructuras similares con los fármacos antiagregantes plaquetarios como el clopidogrel, y se cree que estos componentes pueden ser los componentes activos del hirudo para desempeñar la función antiagregante plaquetaria. Los efectos farmacológicos del hirudo más reportados son principalmente anticoagulantes, antitrombóticos y antiateroscleróticos. Además, existen actividades antitumorales, antiinflamatorias, antifibrosis y lipidémicas, lo que indica que los picos característicos seleccionados en este estudio están relacionados con el hirudo. Es de gran importancia aclarar las sustancias funcionales de las sanguijuelas que desempeñan actividades farmacológicas y promover la investigación secundaria y el desarrollo de fármacos. Al mismo tiempo, el método establecido puede identificar diferentes sanguijuelas primitivas y sus productos mezclados. El siguiente paso es continuar la investigación de aplicación de este método en extractos y preparaciones, proporcionando referencia para el desarrollo y utilización de materiales medicinales de sanguijuelas.
Análisis de los resultados de la determinación del contenido. Basándose en el estudio de mapas característicos, este estudio determinó cuantitativamente cinco componentes en las sanguijuelas, incluyendo tres compuestos nucleósidos, uracilo, hipoxantina, y dos compuestos esfenoides, derivados leechamina C-carboxilo y leechamina B. Según los informes existentes en la literatura, los compuestos nucleósidos y los compuestos esfenoides pueden utilizarse como indicadores de evaluación de la calidad de las sanguijuelas. Los resultados experimentales mostraron que existían ciertas diferencias en el contenido de uracilo e hipoxantina entre las distintas sanguijuelas primitivas y sus mezclas. El contenido medio de uracilo e hipoxantina estaba en el siguiente orden: sanguijuela>leech>willow leech>Philippine leech; El contenido medio de xantina es el siguiente: sanguijuela>sanguijuela>sanguijuela filipina>sanguijuela de la hoja del sauce; El contenido medio de derivados C-carboxilo de la amina de la sanguijuela es el siguiente: sanguijuela>sanguijuela>sanguijuela>sanguijuela filipina; El contenido medio de leechamina B es el siguiente: sanguijuela>sanguijuela>sanguijuela>sanguijuela filipina. La sanguijuela filipina no contiene leechamina B y el contenido de hipoxantina es significativamente inferior al de los otros tres sustratos. Por lo tanto, la determinación del contenido de los componentes mencionados puede utilizarse para distinguir entre sanguijuelas acuáticas (incluyendo sanguijuelas, sanguijuelas y sanguijuelas de hoja) y sanguijuelas medicinales (sanguijuelas filipinas); Además, el análisis PLS-DA utiliza las áreas de pico de 8 picos característicos de la muestra como variables, y las áreas de pico de los picos característicos están estrechamente relacionadas con el contenido de sus correspondientes componentes indicadores. Combinados con los resultados del análisis PLS-DA en "2.4.5", los valores VIP de los picos característicos correspondientes a la hipoxantina y la xantina son superiores a 1, y la sanguijuela de hoja de sauce no contiene xantina. El contenido medio de las otras tres xantinas primitivas también muestra diferencias significativas, lo que indica además que la selección de estos cinco componentes como indicadores de determinación del contenido tiene cierta validez científica.
El método establecido por nuestro instituto de investigación es preciso, sensible y tiene una buena especificidad. Puede analizar simultáneamente los espectros característicos y evaluar el contenido de los materiales medicinales de las sanguijuelas. Puede utilizarse como método de evaluación de la calidad de diferentes sanguijuelas primitivas y sus mezclas, proporcionando una referencia para la evaluación de la calidad de los materiales medicinales de sanguijuela.