Charakterisierung von Lipase hemmenden Wirkstoffen in Gougu-Blättern durch Dünnschichtchromatographie-Bioautographie-MSn-Methode
Ilex cornuta Lindl Ex Paxt ist eine in China weit verbreitete Pflanze der Gattung Ilex in der Familie Ilex. Die getrockneten Blätter von Gougu, einer traditionellen chinesischen Medizin, sind seit der Tang-Dynastie in vielen Kräutermonografien enthalten und haben eine über tausendjährige medizinische Geschichte. Nach dem Arzneibuch der Volksrepublik China (Ausgabe 2020, Band 1) ist der Geschmack der Blätter von Ligusticum barbarum bitter und kühl. Es gehört zu den Leber- und Nierenmeridianen und hat die Funktionen, Hitze zu beseitigen und Yin zu nähren, die Nieren zu unterstützen und die Leber zu beruhigen. Es wird bei Tuberkulose, Bluthusten, Knochendampf und Hitzewallungen, Schwindel und Schwindelgefühlen usw. eingesetzt. In der Volkskultur werden die zarten Blätter des Gougu wegen ihrer hitzelösenden Wirkung aufgebrüht und als Kuding-Tee getrunken. Die moderne Forschung hat gezeigt, dass die Blätter von Cornus officinalis reich an Triterpenoiden und deren Saponinen sind, die die wichtigsten Wirkstoffe darstellen. Darüber hinaus gibt es verschiedene Bestandteile wie Flavonoide, Polyphenole, Sterole usw., die verschiedene Wirkungen haben, z. B. Senkung der Blutfettwerte, Schutz vor Myokardischämie, Antioxidation, Immunsuppression und Bekämpfung der Fruchtbarkeit. Aufgrund der geringen Wirksamkeit und der erheblichen Nebenwirkungen der meisten Medikamente zur Gewichtsabnahme hat die lipidsenkende Wirkung der Blätter von Ligusticum barbarum allmählich die Aufmerksamkeit der Menschen auf sich gezogen. Wissenschaftler im In- und Ausland haben die chemischen Bestandteile von Ligusticum barbarum-Blättern ausgiebig erforscht, doch wurden für die Suche nach lipidsenkenden Wirkstoffen herkömmliche chemische Trennungsmethoden verwendet, die Nachteile wie Zeitaufwand, komplizierte Verfahren und Verlust von Wirkstoffen mit sich bringen.
Die Dünnschichtchromatographie mit Biolumineszenz ist eine Technik zum Screening von Arzneimitteln, die Identifizierung, Trennung und Aktivitätsbestimmung miteinander verbindet. In den letzten 20 Jahren wurde sie häufig für das schnelle Screening von Antioxidantien, Cholinesterase-Hemmern und Lipase-Hemmern eingesetzt. Gleichzeitig zeichnet sich diese Methode durch eine einfache Handhabung und niedrige Versuchskosten aus. Die direkte Ionisierungstechnologie bezieht sich auf eine neuartige Ionisierungstechnik, die für die schnelle massenspektrometrische Analyse von Proben mit komplexer Matrix ohne Vorbehandlung bei Atmosphärendruck eingesetzt wird. Dünnschichtchromatographie gekoppelt mit elektrostatischer feldinduzierter Sprühionisation und mehrstufiger Massenspektrometrie (TLC-EFISI-MSn) kann die strukturelle in-situ-Charakterisierung aktiver Komponenten in der Dünnschicht-Autoradiographie von Lycium barbarum Blättern realisieren. Diese direkte Ionisierungstechnologie kann Verbindungen auf Dünnschichtchromatographieplatten durch Mikrotröpfchenextraktion ohne zusätzliche Gas- und Heizvorrichtungen extrahieren und sie direkt unter der Wirkung eines elektrostatischen Feldes ionisieren, bevor sie zur Analyse in das Massenspektrometer gelangen; es handelt sich um eine Ionisierungsmethode, die einfach zu zerlegen, zu bedienen und schnell zu erkennen ist. Daher wird in diesem Artikel die Methode der Dünnschichtchromatographie mit biologischer Autoradiographie-Massenspektrometrie angewandt, um die Komponenten mit lipidsenkender Wirkung aus den Blättern von Ligustrum lucidum schnell zu identifizieren, was eine Grundlage für die Klärung der Substanzbasis der lipidsenkenden Wirkung von Ligustrum lucidum-Blättern darstellt.

In diesem Artikel wurde zunächst die Testprobe von Ligustrum lucidum-Blättern in zwei Systemen entwickelt: Chloroform-Ethylacetat-Methanol-Wasser (1:3:1:0,3, V/V/V/V) und Ethylacetat-Methanol-Wasser (6:2:1, V/V/V), um mehr Spots zu erhalten. Durch eine Dünnschichtchromatographie-Lipase-Hemmungs-Biolumineszenz-Untersuchung wurden 10 Spots mit Lipase-Hemmungsaktivität in Ligustrum lucidum-Blättern gescreent, und dann wurde die TLC EFISI MSn-Technologie für eine schnelle Strukturanalyse der oben genannten Spots verwendet. Auf der Grundlage von mehrstufigen Massenspektrometriedaten in Kombination mit Literaturberichten wurden mögliche Fragmentierungswege verschiedener Verbindungen spekuliert, und 15 mögliche Strukturen wurden vorläufig charakterisiert, die alle Triterpenoid-Saponine sind, darunter 9 Arbutin-Triterpenoide, 1 Oleanan-Triterpenoid und 5 18,19-Ring-Triterpenoide. Nach dem Vergleich mit der Referenzsubstanz wurden 12 Verbindungen validiert. Mit dieser Methode können Komponenten mit lipasehemmender Wirkung aus den Blättern von Cornus officinalis schnell untersucht und charakterisiert werden, was eine Grundlage für die Klärung der stofflichen Grundlage der lipidsenkenden Wirkung von Cornus officinalis-Blättern bietet.