Xihuangcao şifalı otlarının dört orijinal bitkisinin UPLC karakteristik spektrumlarının tanımlanması
Xihuang Otu, Beş Sırtın güneyinde, ısıyı temizleme ve rutubeti giderme, kanı soğutma ve stazı giderme etkisine sahip eşsiz bir Çin bitkisel ilacıdır. Nemli ısı sarılığı, abdominal distansiyon ve hipokondriyak ağrı, nemli ısı ishali, ısı toksini ishali ve travmatik yaralanmalar için kullanılır. Beş Sırtın güneyinde yaygın olarak kullanılan bir klinik ilaçtır ve aynı zamanda ünlü geleneksel Çin patentli ilaçların ve basit preparatların büyük çeşitlilikteki "anti-enflamatuar ve cholagogue tabletlerinin" reçetesi için bir hammaddedir. Çin Farmakopesi (2020 baskısı, Cilt 4), Labiatae familyasına ve Rabdosia cinsine ait bir bitki olan Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara veya Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar'ın kurutulmuş toprak üstü kısmı olarak kaydeder. Guangdong Eyaleti Çin Bitkisel İlaç Standartlarında yer alan orijinal bitki Rabdosia lophanthoides R serra、 İplik desenli kokulu çay ve sebze R Lophanthoides ve lifli çiçek çeşidi R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 Araştırma grubumuzun üyeleri, Xihuangcao tıbbi malzemelerinin germplazm kaynaklarını araştırma ve düzenleme sürecinde, aynı cinse ait bir bitki olan Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara'nın da halk kültüründe Xihuangcao tıbbi malzemeleri olarak yaygın bir şekilde kullanıldığını keşfetti. Bu bitkilerin benzer morfolojik özellikleri nedeniyle, kuru tıbbi malzemeleri görünümlerine göre ayırt etmek zordur ve Xihuangcao ticari tıbbi malzemelerinin çeşit kaynaklarında her zaman bir karışıklık olgusu olmuştur. Bu nedenle, klinik ilaç güvenliğini ve etkinliğini sağlamak ve geliştirmek için farklı Huangcao türleri için tanımlama yöntemleri oluşturmak büyük önem taşımaktadır.

Geleneksel olarak, Xihuangcao tıbbi malzemelerinin farklı orijinal bitkilerinin tanımlanması morfoloji ve mikroskopi açısından incelenmiştir. Bununla birlikte, kuru tıbbi malzemelerin genellikle buruşuk ve kırık olması nedeniyle, bunları doğru ve hızlı bir şekilde tanımlamak zordur. Son yıllarda akademisyenler orijinal bitkiler üzerinde DNA molekülleri ve kimyasal bileşenler düzeyinde tanımlama çalışmaları yürütmüştür. Ancak, moleküler tanımlama Rabdosia serora ve Lycaena angustifolia arasında yalnızca tür düzeyinde ayrım yapabilmektedir ve bu da Lycaena angustifolia'nın orijinal ve varyant çeşitlerini ayırt etmeyi zorlaştırmaktadır. Kimyasal bileşim araştırması açısından, bazı akademisyenler Fourier dönüşümlü kızılötesi spektroskopisi ve iki boyutlu korelasyon kızılötesi spektroskopisinin Xihuangcao, Çizgili Kokulu Çay Sebzesi ve lifli çiçekleri ile dar taban çeşitlerinin tanımlanmasını sağlayabileceğine inanmaktadır. Bazı akademisyenler de kimyasal bileşim içeriği ve parmak izi spektrumlarının tanımlanması üzerine araştırmalar yapmışlardır, ancak deneysel sonuçlar Çizgili Kokulu Çay Sebzesinin orijinal çeşidini varyantlarından çok iyi ayırt edememektedir. Son yıllarda, kemometrik yöntemler geleneksel Çin tıbbının kromatografik analizinde giderek daha yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Kromatografik analizle üretilen büyük miktarda veriyi daha fazla analiz edebilir ve işleyebilirler ve kromatografik analizle birleştirildiklerinde geleneksel Çin tıbbının kalite kontrolünde giderek daha önemli bir rol oynarlar. Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) kısa analiz süresi, iyi ayırma etkisi ve yüksek hassasiyet avantajlarına sahiptir. Bu nedenle, bu çalışmada Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai ve Longye Xiangchacai olmak üzere dört farklı temel bitkiden toplanan 32 parti tıbbi malzemenin karakteristik spektrumlarını incelemek için UPLC kullanılmış ve Xixi için değerli bilgiler sağlamak amacıyla bu dört temel bitkiyi ayırt etmek ve tanımlamak için küme analizi, temel bileşen analizi ve kısmi en küçük kareler diskriminant analizi gibi kemometrik yöntemlerle birleştirilmiştir. Huangcao tıbbi malzemelerinin tanımlanması ve kalitelerinin analizi ve değerlendirilmesi için referans sağlar.

 

Bu çalışmada, test çözeltisinin hazırlama yöntemleri ve kromatografik koşulları taranmış ve optimize edilmiştir. Ekstraksiyon çözücülerinin (metanol, 80% metanol, 60% metanol) araştırma sonuçları, ekstraksiyon çözücüsü olarak metanol kullanıldığında, elde edilen numune kromatogramının daha fazla kromatografik pike, nispeten daha büyük pik alanlarına ve Xihuangcao tıbbi malzemesinin kimyasal bileşimini daha iyi yansıtan sabit bir taban çizgisine sahip olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, Xihuangcao tıbbi malzemesinin karakteristik spektrumu için ekstraksiyon çözücüsü olarak metanol seçildi; Dalga boylarının (250, 254, 260, 280nm) ölçüm sonuçları, 254nm'de birçok kromatografik pik olduğunu ve her pikin boyutlarının tek tip olduğunu gösterdi. Bu nedenle, 254nm tespit dalga boyu olarak seçilmiştir; Mobil fazların (metanol -0.1% formik asit su, asetonitril -0.1% formik asit su, 0.1% formik asit metanol -0.1% formik asit su ve 0.1% formik asit asetonitril -0.1% formik asit su) araştırma sonuçları, metanol -0.Elüsyon için mobil faz olarak 1% formik asit suyu kullanıldığında, taban çizgisinin düz olduğu ve ayırma derecesi ile pik şeklinin iyi olduğu; Kolon sıcaklığı ve akış hızı araştırmasının sonuçları, her bir kromatografik yöntemin ayırma verimliliğinin, kolon sıcaklığı 30 ℃ ve akış hızı 0,3 mL / dak olduğunda en iyi olduğunu göstermiştir.

Bu çalışmada, Xihuangcao şifalı bitkisinin dört temel bitkisinin tanımlanmasına uygulanabilir bir karakteristik harita oluşturmak için UPLC kullanılmıştır. Taban çizgisi düz, ayırma derecesi iyi ve ortak piklerin sayısı büyüktü. Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai ve Longye Xiangchacai'nin oluşturulan kontrol haritalarında sırasıyla 19, 24, 26 ve 21 ortak tepe noktası kalibre edilmiştir. Ortak tepe noktalarındaki farklılıklara dayanarak, dört temel bitki önsel olarak ayırt edilebilir. Toplanan Xianwen Xiangchacai ve Longye Xiangchacai partilerinin sayısının az olması nedeniyle, araştırma sürecinde hatalardan kaçınmak için, ortak pikler incelenirken kalibrasyon için daha yüksek yanıt değerlerine, daha iyi ayırma derecesine ve pik şekline sahip kromatografik pikler seçilmiştir. Benzerlik değerlendirme sonuçları, menşe yerindeki farklılıklar nedeniyle, aynı orijinal tıbbi malzemeler arasında belirli farklılıklar olduğunu göstermektedir; Xihuangcao ile diğer üç temel tıbbi malzeme arasındaki benzerliğin nispeten düşük olduğu ve açıkça ayırt edilebildiği farklı temel tıbbi malzemeler arasında da farklılıklar vardır; Xianhua kokulu çay sebzesi ile Xianwen kokulu çay sebzesi arasındaki benzerlik nispeten yüksektir ve Changye kokulu çay sebzesi ile Xianhua kokulu çay sebzesi arasındaki benzerlik de nispeten yüksektir. Bunun nedeni, Xianhua kokulu çay sebzesi, Xianwen kokulu çay sebzesi ve Changye kokulu çay sebzesinin benzer kimyasal bileşim türlerine sahip buruşuk yapraklı kokulu çay sebzesi grubuna ait bitkiler olması olabilir. Mevcut araştırmalar, Xihuangcao tıbbi malzemelerinin orijinal bitkilerinde bulunan ve esas olarak terpenler, flavonoidler, fenolik asitler ve sterolleri içeren kimyasal bileşen türlerinde çok az fark olduğunu göstermiştir. Bunlar arasında diterpenler, Xihuangcao şifalı bitkisinin önemli bileşenleridir. Orijinal bitki Xihuangcao'da bulunan ana diterpen türü enantiyomerik kaempferol türü iken, doğrusal kokulu çay sebzesi ve lifli çiçek çeşidinin yanı sıra uzun yapraklı kokulu çay sebzesi esas olarak reçine türü ve enantiyomerik reçine türü diterpenler içerir. Xihuangcao ile doğrusal kokulu çay sebzesi, lifli kokulu çay sebzesi ve uzun yapraklı kokulu çay sebzesi arasındaki düşük benzerliğin diterpen türlerindeki farklılıklarla ilişkili olabileceği, doğrusal kokulu çay sebzesi, lifli kokulu çay sebzesi ve uzun yapraklı kokulu çay sebzesi arasındaki farklılıkların ise ilgili bileşenlerinin içeriği ve türleriyle ilişkili olabileceği tahmin edilmektedir.
Temel bileşen analizi, Xihuangcao'nun Çizgili Kokulu Çay Sebzesi, Kokulu Çay Sebzesi ve Uzun Yapraklı Kokulu Çay Sebzesi'nden her bir temel öğenin temel bileşen puanlarındaki farkla daha da ayırt edilebileceğini göstermiştir. Kısmi en küçük kareler diskriminant analizi, çizgi desenli kokulu çay bitkisi, lifli kokulu çay bitkisi ve uzun yapraklı kokulu çay bitkisi olmak üzere üç tür ilkel bitkiyi önemli sınıflandırma etkileriyle ayırt edebilir. Elde edilen 15 sınıflandırma belirteci, bu üç farklı ilkel bitkiyi ayırt etmek için büyük önem taşıyan, üçü arasında farklılıklara neden olan ana karakteristik bileşenlerdir. Bu 15 kromatografik pikin tanımlanması için daha fazla araştırma ve tanımlama yapılması gerekmektedir.
Özetle, bu çalışmada oluşturulan Xihuangcao'nun dört bazal bitkisinin UPLC karakteristik haritaları, karakteristik piklerin kalibrasyonu ve benzerlik değerlendirmesi yoluyla dört farklı bazal bitkiyi önceden ayırt edebilir. Dört orijinal bitki türünü daha iyi ayırt etmek ve diferansiyel bileşenleri araştırmak amacıyla, bu çalışmada ayrıca Xihuangcao'daki dört orijinal bitki türünü tamamen ayırt etmek için küme analizi, temel bileşen analizi ve kısmi en küçük kareler diskriminant analizi kullanılmıştır. Araştırma sonuçları, Xihuangcao tıbbi malzemelerindeki orijinal bitkilerin tanımlanması, kalite analizi ve değerlendirilmesi için bilimsel bir yöntem ve referans sağlamaktadır.