Rezeneden endofitik fungus X-396'nın izolasyonu, tanımlanması ve fermente ürünündeki lipitte çözünen bileşenlerin analizi
Bitki endofitik mantarları, sağlıklı bitki dokularında yaygın olarak bulunan ancak genellikle bitki hastalıklarına neden olmayan mantarları ifade eder. İstikrarlı ekolojik ilişkiler kurmak için konukçu bitkilerle birlikte evrimleşirler ve konukçu bitkininkilerle aynı veya farklı biyoaktif maddeler üretebilirler. Araştırmalar, tıbbi bitkiler de dahil olmak üzere incelenen hemen hemen tüm bitkilerin endofitik mantarlar içerdiğini göstermiştir. Tıbbi bitkilerdeki endofitik mantarlar, çok sayıda ve geniş bir dağılıma sahip, son derece bol ve gelişmekte olan bir mikrobiyal kaynaktır. Birçok konak bitki türü vardır ve bu bitkilerle olan ilişkileri son derece karmaşıktır. Çeşitli aktif ürünler üretebilirler ve geliştirme ve uygulama için geniş beklentilere sahiptirler. Tıbbi bitkilerin yavaş doğal yenilenmesi, aktif bileşenlerin düşük ekstraksiyon oranları ve aşırı insan müdahalesinin neden olduğu biyoçeşitliliğin azalması bağlamında, endofitik mantarlar ve tıbbi bitkilerdeki metabolitleri üzerine derinlemesine araştırma, nadir tıbbi bitkileri korumanın ve tıbbi bileşenlerin büyük ölçekli üretimini sağlamanın etkili yollarından biridir. Son yıllarda araştırmacılar, endofitik mantarların ikincil metabolitlerinden yapısal olarak yeni ve oldukça aktif birçok monomerik bileşik izole etmişlerdir. Fungal metabolizma yoluyla elde edilen doğal ürünler, tıbbi bitkilere kıyasla verim, ekonomi ve çevre koruma açısından önemli avantajlara sahiptir.

Tibet tıbbi bitkileri, büyük sıcaklık farklılıkları, düşük yağış, uzun süre ışığa maruz kalma ve güçlü radyasyona sahip yüksek rakımlı bölgelerde yetişmeleri nedeniyle, benzersiz aktif bileşenler ve biyolojik aktiviteler içerir ve bu da onları önemli bir doğal ilaç veya kurşun bileşik kaynağı haline getirir. Tibet ilacı Hypecoum leptocarpum Hook. f. et Thoms. Papaveraceae familyasındaki Hypecoum cinsinin kurutulmuş bütün bir bitkisidir. Tibet ilacı "Balbada" olarak adlandırılır ve acı bir tada ve soğuk bir yapıya sahiptir. Isıyı temizleme, detoksifiye etme, anti-enflamatuar ve analjezik etkilere sahiptir. Esas olarak grip, zatürre öksürük, eklem ağrısı, boğaz ağrısı tedavisinde kullanılır, gıda zehirlenmesini hafifletir ve ateşe neden olan çeşitli bulaşıcı hastalıklar için uygundur. Şu anda, bu tıbbi bitki üzerine yapılan araştırmalar esas olarak bitki kaynaklarına, kimyasal bileşime ve biyolojik aktiviteye odaklanmakta, endofitik mantarlarına çok az dikkat edilmektedir. Bu nedenle, aktif bileşiklerin çıkarılması büyük bir araştırma değerine ve bilimsel öneme sahiptir. Bu çalışmada rezeneden endofitik bir mantar olan X-396 izole edilmiş, saflaştırılmış ve tanımlanmıştır. Fermantasyon ürününün lipitte çözünen bileşenleri GC-MS teknolojisi ile analiz edilmiş ve anti-tümör aktivitesi CCK-8 yöntemi ile incelenmiştir. Rezene endofitik fungal kaynaklarının etkin kullanımı ve gelecekte yeni anti-tümör aktif öncü bileşiklerin geliştirilmesi için belirli bir veri temeli ve referans değeri sağlaması beklenmektedir.

Bu çalışmada, rezenede endofitik mantar X-396'nın fermente ürününün lipitte çözünen bileşenleri GC-MS ile analiz edilmiştir. Lipofilik bileşenlerinin uçuculuğunu arttırmak ve benzer bileşenleri ayırmak için bu çalışmada GC-MS analizinden önce türevlendirme işlemi uygulanmıştır. GC-MS analiz sonuçları, ana bitki rezenede tanımlanan 17 lipitte çözünen bileşenle karşılaştırıldığında, endofitik mantar X-396'nın fermente ürünündeki lipitte çözünen bileşenlerin biyoaktif bileşenlerinin daha çeşitli olduğunu ve büyük miktarda sterol bileşiği içerdiğini göstermiştir. Bitki sterollerinin benzer yapısı nedeniyle, türlerini doğru bir şekilde tanımlamak zordur. Bu çalışmada, türevlendirme ve GC-MS tespiti için üç standart brassinosteroid, stigmasterol ve β - sitosterol örneği seçildi ve sonuçta X-396 fermantasyon ürününün lipitte çözünen bileşenlerindeki sterol türleri belirlendi. Ergosterol ve β - sitosterolün göreceli içerikleri sırasıyla 31.83% ve 12.00% idi. Ergosterol fungal hücre membranlarının önemli bir bileşenidir. Kararlı yapısı ve güçlü özgüllüğü nedeniyle, içeriği mantar biyokütlesinin bir göstergesi olarak kullanılabilir ve insan vücudu tarafından kalsiyum ve fosfor emilimini teşvik eder. İnsan vücudu için iyi eksojen D2 vitamini kaynaklarından biridir. β - sitosterol, genetik veya hücresel toksisite üretmeyen güvenli, doğal, yeşil ve etkili bir insan besin takviyesidir. Klinik deneyler ve model hayvanlarda yapılan çalışmalar, β - sitosterolün kolesterol düşürücü, kan şekeri düşürücü, antioksidan, anti-inflamatuar, antibakteriyel ve antikanser özellikleri gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğunu doğrulamıştır.

GC-MS analizi yoluyla, X-396 fermantasyon ürününden metil hekzadekanoat, lake ağacı asidi ve skualen gibi aktif bileşenler tanımlanmıştır. Bunlar arasında metil hekzadekanoat, fagositik aktiviteyi ve bağışıklık tepkisini inhibe edebilen bir akar öldürücü bileşiktir. Ayrıca anti-enflamatuar etkilere sahip olduğuna dair literatür raporları da bulunmaktadır. Lak ağacı asidinin anti-enflamatuar ve anti anjiyojenik etkileri vardır. Skualen, steroid sentezi için bir öncü madde olarak metabolizmaya katılır ve β - karoten, koenzim Q10, D vitamini, E vitamini ve K1 vitamini sentez yollarında önemli bir rol oynar. Bu nedenle skualen, anti-enflamatuar, antioksidan, cilt ve kardiyovasküler korumada önemli roller oynayabilir.

İn vitro aktivite taraması açısından, X-396 fermantasyonunun lipitte çözünen bileşenleri HepG hücrelerine karşı daha iyi anti-tümör aktiviteye sahiptir. Bu çalışma rezenenin endofitik fungal fermantasyon ürünlerinin bileşimi üzerine yapılan araştırmaları zenginleştirmekte ve rezenenin endofitik fungal fermantasyon ürünlerinin sonraki aktivite araştırmaları için belirli veri referansı ve bilimsel temel sağlamaktadır.