UPLC Özellik Haritası ve Bir Test Çoklu Değerlendirme Yöntemine Dayalı Verbena Kalite Değerlendirmesi ve Standart Dekoksiyon Dozajının Aktarım Yasası Üzerine Araştırma
Verbenaceae familyasından Verbena officinalis L. bitkisinin kuru toprak üstü kısmı olan mine çiçeği ilk olarak "Ünlü Hekimler Kataloğu "nda kaydedilmiş ve alt sınıf olarak sınıflandırılmıştır. Mine çiçeğinin kimyasal bileşenleri başlıca iridoid glikozitler, flavonoidler, steroller, triterpenler, polifenoller, uçucu yağlar, tanenler, beta karoten, kafeik asit, şekerler vb.dir. Ana aktif bileşenler iridoid glikozitlerdir. Serin bir doğası, acı bir tadı vardır ve karaciğer ve dalak meridyenlerine aittir. Kan dolaşımını teşvik etme, kan stazını dağıtma, detoksifiye etme, diürezi teşvik etme, sarılığı azaltma ve sıtmayı durdurma etkilerine sahiptir. Klinik olarak, dismenore, amenore, farenjit, apse, ödem, sarılık ve sıtma gibi semptomların birikmesi için kullanılır. Mine çiçeğinin kaynakları bol olup, bunlar arasında iridoid glikozitlerin antioksidan, hepatoprotektif, nöroprotektif, kalp ve beyin iskemisine karşı koruyucu, anti-enflamatuar vb. gibi çeşitli etkileri vardır. Çin bitkisel dekoksiyonları (standart dekoksiyonlar) klinik uygulamada en yaygın kullanılan geleneksel Çin tıbbı bileşik preparatlarıdır ve aynı zamanda Çin tıbbı tarihinde en uzun ve en yaygın kullanılan preparatlardır. Geleneksel Çin tıbbı dekoksiyon parçaları, kırık duvar dekoksiyon parçaları, geleneksel Çin tıbbı formül granülleri ve diğer yeni Çin tıbbı dekoksiyon parçaları olsun, hepsi dekoksiyon veya suyla yıkama yoluyla alınır. Bu nedenle, diğer Çin tıbbı preparatlarının incelenmesi için tercih edilen kontrol olarak standart kaynatma araştırmasının kullanılması büyük önem taşımaktadır. Bu çalışma, geleneksel Çin tıbbı mine çiçeği formülasyonlarının araştırılması ve kalite değerlendirmesi için temel oluşturarak, kaynatma parçalarından standart kaynatmalara kantitatif transfer yasasını açıklamaktadır.
Bu çalışma, verbascoside dilimlerinde verbascoside, 5-hydroxyverbascoside ve verbascoside hazırlanmasına odaklanmakta ve UPLC karakteristik haritasını oluşturmaktadır. Harita bilgileri kimyasal mod analizi kullanılarak analiz edilir ve verbascoside, 5-hydroxyverbascoside ve verbascoside içeriği, bir test çoklu değerlendirme yöntemi ile birlikte ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile aynı anda belirlenir. Sonuçlar harici standart yöntemle elde edilenlerle karşılaştırılır. Standart kaynatma verimi, verbascoside, 5-hydroxyverbascoside ve verbascoside içeriği ölçülür, transfer oranı hesaplanır ve buna dayanarak, çeşitli kalite göstergelerinin rasyonelliğini göstermek için verbascoside kaynatma parçalarının standart kaynatmaya transferi üzerine bir çalışma yürütülür.

Mine çiçeği numunesinin karakteristik spektrumunun izokratik elüsyonu bazal ayrımı sağlayamaz, bu nedenle gradyan elüsyon kullanılmıştır. Ön deneylerde, bu çalışmada metanol su, asetonitril su, asetonitril-0.1% fosforik asit çözeltisi ve asetonitril-0.05% fosforik asit çözeltisi gibi mobil fazlar karşılaştırılmıştır. Son olarak, mobil faz olarak asetonitril-0.05% fosforik asit çözeltisi seçilmiştir. Yukarıdaki kromatografik koşullar altında, kromatografik pik ayrımı, teorik plaka sayısı ve pik şekli parametrelerinin tümü iyiydi. Bu çalışmada ekstraksiyon çözücüsü, ekstraksiyon yöntemi ve süresi ile katı-sıvı oranının ekstraksiyon verimliliği üzerindeki etkilerini araştırmak için tek faktörlü bir deneysel sistem kullanılmıştır. Sonuçlar, ekstraksiyon çözücüsü 80% metanol, katı-sıvı oranı 1:50 (g/mL) olduğunda ve reflü ekstraksiyonu 120 dakika boyunca gerçekleştirildiğinde ekstraksiyon verimliliğinin en yüksek olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, mine çiçeği dilimleri için ekstraksiyon yöntemi olarak yukarıdaki yöntem kullanılmıştır.
Geleneksel Çin tıbbında çoklu indeks bileşenlerinin genel kalite kontrolü, geleneksel Çin tıbbı kalite kontrolünün geliştirilmesinde kaçınılmaz bir eğilim haline gelmiştir. Karakteristik/parmak izi spektrumu etkili bir kalite değerlendirme yöntemidir ve tek test çoklu değerlendirme analiz yöntemiyle birleştirilmesi kalite değerlendirmesinin bütünlüğünü ve doğruluğunu sağlayabilir. Bu çalışmada, verbascoside kaynatma parçalarının UPLC karakteristik haritası oluşturulmuş, 5 ortak pik belirlenmiş ve 3 bileşen tanımlanmıştır. Analiz süresi HPLC'ye kıyasla önemli ölçüde kısalmış ve kromatografik koşullar 5-hidroksiverbascoside, verbascoside ve verbascoside içeriğinin belirlenmesi için kullanılabilmiştir. Temel bileşen analizi, karakteristik piklerin pik alanı üzerinde gerçekleştirilmiş ve temel bileşenlerin kapsamlı değerlendirme modeli, mine çiçeğinin kalite değerlendirme ve analiz yöntemini daha da geliştirmiştir.

Mine çiçeğinin 2020 Çin Farmakopesi'ndeki içerik belirleme endeksi, her ikisi de düşük polariteye ve düşük suda çözünürlüğe sahip triterpenoidler olan toplam oleanolik asit ve ursolik asit miktarıdır. Ön deneysel araştırma sonuçları, standart mine çiçeği kaynağındaki toplam oleanolik asit ve ursolik asit içeriğinin 2.0 mg/g'dan az olduğunu ve transfer oranının 6%'den az olduğunu göstermektedir. Bu nedenle, özellik haritasına dayalı olarak, 5-hidroksi verbascoside, verbascoside ve verbascoside içeriğinin belirlenmesi için çoklu bir değerlendirme yöntemi oluşturulmuştur. Mine çiçeğinin polar bileşenleri esas olarak sikloheksen eter terpenlerdir; bunlar arasında verbascoside ve 5-hydroxyverbascoside en yüksek içeriğe sahip ana bileşenlerdir ve standart kaynatma daha yüksek bir aktarım oranına sahiptir. Bazı partilerin transfer oranı 100%'yi aşarken, 5-hidroksi verbascoside ve verbascoside'in toplam transfer aralığı 56.6% ile 91.2% arasındadır. Bunun olası nedeni, benzer bileşenlerin ısıtma, kaynatma ve diğer işlemler sırasında yapısal dönüşüme uğramasıdır. Verbascoside, 5-hydroxyverbascoside ve verbascoside içeriği ve aktarım oranı açısından 18 parti standart verbascoside kaynatma arasında farklılıklar vardır ve bu farklılıklar kaynatma parçalarının içeriği ve dokusuyla ilgili olabilir. Bazı kaynatma parçaları daha açık renklere, daha uzun depolama sürelerine ve işleme sırasında daha fazla döküntüye sahiptir, bu da içerik ve aktarım hızındaki büyük dalgalanmaların nedeni olabilir. Seçilen üç bileşen mine çiçeğinde yüksek bir içeriğe sahiptir ve antioksidan, hepatoprotektif, nöroprotektif, kalp ve beyin iskemisini koruyucu, anti-enflamatuar ve diğer yönlerden iyi farmakolojik aktivitelere sahiptir. Bunlar, mine çiçeğinin farmakolojik etkilerini göstermesi için ana malzeme temellerinden biridir.

Tek test çoklu değerlendirme yönteminin sonuçları, harici standart yönteme kıyasla önemli bir fark göstermemiştir ve mine çiçeğindeki çoklu bileşenlerin kantitatif analizi için kullanılabilir. Çoklu indeks bileşeni tek ölçüm çoklu değerlendirme yöntemi ile birleştirilmiş UPLC özellik haritası, mine çiçeği ve mine çiçeği Çin bitkisel preparatlarının üretim sürecinin araştırılması ve kalite değerlendirmesi için referans sağlayabilir.