Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının Farklı Kısımlarındaki Çok Değişkenli Aktif Bileşenlerin UFLC-QTRAP-MS/MS Teknolojisi Kullanılarak Analizi
San Ye Qing, üzüm ailesinden Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg'in (THDG) kökü veya bütün bitkisidir. Uzun bir tıbbi kullanım geçmişine sahiptir ve "Yeni Zhejiang Sekiz Lezzeti "nden biridir. Isıyı temizleme ve detoksifiye etme, kan dolaşımını teşvik etme ve rüzgarı uzaklaştırma etkilerine sahiptir. Özellikle yüksek ateş, zatürre, astım, hepatit, romatizma, skrofula ve düşme sonucu oluşan yaralanmalarda kullanılır. Modern farmakolojik araştırmalar San Ye Qing'in anti-tümör, antioksidan, anti-enflamatuar, antibakteriyel, antipiretik, analjezik ve bağışıklık düzenleyici gibi farmakolojik etkilere sahip olduğunu göstermiştir.
Üç Yapraklı Uçurum Tırmanma Asması esas olarak Yangtze Nehri'nin güney bölgesinde yetişir ve Zhejiang'ın halk bölgelerinde uzun bir tıbbi kullanım geçmişine sahiptir. Bütün bitkisi ve kökü kullanılabilir. Son yıllarda yapılan çalışmalarda, farklı tıbbi kısımları arasında kimyasal bileşim ve farmakolojik aktivite açısından önemli farklılıklar bulunmuştur. Örneğin, yer üstü ekstraktının antioksidan aktivitesi yer altı ekstraktından önemli ölçüde daha yüksekken, yer altı ekstraktının hidroksil radikal süpürme aktivitesi yer üstü ekstraktından önemli ölçüde daha yüksektir. San Ye Qing şu anda sadece yerel geleneksel Çin tıbbı standartlarına ve spesifikasyonlarına dahil edildiğinden, gösterge bileşenleri açıkça tanımlanmamıştır. Son yıllarda yapılan araştırmalar, flavonoidler, fenolik asitler, polifenoller, polisakkaritler ve San Ye Qing'in diğer aktif bileşenlerine ek olarak, tanenler, amino asitler ve nükleozitlerin de potansiyel fizyolojik aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir. Bunlar arasında, antosiyaninler B2 gibi tanen bileşenlerinin mide kanseri üzerinde inhibitör etkileri vardır, amino asit bileşenlerinin karaciğer hasarı üzerinde iyi terapötik etkileri vardır ve nükleosit bileşenlerinin iyi antibakteriyel ve antiviral etkileri vardır. Şu anda, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanma Asmasının farklı kısımlarının aktif bileşenleri üzerine yapılan araştırmalar, esas olarak toplam flavonoidler, toplam fenolik asitler ve toplam polisakkaritlere odaklanmakta ve çoklu aktif bileşen kategorilerinin birkaç eşzamanlı içerik tayini yapılmaktadır. Farklı parçaların kalite değerlendirmesi ve kontrolü için kullanılan analiz yöntemleri temel olarak yüksek performanslı sıvı kromatografisi, gaz kromatografisi-kütle spektrometresi ve sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi teknolojisini içermektedir. Bu nedenle, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının farklı kısımlarının kalite kontrolü ve rasyonel kaynak kullanımı için referans veriler sağlamak amacıyla, farklı kısımlardaki aktif bileşenlerin içeriğini belirlemek ve kalite değerlendirmesi yapmak için hızlı bir yöntem oluşturmak gerekir.
Ultra hızlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi üçlü kuadrupol doğrusal iyon tuzaklı kütle spektrometresi (UFLC-QTRAP-MS/MS) teknolojisi yüksek ayırma, yüksek seçicilik ve yüksek hassasiyete sahiptir ve karışık bileşikleri hızlı bir şekilde ayırabilir ve tanımlayabilir. Trifolium repens'in çok bileşenli kompleks sistemlerinin ayrıştırılması ve analizi için uygundur. Bu nedenle, bu çalışmada Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının kökleri, gövdeleri ve yaprakları deneysel nesneler olarak kullanılmış ve UFLC-QTRAP-MS/MS teknolojisi ile 60 aktif bileşen aynı anda belirlenmiştir. Temel bileşen analizi (PCA), kısmi en küçük kareler regresyon analizi (PLS-DA) ve varyans analizi gibi çok değişkenli istatistiksel analiz yöntemleri, farklı parçalar arasındaki aktif bileşenlerdeki farklılıkları ayırt etmek ve ortaya çıkarmak için kullanılmış ve farklı parçaların kalitesini değerlendirmek için gri ilişkisel analiz (GRA) uygulanmıştır. Bu çalışmanın sonuçları, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının farklı tıbbi kısımlarındaki çeşitli aktif bileşenlerin hızlı bir şekilde ölçülmesi ve kalite kontrolü için metodolojik referanslar sağlayabilir ve kaynaklarının rasyonel gelişimi ve kullanımı için temel oluşturabilir.

Araştırma sonuçları, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının kök, gövde ve yapraklarının kalitesinde önemli farklılıklar olduğunu ve bazı bileşenlerin içeriğinde önemli farklılıklar olduğunu göstermektedir. PLS-DA, VIP değeri ve varyans analizi yoluyla farklı kısımları ayırt etmek için aktif bileşen belirteçleri olarak sekiz bileşik seçilmiştir. Bunlar arasında, vitexin, isovitexin, paeoniflorin ve isopaeoniflorin yapraklarda, gövdelerde ve yumrularda yüksek ila düşük bir içerik eğilimi göstermiştir ve hepsi flavonoid karbon glikozit bileşikleridir. Flavonoid karbon glikozitlerin güçlü DPPH radikali temizleme kabiliyeti nedeniyle, bu deneyin sonuçları Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının toprak üstü kısmının antioksidan aktivitesinin toprak altı kısmından daha yüksek olduğu sonucuna varmak için veri referansı da sağlayabilir. Buna ek olarak, gövdelerdeki proantosiyanidin B2 içeriği 5029.22 μ g/g kadar yüksektir ve bu değer kökler ve yapraklardakinden sırasıyla 4 kat ve 15 kat daha yüksektir. Ayrıca önemli antioksidan ve anti-tümör aktivitelerine sahiptir, bu da proantosiyanidin bileşenlerinin bitkinin farklı kısımlarındaki metabolik aktivitelerde önemli bir rol oynayabileceğini göstermektedir. Gri ilişkisel analizdeki bağıl korelasyon (ri) değeri kök, gövde ve yaprak örneklerinin kalite derecelerini sıralamak için kullanılabilir. Nihai sonuçlar, yaprak örneklerinin (S7-S12) daha üst sıralarda yer aldığını ve kalitelerinin gövde ve kök örneklerinden daha iyi olduğunu göstermektedir.

Özetle, bu çalışmada Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının farklı kısımlarındaki 60 aktif bileşeni eş zamanlı olarak belirlemek için ultra hızlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi üçlü kuadrupol doğrusal iyon tuzaklı kütle spektrometresi (UFLC-QTRAP-MS/MS) kullanılarak bir yöntem oluşturulmuş ve çok değişkenli istatistiksel analiz kullanılarak farklı kısımlar karşılaştırılmış ve değerlendirilmiştir. İçerik belirleme sonuçları, çeşitli kısımlarda bol miktarda aktif bileşen türü olduğunu ve bunlar arasında yapraklardaki çoklu aktif bileşenlerin toplam içeriğinin gövde ve yumrulardakinden daha yüksek olduğunu göstermektedir. Buna ek olarak, temel bileşen analizi gibi çok değişkenli istatistiksel analiz, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının farklı kısımlarının aktif bileşenlerinde önemli farklılıklar olduğunu göstermiş ve vitexin, isovitexin, icariin, isoicariin, proanthocyanidin B2, tyrosine, phenylalanine ve leucine olmak üzere sekiz önemli ölçüde farklı bileşen ortaya çıkarmıştır. Gri korelasyon analizi, yaprak kısımlarının kalitesinin nispeten daha iyi olduğunu, bunu gövde ve yumruların izlediğini göstermektedir. Bu çalışmanın sonuçları, Üç Yapraklı Uçurum Tırmanıcı Asmasının farklı kısımlarındaki aktif bileşenlerin belirlenmesi ve kalite kontrolü için metodolojik bir referans sağlamakta ve kaynaklarının rasyonel gelişimi ve kullanımı için temel oluşturmaktadır.